芒果苷在大鼠体内血浆蛋白结合率及组织分布研究
本文选题:LC-MS/MS + 芒果苷 ; 参考:《广州中医药大学》2017年硕士论文
【摘要】:目的:1.建立准确,可靠,高效的液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)法测定大鼠血浆和磷酸盐缓冲液(PBS)中芒果苷的质量浓度;2.利用平衡透析法的原理,联合已建立的LC-MS/MS法考察芒果苷在糖尿病大鼠以及正常大鼠血浆中的蛋白结合率,并比较其差异性;3.建立准确,可靠,灵敏度高的液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)法测定大鼠血浆和各组织匀浆中芒果苷的质量浓度;4.采用已经建立的LC-MS/MS法考察芒果苷单体在正常大鼠体内的组织分布特征;并与知母单煎液、黄柏知母药对煎液给药后芒果苷的组织分布情况进行比较;考察糖尿病大鼠灌服同等剂量黄柏知母药对后芒果苷在体内的组织分布特征,同时比较与正常大鼠组间的分布差异性。方法:1.芒果苷在大鼠血浆和PBS缓冲液中测定方法的建立:以芦丁为内标,大鼠血浆样品采用蛋白沉淀法进行预处理,提取剂为乙腈:乙酸(9:1);色谱柱为日本资生堂CAPCELL PAK C18柱(150 mm×2.0 mm,5 μm);洗脱方式:等度洗脱;分析时间:5min;流速:0.25 mL·min~(-1);柱温:30℃;进样量:5 μL。检测方式为正离子多离子反应(MRM),用于定量分析的离子对为:m/z423.0→273.2(芒果苷);m/z611.5→303(内标芦丁)。2.血浆蛋白结合率的测定:正常SD雄性大鼠随机分为正常对照组和糖尿病模型组,利用平衡透析法的原理,联合已建立的LC-MS/MS法测定大鼠血浆和PBS缓冲液中芒果苷的质量浓度,根据相应公式计算芒果苷在糖尿病大鼠与正常大鼠血浆中的蛋白结合率,对所得数据进行统计学分析。3.芒果苷在大鼠血浆和组织匀浆中测定方法的建立:以芦丁为内标,大鼠血浆和组织匀浆样品均采用蛋白沉淀法预处理,血浆中提取剂为乙腈:乙酸(体积比9:1),组织匀浆中提取剂为乙腈:乙酸(体积比40:1);色谱柱为日本资生堂CAPCELLPAKC18柱(150mm×2.0mm,5 μm);洗脱方式:梯度洗脱;总分析时间:7min;流速:300μL·min~(-1);柱温:35 ℃;进样量:10 μL。检测方式为正离子多离子反应(MRM)。4.芒果苷在正常大鼠及糖尿病大鼠体内组织分布的研究:正常大鼠分别单次灌胃芒果苷单体液、知母单煎液、黄柏知母药对煎液;糖尿病大鼠单次灌胃黄柏知母药对煎液后分别按不同时间点(6个)取样(芒果苷剂量均为35mg·Kg~(-1)),分离血浆及各组织脏器,利用已建立的LC-MS/MS法测定大鼠血浆和各组织匀浆中芒果苷的质量浓度,计算芒果苷在各组织中的分布含量;考察芒果苷单体在正常大鼠体内的分布特征,比较芒果苷单体组与知母单煎液组及黄柏知母药对组中组织分布的异同;同时考察同等剂量黄柏知母药对煎液给药后,比较芒果苷在正常大鼠与糖尿病大鼠体内的组织分布差异。结果:1.芒果苷在大鼠血浆与磷酸盐缓冲液(PBS)中定量分析方法的建立:大鼠血浆和磷酸盐缓冲液(PBS)中,芒果苷分别在200~3000 ng·mL~(-1)(r=0.9983),50~2000 ng· mL~(-1)(r=0.9979)范围内线性关系良好,准确度均在94.7%~108.6%间,日内、日间相对标准偏差(RSD)均小于11.3%;提取回收率在73.3%~73.7%间,基质效应在67.2%~73.5%间。2.血浆蛋白结合率的测定:PBS缓冲液中芒果苷的质量浓度为100,200,500 ng· mL~(-1)时,芒果苷与糖尿病大鼠的平均血浆蛋白结合率分别为:(84.5±1.4)%、(82.6±1.4)%、(82.4±1.7)%;与正常大鼠的平均血浆蛋白结合率分别为:(65.5±0.6)%、(66.6±1.0)%、(68.4±0.7)%,两者比较差异有统计学意义(P0.01),芒果苷在糖尿病大鼠中的平均血浆蛋白结合率高于正常大鼠。3.芒果苷在大鼠血浆和组织匀浆中定量分析方法的建立:血浆中芒果苷的线性范围为1~600 ng · mL~(-1),组织匀浆中芒果苷的线性范围分别为:2~500 ng · mL~(-1)、5~2000 ng·L~(-1),结果显示芒果苷在上述标线范围内线性关系良好;方法准确度在97.2%~111.7%间,日内、日间相对标准偏差(RSD)均小于14.0%;提取回收率在30.2%~84.2%间,基质效应均在30.6%~78.0%间。4.芒果苷组织分布学的研究:芒果苷单体灌胃给药后,除大脑中未检测到芒果苷外,心、肝、脾、肺、肾、胃、肠、骨骼肌以及胰腺组织中在给药后10min均可检测到芒果苷;芒果苷单体组中各组织中分布含量普遍低于知母单煎液组及黄柏知母药对煎液组;正常大鼠体内知母配伍黄柏给药后,各组织分布中的含量普遍低于知母单煎液组,而配伍组中胰腺组织的分布含量则明显高于知母单煎液组及同组中其它各组织;糖尿病大鼠与正常大鼠分别口服黄柏知母药对煎液后,糖尿病大鼠组中胰腺和小肠组织的分布含量虽然较正常大鼠降低,但仍明显高于其他组织;肝、脾、肺、肾、胃及血浆中的分布含量均高于正常大鼠组。结论:(1)本文建立的两种液相色谱-质谱(LC-MS/MS)法快速、准确、可靠,测定方法可满足方法学的分析要求,适用于血浆、磷酸盐缓冲液(PBS)及组织匀浆中生物样品的测定。(2)芒果苷在糖尿病大鼠与正常大鼠血浆中蛋白结合率的比较具有显著性差异,且糖尿病大鼠组的血浆蛋白结合率高于正常大鼠组。(3)正常大鼠予以芒果苷单体给药后,芒果苷分布快速且广泛,但组织分布含量低,胃和小肠中分布最多,脑无分布;知母单煎液组中芒果苷的组织分布含量明显高于单体组,提示中药知母中的其它有效成分可能促进了芒果苷的组织分布,不同成分共同作用后对机体产生了协同作用;知母配伍黄柏灌胃给药后,胰腺组织中的分布含量明显增加,提示黄柏中的某些成分可能促进了胰腺的组织分布;大鼠疾病微环境也会影响芒果苷的吸收,糖尿病大鼠口服黄柏知母药对煎液后与正常大鼠组相比芒果苷在肝、脾、肺、肾、胃等组织中分布含量较高,同时这些脏器也是糖尿病大鼠及其并发症的主要病变部位,根据药物的组织分布特点,可以有效预测药物作用的靶器官,对扩大芒果苷临床用途有着重要的意义。
[Abstract]:Objective : To establish an accurate , reliable and high - performance liquid chromatography - mass spectrometry ( LC - MS / MS ) method for the determination of the mass concentration of mango glycosides in rat plasma and phosphate buffer ( PBS ) . The results were as follows : 1 . The concentration of mango glycosides in normal rats and diabetic rats was determined by using the established LC - MS / MS method . The mean plasma protein binding rate was ( 84.5 卤 1.4 ) % , ( 82.6 卤 1.4 ) % , ( 82.4 卤 1.7 ) % in PBS buffer . The linear range of Mangiferin in diabetic rats was ( 66.5 卤 0.6 ) % , ( 66.6 卤 1.0 ) % , ( 68.4 卤 0.7 ) % , respectively . Conclusion : ( 1 ) The distribution of mango glycosides in diabetic rats is higher than that in normal rats .
【学位授予单位】:广州中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R285.5
【参考文献】
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,本文编号:1869236
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