调脂颗粒对内皮细胞的自噬的干预研究

发布时间：2018-04-04 21:36

  本文选题：自噬　切入点：中医药　出处：《南京中医药大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:研究调脂颗粒对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vascular endothelial cell,HUVEC)在细胞、蛋白质、分子水平自噬的影响,从而探讨调脂颗粒抗动脉粥硬化的作用机制。方法:运用血清药理学方法,以调脂颗粒含药血清处理生理状态及病理状态(过度自噬状态)下的内皮细胞。通过MTT比色法检测调脂颗粒含药血清对内皮细胞生长的影响。Westernblot检测内皮细胞内自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的相对表达量变化,免疫荧光法检测内皮细胞内自噬小体的数目变化,SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR检测内皮细胞内自噬相关基因mTOR、ATG5、ATG7、Beclin-1的相对表达量变化。结果:调脂颗粒含药血清处理内皮细胞后,较空白组,细胞活力无明显改变,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的相对表达上调,LC3自噬小体数量增加(p0.05),Beclinl在分子及蛋白层面表达均无明显差异(p0.05)。雷帕霉素(Rapamycin,Rapa)处理内皮细胞后,较空白组比较自噬相关蛋白及相关基因表达上调。调脂颗粒含药血清联合雷帕霉素处理HUVEC后,细胞活力无明显改变,较雷帕霉素单独处理比较,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的相对表达显著下降,LC3自噬小体数量明显减少(p0.05或p0.01),各自噬相关基因表达均上调,Beclin-1在分子及蛋白层面表达均无明显差异(p0.05)。3MA(6-氨基-3-甲基嘌呤,3-Metllyladenine)联合雷帕霉素组与雷帕霉素组在各蛋白及分子水平存在明显差异(p0.05),但与各浓度调脂颗粒含药血清联合雷帕霉素处理组无明显差异(p0.05)。结论:在蛋白及分子水平层面,调脂颗粒上调生理状态下内皮细胞自噬,抑制病理状态下内皮细胞自噬,验证了调脂颗粒可促进内皮细胞适度自噬,抑制内皮细胞过度自噬,这可能是其抗动脉粥样硬化的作用机制之一。各调脂颗粒药物组与相关对照组的LC3表达存在差异,而Beclinl的表达无明显差异,这说明调脂颗粒通过调控与LC3合成相关的信号通路从而调控内皮细胞自噬。
[Abstract]:Aim: to study the effect of Tiaozhi granules on autophagy of human umbilical vascular endothelial cells in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) at cell, protein and molecular levels, and to explore the mechanism of Tiaozhi granule in preventing atherosclerosis.Methods: serum pharmacological method was used to treat endothelial cells in physiological and pathological state (hyperautophagy) with Tiaozhi granule.The effect of Tiaozhi granule serum on the growth of endothelial cells was detected by MTT colorimetry. Western blot was used to detect the relative expression of autophagy associated protein LC3- 鈪，

本文编号：1711768