原发性干燥综合征患者外周血调节性B细胞及IL-17表达水平研究

发布时间：2018-10-29 12:44

【摘要】：目的:原发性干燥综合征(primary sj?gren’s syndrome,pSS)是一种以唾液腺高度淋巴细胞浸润,并具有高球蛋白血症为特征的弥漫性结缔组织病。临床表现主要包括口干燥症,干燥性角、结膜炎等外分泌腺受损的症状,同时也常伴有系统损伤,如肺间质纤维化、神经系统病变、肾小管酸中毒等。pSS病因及发病机制未明,其发病可能与感染、环境、遗传及免疫功能紊乱等因素有关。目前B淋巴细胞在自身免疫性疾病发病中的作用日渐受到重视。有研究显示调节性B细胞(regulatory B cell,Breg)及白介素-17(interleukin 17,IL-17)与pSS的发生发展密切相关。本研究通过检测调节性B淋巴细胞(CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs)及白介素-17在pSS患者外周血中的表达水平,分析两者与临床、系统受累情况、相关实验室指标、唇腺病理分级及疾病活动度的相关性,来探讨CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs及IL-17在pSS发生发展中的作用。方法:1病例选择:选取自2016年3月至2016年11月期间河北省人民医院风湿免疫科初治pSS患者30例作为实验组,均符合欧美共识小组(AECG)2002年修订版干燥综合征国际分类标准,并且排除Ig G4相关疾病(Ig G4 related disease,Ig G4-RD)等其他自身免疫性疾病、恶性肿瘤、获得性免疫缺陷综合征(Acquired Immune Deficiency Syndrome,AIDS)、移植物抗宿主病、病毒性肝炎、抗乙酰胆碱药物、糖皮质激素及免疫抑制剂应用者。选取健康志愿者20例为对照组,性别、年龄与实验组均匹配。2收集入选对象基本信息及临床资料:记录基本信息如性别、年龄、病程,临床症状及体征,实验室指标如白细胞计数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血小板计数(PLT)、血红蛋白计数(Hb)、C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)、类风湿因子(RF)、抗核抗体(ANA)、ENA抗体谱、免疫球蛋白(Ig)、补体C3、C4。3实验方法:采用流式细胞术(FCM)检测实验组及对照组表型为CD19+CD24hi CD38hi的Bregs占CD19+细胞的百分比;酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测两组外周血清中IL-17的表达水平。4唇腺病理分级:无菌条件下取下唇腺活组织并应用福尔马林固定,经石蜡包埋,切片,HE染色。根据Chisholm标准分为0~Ⅳ级。5 pSS疾病活动评估:根据2009年欧洲抗风湿病联盟(EULAR)制定的干燥综合征疾病活动度指数(ESSDAI)评估实验组疾病活动度。6数据处理:应用SPSS 21.0.0统计软件处理。计量资料符合正态分布的结果以均数±标准差(Xˉ±SD)表示,具有方差齐性的两组间比较应用独立样本t检验,多组样本间均数比较应用单因素ANOVA方差分析,相关分析应用Spearman相关分析;计量资料非正态分布的结果以中位数(四分位间距)[M(P25,P75)]表示,两组资料比较应用非参数Mann-Whitney U检验,多组间比较应用Kruskal-Wallace检验,相关分析应用Spearman相关系数检验。所有的统计检验均应用双侧检验,P值小于或等于0.05将被认为有统计学意义。结果:1 pSS组及健康对照组外周血CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs及血清IL-17表达水平:pSS组外周血中CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs占CD19+B淋巴细胞百分比为(4.18±1.98%),较健康对照组(1.10±0.63%)显著升高(P0.001)。血清IL-17的表达水平(17.99±9.88pg/ml)显著高于健康对照组(13.32±5.29pg/ml,P0.05);2 pSS患者外周血CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs及血清IL-17的表达水平与系统损伤的关系:根据患者有无系统损伤,将pSS患者分为系统损伤组(20例,66.7%)、非系统损伤组(10例,33.3%);系统损伤组定义为在pSS诊断基础上,排除其他因素,如药物、感染等,而出现呼吸、消化、血液、神经、泌尿系统等任一系统受累者,非系统损伤组定义为单纯表现为口干和(或)眼干症状的pSS患者。上述分组中pSS患者外周血中CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs占CD19+B淋巴细胞百分比分别为4.29±2.27%和3.96±1.33%,血清IL-17的表达分别为19.04±9.93pg/ml及15.50±9.47pg/ml,两组差异均无统计学意义(P0.05);3 pSS患者外周血CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs及血清IL-17表达与相关实验室指标的关系:pSS患者外周血中CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs占CD19+B淋巴细胞百分比与病程呈负相关(r=-0.37;P0.05),与血红蛋白含量呈负相关(r=-0.43;P0.05),与Ig G呈正相关(r=0.36;P0.05);与Ig M呈正相关(r=0.45;P0.05)。pSS患者血清IL-17的水平与ESR呈正相关(r=0.58;P0.001),与WBC呈正相关(r=0.53;P0.01);4 pSS患者外周血CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs及血清IL-17表达水平与自身抗体的关系:按照自身抗体ANA、SSA、SSB、RF是否存在,将pSS患者分为ANA阳性组(28例,93%)、ANA阴性组(2例,7%);RF阳性组(9例,30%)、RF阴性组(21例,70%);抗SSA阳性组(16例,53%)、抗SSA阴性组(14例,47%);抗SSB阳性组(7例,23%)、抗SSB阴性组(23例,77%)。抗SSA抗体阳性组pSS患者外周血CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs占CD19+B淋巴细胞百分比(4.86±2.21%),显著高于抗体阴性组(3.40±1.39%,P0.05),抗SSB抗体阳性组pSS患者外周血CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs占CD19+B淋巴细胞百分比为(6.08±2.08%),显著高于抗体阴性组(3.60±1.59%,P0.05)。上述其余各抗体阳性组和阴性组pSS患者外周血CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs占CD19+B淋巴细胞百分比无统计学差异(P0.05)。pSS患者血清IL-17表达水平在各自身抗体阳性组及阴性组间无显著差异(P0.05);5 pSS患者外周血CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs及血清IL-17表达水平与唇腺组织病理分级的关系:实验组pSS患者唇腺病理等级分布情况为:Ⅲ级6例(20%),Ⅳ级24(80%)例,两组间CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs占CD19+B淋巴细胞的百分比分别为3.23±1.42%及4.41±2.05%,血清IL-17水平分别为17.97±8.35pg/ml及17.83±10.24pg/ml,两组间差异均无统计学意义(P0.05);6 pSS患者外周血CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs及血清IL-17表达水平与疾病活动指数ESSDAI的关系:按ESSDAI评分将疾病活动度分为4组。1-4组分数段分别为:0-2分,3-5分,6-8分,9分及以上。实验组pSS患者ESSDAI评分分布0-2分9例(30%),3-5分18例(60%),6-8分3例(10%)。各分组中CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs占CD19+B淋巴细胞的百分比分别为3.29±1.48%,4.34±2.02%和5.84±1.40%,血清IL-17的水平分别为16.30±7.75pg/ml,17.51±9.76pg/ml和24.62±15.80pg/ml。在疾病活动度不同分组之间CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs占CD19+淋巴细胞的百分比及血清IL-17表达水平差异无统计意义(F=1.21,0.84,P0.05);7 pSS患者外周血CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs占CD19+淋巴细胞的百分比与血清IL-17水平的相关性:统计学分析显示r=0.21,P=0.28,这一结果提示两者之间无显著相关性(P0.05)。结论:1 pSS患者外周血CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs和血清IL-17表达水平较对照组显著升高,提示CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs和血清IL-17参与了pSS的发病过程。2 pSS患者外周血CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs表达水平在抗SSA抗体阳性和抗SSB抗体阳性组显著高于对应抗体阴性的患者,且与Ig G、Ig M水平呈正相关,提示pSS患者CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Bregs高表达与pSS患者免疫功能紊乱有关。3 pSS患者血清IL-17的表达与ESR及WBC呈正相关,为IL-17作为炎性因子参与pSS的发病过程提供了进一步的证据。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R593.2

【参考文献】