五倍子、儿茶、连翘、黄连和黄芩五味中药对艰难梭菌体外抗菌活性研究

发布时间：2018-06-15 05:24

本文选题：五倍子 + 儿茶　；参考：《河北医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:艰难梭菌(Clostridium difficile,CD)属厌氧性梭菌,CD产毒株的危害性大于非产毒株,两者均可以定植在人类肠道,是引起抗生素相关性腹泻的主要病原菌。CD作为传播媒介,可在院内引起感染以及院外引起流行传播。由艰难梭菌感染(Clostridium difficile infection,CDI)造成的患者的死亡率在全世界呈上升趋势。腹泻为CDI常见临床症状。进入21世纪后,CD高产毒株027/NAPl/BI在加拿大、北美、欧洲等多地区出现暴发流行,死亡率及复发率高。CD形成的芽孢可抵抗多种理化因素,包括医院常用的酒精类消毒剂、潮湿土壤、空气等。目前指南推荐轻、中度CD患者以口服甲硝唑为主,重度患者以口服万古霉素为主。但这两种药物治疗后可复发,并且对人体的副作用比较大。2011年FDA批准上市的非达霉素治疗艰难梭菌效果显著,但其价钱昂贵,使其在临床应用受到限制。中药在我国有着悠久的历史,其中很多中药具有消炎抗菌的作用。有鉴于此,我们选择了具有收敛固涩作用的五倍子、清热燥湿作用的黄芩和黄连、以及具有敛疮功效的儿茶和具有清热解毒作用的连翘进行CD体外抗菌实验,探讨其是否有CD抗菌活性,以便为中药治疗CDI提供思路和方法。方法:1本实验所用的菌株来自河北省医学微生物菌种保存中心(Hebei centre for medical culture collection,HBCMCC)。共选取了来自不同地区不同分离期间的130株菌株,根据菌落形态、特殊气味、涂片染色、毒素、质谱以及16srDNA测序等鉴定为CD。2提取CD基因组DNA,扩增16s~23s间隔区序列并进行电泳,根据电泳的具体位置来确定CD的PCR核糖体型别,经多重PCR扩增毒素基因,扩增产物经电泳来确定CD的产毒情况,并研究中药的MIC和CD的PCR核糖体型别之间的关系。3选取中药五倍子、黄连、黄芩、儿茶及连翘进行煎制,采用琼脂稀释法对中药五倍子、黄连、黄芩、连翘及儿茶进行药敏试验。结果:1本实验共选取130株cd,菌株主要来源于石家庄、邢台、沧州地区,时间从2010到2014年,男女比例为70:60。毒素a毒素b阳性二元毒素阴性(tcda+tcdb+cdta-cdtb-)的cd数目是105株,毒素a毒素b阳性二元毒素阳性(tcda+tcdb+cdta+cdtb+)的cd数目是3株,毒素a毒素b阴性二元毒素阴性(tcda-tcdb-cdta-cdtb-)的cd数目是22株。130株cd的pcr核糖体型别数目共36个,其中hb1型最多,共有23株,其次为hb5型18株,hb6型17株,三者共占44.6%(58/130)。2本实验测定了5味中药对130株cd的体外抗菌活性,结果显示:五倍子对cd有较强的抗菌活性,其mic为0.086-0.249mg/ml,130株cd的mic分别为:0.086mg/ml(25株)、0.098mg/ml(26株)、0.113mg/ml(27株)、0.125mg/ml(52株)。3黄连对130株cd的体外抗菌活性较弱,只测得12株cd的mic,分别为:1.268mg/ml(1株)、2.235mg/ml(1株)、2.229mg/ml(1株)、2.392mg/ml(4株)、2.822mg/ml(3株)、2.882mg/ml(2株)、其余118株的mic2.229mg/ml。4儿茶对130株cd有抗菌活性,其mic为4.128-22.423mg/ml。130株cd的mic分别为:16.200mg/ml(4株)、8.100mg/ml(22株)、10.217(26株)、8.256mg/ml(25株)、4.128mg/ml(1株)、22.423mg/ml(1株)、11.212mg/ml(25株)、12.191mg/ml(19株)、6.096mg/ml(7株)。5通过黄芩和连翘对130株cd的体外抗菌实验发现:黄芩和连翘对cd无抗菌活性,其mic分别为3.844mg/ml和3.927mg/ml。6综合分析中药的mic值和130株cd的pcr核糖体型别的关系发现:五倍子的mic值在本地区优势型别(hb1、hb5、hb6)菌株组要低于非优势型别(除hb1、hb5、hb6之外型别)菌株组(x2=4.084,p=0.043);儿茶的mic值在本地区优势型别菌株组和非优势型别菌株组的差异无统计学意义(x2=0.019,p=0.89)。结论:1五倍子、儿茶和黄连对cd有体外抗菌活性,期待作为潜在治疗药物。2黄芩和连翘对CD无抗菌活性。3五倍子对CD的MIC值,在优势型别菌株组低于非优势型别菌株组;儿茶对CD的MIC值,在优势型别菌株组和非优势型别菌株组的差异无统计学意义。
[Abstract]:Objective : Clostridium difficile ( CD ) belongs to anaerobic clostridial , and the virulence of CD - producing strain is greater than that of non - producing strain . Both of them can be implanted in human intestinal tract , which is the main pathogenic bacterium causing antibiotic - related diarrhea . A total of 130 strains of CD were isolated from different regions . The results showed that the number of cd of 130 strains was 0.08mg / ml ( 25 strains ) , 0.098mg / ml ( 26 strains ) , 0.113 mg / ml ( 27 strains ) and 0.125mg / ml ( 52 strains ) .
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

【参考文献】