两种海蛏多糖的提

发布时间：2017-03-23 18:24

  本文关键词：两种海蛏多糖的提取、分离和结构分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：我国具有丰富的海洋贝类资源,贝类多糖是海洋贝类体内重要的生物活性物质。因海洋贝类生存于特殊的海水环境中,贝类多糖具有独特而复杂的结构,并在抗肿瘤、抗病毒和增强免疫等方面具有良好的应用前景,有关贝类多糖结构和生物活性的研究受到了国内外学者的广泛关注。缢蛏和细长竹蛏均属海洋软体动物门,双壳纲,竹蛏属,不仅含有蛋白质、糖类、及钙、铁和多种维生素,具有很高的营养价值；而且具有清热解毒、补阴除烦、治痢、通乳、消炎、明目等活性,具有潜在的药用价值。本文以采自青岛红岛海域的缢蛏和细长竹蛏为原料,采取不同的提取和分离纯化方法,得到了4种缢蛏多糖组分和8种细长竹蛏多糖组分；对多糖组分的基本理化性质进行了分析,并对部分多糖组分的结构和抗乙肝病毒、免疫活性进行了研究。主要研究结果如下：1.对缢蛏依次采用沸水和0.1 mol/L氢氧化钠溶液提取,得到了2种粗多糖组分(YC-S和YC-J),得率分别为7.2%和8.9%。对2种缢蛏粗多糖的理化性质进行分析,结果表明：YC-S的总糖含量和蛋白含量分别为55.4%和29.5%；YC-J的总糖含量和蛋白含量分别为38.1%和25.8%；两者的单糖组成较简单,均只含有葡萄糖(Glc),且不含硫酸根。YC-S和YC-J经Q Sepharose Fast Flow(QFF)强阴离子交换柱层析,共获得4种水溶性多糖组分(YC-S1、YC-S2、YC-J1和YC-J2)。对其中含量较多的YC-S2组分,进一步采用Sephacryl S-300凝胶渗透色谱柱进行纯化,得到的YC-S2纯化组分的总糖含量和蛋白含量分别为90.9%和8.7%；采用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)法测得其重均相对分子质量为482 kD,且为单一对称峰,纯度较高。采用红外光谱、核磁共振波谱、甲基化和气质联用等技术,推测了YC-S2纯化组分的结构：以a-(1→,4)Glc为主链,含有少量β-(1→3,4)和β-(1--*4)分支的D-毗喃型葡聚糖。2.对细长竹蛏依次采用沸水提取和碱提取2种方法,分别得到了2种粗多糖组分(ZC-S和ZC-J),得率分别为12.9%和3.5%。进一步采用阴离子交换分离纯化,共得到8种水溶性多糖组分。基本理化性质分析结果表明：ZC-S的总糖含量和蛋白含量分别为14.2%和59.3%；ZC-J的总糖含量和蛋白含量分别为12.5%和76.3%。ZC-S和ZC-J均为杂多糖,ZC-S单糖组成为Glc:GlcN:Gal:GalN:Fuc: Man=16.1:2.9:2.1:1.9:1.7:1; ZC-J的单糖组成为Glc:GlcN: Gal:Man:GlcN:Fuc=9.1:2.1:1.5:1.1:1.1:1.对于这2种单糖组成复杂的多糖,本文采用了多级酸水解的策略对其主链和支链结构进行了分析,采用低浓度的三氟乙酸(TFA)将侧链进行水解分析表明,ZC-S和ZC-J的侧链分别含有岩藻糖、半乳糖醛酸和鼠李糖,除此之外,ZC-J的侧链还含有少量的葡萄糖醛酸和木糖：主链部分经甲基化和气质联用可知：ZC-S主链含有→4)Glc(1→, →3,4)Man(1→,→2,4)Glc(1→和→4,6)Gal(1→共4种连接方式：ZC-J主链含有→4)Glc(1→,→3,4)Man(1→和→4,6)Gal(1→+共3种连接方式。3.对分离纯化获得的部分多糖组分进行了初步的免疫活性和抗乙肝病毒活性评价。实验结果表明,细长竹蛏多糖组分中低剂量(50 μg/mL)的ZC-S2、中剂量(100 μg/mL)的ZC-S3-ZC-S4及中、高剂量(200 μg/mL)的ZC-J2-ZC-J4,均可显著增强Raw264.7细胞的吞噬指数,表明细长竹蛏多糖具有显著增强小鼠免疫活性的作用；但缢蛏YC-S2多糖组分免疫活性较弱。细长竹蛏多糖组分ZC-S2和ZC-S3具有较好的抗乙肝病毒活性,当ZC-S3浓度为200 ug/mL时,其对HBeAg和HBsAg的抑制率分别为38%和35%。关于缢蛏及细长竹蛏多糖的研究,目前报道的主要是有关其提起方法和生物活性方面的研究,未见有关其分离纯化、结构分析方面的系统研究和免疫活性、抗乙肝病毒活性方面的报道。本文相关的研究结果对缢蛏及细长竹蛏多糖的生物活性与结构的深入研究和潜在的药用开发提供了基础,也为缢蛏、细长竹蛏等海洋贝类资源的高值化利用提供了参考。
【关键词】：缢蛏 细长竹蛏 多糖 结构分析 生物活性
【学位授予单位】：中国海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R284
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-14
• 第一章 前言14-31
• 1. 多糖的研究概括15-22
• 1.1 多糖的提取15-17
• 1.1.1 水提法15-16
• 1.1.2 酸提法16
• 1.1.3 碱提法16
• 1.1.4 酶提法16-17
• 1.2 多糖的分离纯化17-19
• 1.2.1 膜分离法17-18
• 1.2.2 分级沉淀法18
• 1.2.3 季铵盐沉淀法18
• 1.2.4 凝胶过滤色谱法18-19
• 1.2.5 离子色谱法19
• 1.3 多糖的结构分析19-22
• 1.3.1 单糖组成分析19-20
• 1.3.2 红外光谱分析20-21
• 1.3.3 甲基化分析21
• 1.3.4 多级酸水解21
• 1.3.5 质谱分析21-22
• 1.3.6 核磁共振法分析22
• 2. 海洋软体动物多糖22-26
• 2.1 抗氧化活性23
• 2.2 免疫调节活性23-24
• 2.3 抗肿瘤活性24-25
• 2.4 抗凝血活性25
• 2.5 抗病毒活性25
• 2.6 抗菌活性25-26
• 2.7 保肝活性26
• 3 海蛏的研究26-29
• 3.1 形态与生态特征26-27
• 3.2 海蛏的生活习性27
• 3.3 海蛏活性物质的研究27-29
• 3.3.1 海蛏活性肽的研究27-28
• 3.3.2 海蛏多糖的研究28-29
• 4. 本课题的立题背景和研究思路29-31
• 第二章 缢蛏多糖的提取、分离和结构分析31-62
• 1 引言31
• 2 材料与仪器31-33
• 2.1 材料31-32
• 2.2 仪器32-33
• 3 实验方法33-40
• 3.1 样品的前处理33
• 3.2 缢蛏多糖的提取33-34
• 3.2.1 热水提取33-34
• 3.2.2 碱提取34
• 3.3 酶法脱蛋白34
• 3.4 缢蛏多糖的分离纯化34-35
• 3.4.1 离子交换柱层析34-35
• 3.4.2 凝胶渗透柱层析35
• 3.5 缢蛏多糖的理化性质分析35-37
• 3.5.1 总糖含量的测定35
• 3.5.2 蛋白含量的测定35-36
• 3.5.3 硫酸根含量的测定36-37
• 3.6 相对分子质量测定及纯度分析37
• 3.7 单糖组成分析37-38
• 3.8 红外光谱分析38
• 3.9 甲基化分析38-39
• 3.9.1 试剂预处理38
• 3.9.2 甲基化反应38-39
• 3.9.3 甲基化多糖的全水解39
• 3.9.4 全水解产物的还原39
• 3.9.5 乙酰化反应39
• 3.9.6 GC-MS分析39
• 3.10 核磁分析39-40
• 4 实验结果40-60
• 4.1 缢蛏前处理结果40
• 4.2 缢蛏粗多糖提取结果40
• 4.3 缢蛏粗多糖除蛋白结果40-41
• 4.4 缢蛏多糖的分离纯化41-43
• 4.4.1 缢蛏多糖的分离41-42
• 4.4.2 缢蛏多糖的纯化42-43
• 4.5 缢蛏多糖的理化性质测定结果43-46
• 4.5.1 总糖含量测定结果43-44
• 4.5.2 蛋白含量测定结果44-45
• 4.5.3 硫酸根含量测定结果45-46
• 4.6 样品相对分子质量测定及纯度分析结果46-48
• 4.7 单糖组成分析结果48-50
• 4.8 红外光谱分析结果50-51
• 4.9 甲基化分析结果51-54
• 4.10 核磁共振分析结果54-60
• 5 本章小结60-62
• 第三章 细长竹蛏多糖的提取、分离和结构分析62-84
• 1 引言62
• 2 材料与仪器62-63
• 2.1 材料62-63
• 2.2 仪器63
• 3 实验方法63-67
• 3.1 样品的前处理63
• 3.2 细长竹蛏多糖的提取63
• 3.2.1 热水提取63
• 3.2.2 碱提取63
• 3.3 酶法脱蛋白63-64
• 3.4 细长竹蛏多糖的分离纯化64
• 3.5 细长竹蛏多糖理化性质的测定64-65
• 3.5.1 总糖含量的测定64
• 3.5.2 蛋白含量的测定64
• 3.5.3 硫酸根含量测定64
• 3.5.4 氨基糖含量的测定64-65
• 3.5.5 糖醛酸含量的测定65
• 3.6 单糖组成分析65-66
• 3.7 寡糖分析66
• 3.7.1 部分酸水解条件的摸索66
• 3.7.2 降解液的TLC分析66
• 3.7.3 寡糖的制备66
• 3.7.4 负离子质谱66
• 3.8 多级酸水解分析66-67
• 3.8.1 不同浓度的酸水解多糖66-67
• 3.8.2 单糖组成分析67
• 3.9 甲基化分析67
• 4 实验结果67-82
• 4.1 细长竹蛏前处理结果67-68
• 4.2 细长竹蛏多糖提取结果68
• 4.3 细长竹蛏多糖除蛋白结果68
• 4.4 细长竹蛏多糖的分离纯化68-70
• 4.5 细长竹蛏多糖的理化性质测定结果70-72
• 4.6 单糖组成分析结果72-75
• 4.7 寡糖分析结果75-79
• 4.7.1 降解条件摸索的结果75-76
• 4.7.2 部分酸降解液的Bio-Gel P2凝胶柱层析结果76-77
• 4.7.3 寡糖分析结果77-79
• 4.8 多级酸水解结果79-82
• 5 实验小结82-84
• 第四章 两种海蛏多糖的生物活性评价84-91
• 1 引言84-85
• 2 材料与仪器85-86
• 2.1 材料85
• 2.2 仪器85-86
• 3 实验方法86-87
• 3.1 免疫活性的测定86-87
• 3.1.1 小鼠Raw 264.7巨噬细胞的培养86
• 3.1.2 Raw264.7细胞吞噬中性红实验86-87
• 3.2 抗乙肝病毒的测定87
• 3.2.1 HepG2.2.15细胞培养87
• 3.2.2 HBeAg和HBsAg的检测87
• 4 实验结果87-90
• 4.1 免疫活性测定结果87-89
• 4.2 抗乙肝病毒活性的测定结果89-90
• 5 本章小结90-91
• 结语91-93
• 创新点93-94
• 参考文献94-105
• 致谢105-106
• 个人简历106
• 参与发表的文章106

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1 栾晓红;两种海蛏多糖的提取、分离和结构分析[D];中国海洋大学;2015年

  本文关键词：两种海蛏多糖的提取、分离和结构分析，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：264342