补肾生血解毒方调控再生障碍性贫血T细胞免疫应答网络的作用机制

发布时间：2019-08-17 10:13

【摘要】：目的探究补肾生血解毒方调控T细胞自身免疫应答相关因子表达、恢复T细胞免疫应答网络系统的动态平衡、恢复和重建骨髓造血机能的作用机制。方法60Coγ射线照射复合免疫介导制作小鼠骨髓抑制再生障碍性贫血(AA)动物模型,补肾生血解毒方干预,以环孢素(CsA)免疫抑制治疗为阳性对照药物,通过血液学各项指标检测,观察中药复方对AA小鼠血液学各项指标的影响;免疫荧光标记,利用激光共聚焦扫描显微镜观察T淋巴细胞中T-bet的表达和分布以及淋巴细胞刺激因子相关蛋白(SAP)与淋巴细胞刺激因子(SLAM)结合情况的改变;流式细胞仪检测外周血和脾脏中T细胞、B细胞、NK细胞数量的变化,以及T辅助细胞1(Thelpercell,Th)、Th2、Th17及调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)亚群比率的改变;流式细胞仪检测骨髓中造血干细胞的凋亡率。结果(1)药物干预7天、14天后,模型组与各治疗组血红蛋白(HGB)、红细胞计数(RBC)计数比较差异无统计学意义(P0.05);21天、28天后中药治疗组和阳性对照组HGB、RBC计数均高于模型组(P0.01)。药物干预7天后,模型组与各治疗组血小板总数(PLT)比较差异无统计学意义(P0.05);14天、21天、28天后,中药治疗组和阳性对照组PLT均高于模型组(P0.01)。造模结束后,正常组白细胞数(WBC)明显高于各造模组(P0.01),药物干预21天后,各治疗组WBC高于模型组(P0.01)。药物干预后,红细胞体积分布宽度(RDW)、红细胞平均体积(MCV)、细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白含量(MCHC)等贫血形态学分类指标,组间差异在特定时间段有统计学意义(P0.05),但缺乏规律。PDW、MPV、HCT等指标均无统计学意义(P0.05)(2)免疫荧光结果显示,模型组和正常组比较T淋巴细胞中T-bet表达量显著升高(P0.01),阳性对照组和中药治疗组T淋巴细胞中T-bet表达量低于模型组(P0.01);模型组和正常组比较SAP和SLAM结合比率明显降低(P0.01),阳性对照组较模型组明显升高(P0.01),中药治疗组较模型升高(P0.05)。(3)流式细胞仪检测外周血结果显示:模型组与正常组比较,T淋巴细胞在外周血中的比率降低(P0.01);阳性对照组、中药治疗组T淋巴细胞比率比模型组均显著降低(P0.01)。模型组和正常组比较,B淋巴细胞差异无统计学意义(P0.05),NK细胞比率明显升高(P0.01);各治疗组和模型组比B细胞、NK细胞比率明显下降(P0.01)。Th2、Th17比率变化各组间无统计学意义(P0.05)。模型组和正常组比,Th1和Treg比率上调(P0.01);中药组和阳性对照组Th1、Treg比率较模型组明显下调(P0.01)。流式细胞仪检测脾组织细胞悬液结果显示:脾脏中T细胞比率,模型组和正常组比有下降趋势(P0.01);中药组和阳性对照组较模型组显著下降(P0.01)。B细胞、NK细胞比率变化趋势和外周血检测结果较为一致。Th1细胞比率,模型组较正常组显著升高(P0.01);中药组较模型组降低(P0.01)。Th2细胞比率,各造模组较正常组比率下降(P0.01),各治疗组和模型组差异无统计学意义(P0.05)。Treg细胞比率,模型组较正常组降低,中药组较模型组有上升趋势但无统计学差异(P0.05)。Th17细胞比率,正常组和模型组无统计学差异,各治疗组较模型组显著降低(P0.01)。流式细胞检测骨髓结果显示:模型组骨髓细胞凋亡率明显高于正常组(P0.01),阳性对照组、中药治疗组均低于模型组(P0.01)。结论补肾生血解毒方可以通过调控T细胞的免疫应答网络,恢复骨髓造血微环境中T细胞免疫应答网络的动态平衡和HSCs的增殖和分化,从而达到治疗AA的目的。
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】