基于差异蛋白质组学研究刮痧干预腰椎间盘突出症的效应机制

发布时间：2018-03-30 02:20

  本文选题：刮瘀　切入点：腰椎间盘突出症　出处：《南京中医药大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的(1)在既往研究的基础上,采用腰椎间盘突出症(LIDH)大鼠模型,用特定的刮痧方法进行干预,深入探讨刮痧治疗LIDH神经调节功能、抗炎、提高免疫力等作用效应;(2)利用蛋白质组学iTRAQ标记的液质联用技术,观察刮瘀干预LIDH大鼠模型背根神经节(DRG)组织中的差异蛋白质的动态变化,探讨刮痧治疗LIDH密切相关的网络途径和可能作用靶点,寻找与LIDH相关的标志性内容物,为揭示刮痧治疗效应机制提供客观依据,为临床合理应用刮痧法治疗LIDH提供依据。方法(1)效应实验研究将72只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、刮痧组,每组24只。采用自体髓核移植法建立腰椎间盘突出症大鼠模型。刮痧组于造模后第5天开始刮痧,假手术组及模型组不予干预措施。分别于造模后第4天(干预前)、干预后第6天、干预后第12天、干预后第18天(干预结束后)麻醉处死取材。利用HE染色法检测大鼠背根神经节的形态学变化,利用免疫组化法检测大鼠背根神经节中神经生长因子(NGF)、P物质(SP)、炎性细胞因子磷脂酶A2(PLA2)和前列腺素E2(PGE2)的含量。应用酶联免疫法(ELISA)检测大鼠血清中免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)的含量。(2)蛋白质组学实验研究36只雄性SD大鼠为研究对象,进行腰椎间盘突出造模,造模后随机分为6组,刮痧Ⅰ组,刮痧Ⅱ组,刮痧Ⅲ组,模型Ⅰ组,模型Ⅱ组,模型Ⅲ组,每组各6只。模型组不予治疗,刮痧组于造模后第5天开始刮痧。刮痧Ⅰ组,刮痧Ⅱ组,刮痧Ⅲ组分别进行1周、2周、3周的刮痧干预。模型Ⅰ组,模型Ⅱ组,模型Ⅲ组分别进行1周、2周、3周的观测。各组干预或观测结束后分别采集大鼠的背根神经节标本。运用蛋白质组学方法,以TMT标记结合LC-MS/MS法,找到各组背根神经节差异蛋白表达谱,应用GO和IPA软件,找出刮痧干预LIDH机制相关的生物标志物。结果(1)效应实验研究① 背根神经节病理切片结果假手术组神经节细胞形态正常,无炎症免疫反应。模型组神经节细胞明显肿胀,胞内尼氏小体颜色变浅,胞浆呈空泡样改变,细胞核部分消失,炎症免疫反应明显。刮痧组少数神经节细胞空泡变性,少数神经细胞溶解,炎症免疫反应与形态学改变较模型组程度明显减轻。②与假手术组相比,模型组的NGF、SP、PLA2、PGE2、IgG和IgM的表达维持在较高水平,差异具有统计学意义(P0.05),不同治疗时间(6、12、18天)刮痧组的SP、PLA2、PGE2、IgG和IgM的表达水平与模型组相比明显降低(P0.05),时间越长,降低越明显,且各组间两两比较差异均具有统计学意义(P0.05)。不同治疗时间(6、12、18天)刮痧组NGF的表达水平与模型组相比明显升高(P0.01),时间越长,升高越明显,且各组间两两比较差异均具有统计学意义(P0.05)。(2)蛋白质组学实验研究刮痧干预后各组背根神经节中共鉴定出453种差异蛋白,刮痧Ⅰ组/模型Ⅰ组差异蛋白表达上调89个蛋白,下调81个蛋白;刮痧Ⅱ组/模型Ⅱ组差异蛋白表达上调56个蛋白,下调88个蛋白;刮瘀组Ⅲ组/模型Ⅲ组差异蛋白表达上调58个蛋白,下调81个蛋白。差异蛋白生物功能分析在分子功能上主要涉及粘合物,催化活性,结构分子活性,转运蛋白活性,信号传感器活性,分子功能调节剂等;在生物进程上主要涉及细胞进程,生物调节,代谢进程,细胞组成组织,刺激反应等。差异蛋白功能主要涉及凋亡、细胞形态、神经传递、神经细胞的粘附、蛋白质合成、氧化应激、炎症反应、免疫反应、小分子化合物等多方面。通路分析主要涉及整连蛋白信号通路、ILK信号通路、肌动蛋白细胞骨架信号和三磷酸肌醇合成通路等;得到细胞形态、细胞功能和维护、细胞间信号与相互作用、小分子生物化学、氨基酸代谢、炎症反应、蛋白质合成等亚网络分析图谱。刮痧Ⅰ组/模型Ⅰ组筛选出SOD1、HTT、EFNA3、AGT、TNF等10个上游因子。刮痧Ⅱ组/模型Ⅱ组筛选出SOD1、HTT、EPO、APP、NGF等10个上游因子。刮痧Ⅲ组/模型Ⅲ组筛选出SOD1、HTT、ILK、MAPK1、IL1B等10个上游因子。结论(1)效应实验研究刮痧可以有效减轻大鼠背根神经节的病理损伤,抑制背根神经节中炎性因子SP的表达,促进背根神经节中NGF的增长,同时有效抑制背根神经节局部炎症因子PLA2和PGE2以及血清免疫物质IgG和IgM的表达,起到神经修复、抗炎和神经免疫调节的作用。(2)蛋白质组学实验研究刮痧干预后模型大鼠体内发生多种蛋白差异变化,参与神经元细胞增殖、凋亡、免疫、代谢等多条通路和亚网络调节,筛选出其上游调节因子,提示其可能作为刮痧的潜在治疗靶点。这些可能是刮痧治疗腰椎间盘的作用机制。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R244.4

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本文编号：1683930