NHE-1抑制剂Cariporide逆转乳腺癌细胞对阿霉素耐药的研究

发布时间：2018-05-24 22:41

  本文选题：NHE-1 + Cariporide　； 参考：《江苏大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的钠氢交换蛋白-1(Sodium Hydrogen Exchanger,NHE-1)调节细胞膜内外的H+/Na+交换,与肿瘤的耐药机制密切相关。本实验探讨钠氢交换蛋白NHE-1抑制剂Cariporide(CP)调节人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR细胞对化疗药物阿霉素(Adriamycin,Adr)体内外药物敏感性的作用及其分子机制,为逆转肿瘤治疗过程中发生的多药耐药提供新的理论依据和治疗途径。方法1.CCK8法检测不同浓度的NHE-1抑制剂CP(3、6、9、12、60、100μg/ml)对人乳腺癌MCF-7和MCF-7/ADR细胞24、48h的抑制率,通过Graphpad prism5计算非细胞毒性剂量的CP与不同浓度(1、5、30、50μg/ml)的化疗药物Adr联用后,药物的半数抑制浓度(IC50)的改变,并运用Compu Syn软件计算联用指数(CI);2.流式细胞术检测6μg/ml CP单用及与10μg/ml Adr联用后,乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR的凋亡率、对阿霉素的摄取率和细胞周期的改变;3.Western blot法检测肿瘤耐药细胞株(MCF-7/ADR、A2780/PTX)与敏感细胞株(MCF-7、A2780)中NHE-1蛋白的表达差异;检测CP单独及与Adr联合作用48h后,相关蛋白(CD44、MDR1、NF-κB)和凋亡蛋白(Caspase-3/9、Bcl-2)的表达变化;4.RT-PCR法检测肿瘤耐药细胞株(MCF-7/ADR、A2780/PTX)与敏感细胞株(MCF-7、A2780)中NHE-1基因的表达差异;检测CP单用及与Adr联用48h后MDR-1、NF-κB等相关核转录因子mRNA的差异表达;5.构建人乳腺癌耐药细胞株皮下移植瘤模型,动态监测各组裸鼠的体重变化及皮下移植瘤生长速度,测量瘤体体积,绘制瘤体生长曲线;通过HE染色观察瘤体组织的病理变化;免疫组化法及Western blot法检测瘤体组织中NHE-1、MDR1、Caspase-3、Bcl-2等蛋白的表达改变。结果1.耐药细胞株MCF-7/ADR和A2780/PTX中NHE-1蛋白和mRNA的表达明显高于相应的敏感株(P0.01);而6μg/ml CP能够下调MCF-7/ADR细胞NHE-1蛋白和mRNA的表达水平(P0.05)。CP与Adr均能够抑制乳腺癌细胞的增殖,且具有剂量及时间依赖性,选择抑制率为10%CP的作用浓度6μg/ml作为后续实验剂量;CP与Adr联用下调阿霉素对MCF-7/ADR细胞的IC50值;两药联用时,联用指数CI值均小于1。随着CP浓度的增加,乳腺癌耐药细胞对阿霉素的摄取率呈递增趋势,且不同浓度的药物处理组间有显著性差异(P0.05)。CP与Adr联用组细胞周期中处于G0/G1期的百分比为68.32±5.99%,显著高于其他各组;而分布于G2/M期的百分比3.38±1.49%低于其他组(P0.01)。析因分析显示两药之间存在交互作用(P0.001)。2.CP与Adr联用MCF-7/ADR细胞的凋亡率为(29.12±0.65)%,明显高于空白对照组(2.43±0.08)%、单用Adr组(16.34±0.39)%和单用CP组(9.55±0.47)%,且存在交互作用(P0.01)。CP与Adr联用后耐药相关蛋白CD44、MDR-1和相关基因MDR-1 mRNA、NF-κB mRNA均出现了表达水平的显著下调(P0.05),而凋亡蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9表达量增加。3.细胞悬液皮下接种法使裸鼠成瘤,CP和Adr联用组、单用Adr组移植瘤生长速度明显低于空白对照组(P0.05)。移植瘤组织HE染色发现,与空白对照组及单用用药组相比,联合用药组中肿瘤细胞分布明显减少,且同时出现了大面积的液化坏死区并伴有周围纤维化增生。CP和Adr联用组瘤体组织NHE-1蛋白、抗凋亡蛋白Bcl-2及耐药蛋白MDR-1的表达显著降低(P0.05),但是Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP则表达增加(P0.05),组间差异具有统计学意义(P0.05)。结论NHE-1抑制剂Cariporide与化疗药物阿霉素联用可以显著抑制MCF-7/ADR耐药细胞的增殖,明显减缓乳腺癌细胞皮下移植瘤的生长速度,可能是通过调控NF-κB信号通路,下调耐药相关基因和蛋白的表达,同时活化凋亡相关蛋白,使细胞周期阻滞于G0/G1期并促进细胞凋亡,从而有效逆转肿瘤细胞的化疗耐药。
[Abstract]:The expression of NHE - 1 in MCF - 7 / ADR and MCF - 7 / ADR cells was determined by using the method of Western blot . There was a significant difference between CP and Adr ( P < 0.01 ) . Compared with control group and single - use group , there was a significant difference between CP and Adr group ( P < 0.05 ) .
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.9

【参考文献】

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本文编号：1930921