线叶金雀花对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用研究

发布时间：2019-09-28 18:04

【摘要】：脑缺血再灌注(cerebral ischemia reperfusion,CIR)属于缺血性脑血管疾病,主要是指由于脑部缺血导致脑细胞受损,恢复血流再灌注后,缺血性损伤进一步加重的现象。CIR是一个复杂的病理级联反应过程,涉及多方面因素,主要包括氧化应激、炎症反应、细胞内钙超载、兴奋性氨基酸毒性、血脑屏障受损、凋亡通路以及氮化应激等。其中氧化应激及炎症反应是导致CIR的两个重要因素。线叶金雀花学名是Aspalathus Zinears,也被称为Rooibos,是豆科植物Aspalathus linearis(Barm.f.)R.Dahlgren的干燥叶与小枝,为南非西开普顿地区特有植物。研究表明,线叶金雀花具有较好的抗氧化及抗炎症特性,但对于CIR的作用尚不明确。本研究拟观察线叶金雀花对小鼠CIR的影响,并初步探讨其作用机制。目的基于前期研究资料,本课题拟观察线叶金雀花对小鼠CIR的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法将ICR小鼠随机分为对照组,CIR组,线叶金雀花低剂量组、中剂量组、高剂量组。制备模型前各组先预防性灌胃给药7 d,每日1次,对照组及CIR组给予等体积的蒸馏水。给药1周后,采用小鼠大脑中动脉栓塞法(MCAO)制备模型,模型制备成功后继续按上述方式灌胃给药。1.线叶金雀花对小鼠脑缺血再灌注损伤及神经功能的影响(1)参考Longa神经功能评分法,判定模型的成功;(2)通过TTC染色法观察脑组织梗死体积变化;(3)采用平衡木实验(balance beam test)评价运动协调功能,转角实验(corner test)评价感觉功能,水迷宫实验(Morris water maze test)评价认知功能。2.线叶金雀花对小鼠脑缺血再灌注损伤保护作用机制探讨(1)线叶金雀花对小鼠脑缺血再灌注氧化应激的影响:采用比色法,测定脑组织匀浆中的氧化应激相关指标:超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,丙二醛(MDA)含量、还原型谷胱甘肽(GSH)含量以及氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量等。(2)线叶金雀花对小鼠脑缺血再灌注炎症反应的影响:采用酶联免疫分析法(ELISA),测定脑组织匀浆中炎症因子及相关酶变化:白介素1β(IL-1β)含量、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)含量及髓过氧化物酶(MPO)活性等。结果1.与对照组比较,CIR组脑组织梗死体积显著增加(P0.01),神经功能评分显著提高(P0.01),平衡木得分显著升高(P0.01),转角向非损伤侧次数显著增多(P0.01),学习记忆有所下降。与CIR组相比,线叶金雀花组脑组织梗死体积显著减少(P0.05),神经功能略有改善,平衡木成绩显著下降(P0.01),转角向非损伤侧次数显著减少(P0.01),学习记忆有所提高。2.制备模型后给药7 d发现,与对照组比较,CIR组小鼠脑组织中SOD活性、CAT活性显著降低(P0.01),并且MDA含量显著升高(P0.05),GSH含量显著降低(P0.01),GSSG含量显著增加(P0.01)。与CIR组相比,线叶金雀花组小鼠脑组织中SOD活性、CAT活性及GSH含量显著增加(P0.05),MDA含量和GSSG含量显著降低(P0.01或 P0.05)。制备模型后给药14 d发现,与对照组比较,CIR组小鼠脑组织中SOD活性显著降低(P0.01),MDA含量略有增加、CAT活性略有降低及GSH-Px活性略有下降。与CIR组相比,线叶金雀花组小鼠脑组织中SOD活性、CAT活性略有升高,MDA含量稍有降低,GSH-Px活性略有升高。3.与对照组比较,CIR组小鼠脑组织中TNF-α含量、ICAM-1含量、MPO活性显著增加(P0.05),IL-1β含量略有增加。与CIR组相比,线叶金雀花小鼠脑组织中TNF-α含量、IL-1β含量与ICAM-1含量显著降低(P0.01或P0.05),MPO活性略有下降。结论:1.线叶金雀花对CIR小鼠脑组织具有保护作用,并能促进CIR小鼠神经功能恢复,具体表现为:显著减少脑梗死体积,改善神经功能(神经功能评分),协调肢体运动性(平衡木实验),改善感觉功能(转角实验),提高学习记忆能力(Morris水迷宫实验)。2.线叶金雀花可以减轻脑缺血再灌注引起的氧化应激,该作用可能是通提高脑组织抗氧化系统的功能实现的。3.线叶金雀花可以减轻脑缺血再灌注引起的炎症反应,该作用可能与减少炎症因子、抑制相关酶活性有关。综上所述,线叶金雀花对脑缺血再灌注损伤有一定保护作用,该作用可能与其抗氧化、抗炎症反应有关。
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

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本文编号：2543448