消癌平对p53缺陷肺癌细胞的效应及机制

发布时间：2017-03-23 05:24

  本文关键词：消癌平对p53缺陷肺癌细胞的效应及机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景与目的：消癌平注射液是通关藤提取制剂,有抑制肿瘤生长的作用。肺癌是当前世界上死亡率居首位的恶性肿瘤,其中约85%为非小细胞肺癌。肿瘤抑制因子p53缺陷在肺癌中多见。本实验室前期研究了蛋白赖氨酸甲基化转移酶SET7/9表达变化对p53缺陷的非小细胞肺癌细胞的生物效应,发现SET7/9上调会抑制凋亡,反之,SET7/9下调会促进凋亡。本研究拟观察消癌平制剂对p53缺陷的人非小细胞肺癌细胞的生长效应,并探讨相应机制包括是否涉及SET7/9分子变化。实验方法：选择p53缺陷的非小细胞肺癌A549、NCI-H1299细胞株为研究对象,分别设置药物处理组为实验组,药物未处理组为对照组。实验组消癌平制剂处理浓度分别为30.0、50.0、80.0 mg/mL,处理时间分别为24h、48h、72h。对照组以相同体积的生理盐水处理。倒置显微镜下观察细胞生长状况及形态变化,CCK-8试剂检测细胞增殖,Hoechst33342染色与Annein V-FITC/PI双染法检测凋亡情况,流式细胞法检测细胞周期,Western Blot检钡p21蛋白水平。结果：与对照组比较,镜下可见药物处理NCH1299与A549两株细胞48h,细胞生长密度均下降且皆出现形态变化,80.(mg /mL的药物浓度处理NCI-H1299细胞时细胞多呈悬浮状态,但Ioechst33342染色检测未见核固缩深染细胞增加。CCK-8检测表明两株细胞实验组存活率降低,均呈药物浓度或时间依赖性增殖抑制,药物处理NCI-H1299细胞24h、48h、72h时,细胞半数致死浓度(IC50)分别为60.0、37.6、31.0mg/mL;药物处理A549细胞24h、48h、72h时的IC50分别为90.1ng/mL、74.5、64.1 mg/mL。不同浓度药物(30.0、50.0、80.0mg/mL)分别处理48h,两株培养细胞凋亡率均无明显变化,NCI-H1299细胞的S期百分比分别为44.1±0.4、51.7±2.0、59.8±3.8,A549细胞S期百分比分别为21.8±4.8、25.5±0.6、32.8±0.9(与各自对照组42.3±0.8、21.5±5.8比较,除30.0mg/mL的药物浓度处理外,均P0.05)；Western Blot检测表明随药物处理浓度增加,两株细胞p21含量均增加,而Sp65含量均降低。结论：(1)通关藤提取物消癌平制剂对p53缺陷的非小细胞肺癌NCI-H1299、A549细胞增殖有抑制作用,且呈浓度和时间依赖性。(2)该药通过阻滞细胞周期而抑制细胞增殖,但对凋亡未见影响。(3)该药对p53缺陷非小细胞肺癌细胞的抑制效应与SET7/9、p65、p21蛋白相关通路的变化有关。
【关键词】：消癌平制剂 非小细胞肺癌 p53 SET7/9 细胞周期
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 缩略词表9-11
• 文献综述11-29
• 参考文献23-29
• 第一部分 前言29-31
• 第二部分 材料与方法31-44
• 1、实验材料及试剂31-35
• 2、实验方法35-44
• 第三部分 结果44-48
• 第四部分 讨论与结论48-51
• 参考文献51-53
• 致谢53-54
• 作者简介54-55
• 附录（已发表和已投稿文章)55-65

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