鼠尾藻和海带多糖与多酚对黄嘌呤氧化酶抑制作用及对高尿酸血症小鼠降尿酸效果研究

发布时间：2017-03-25 06:03

  本文关键词：鼠尾藻和海带多糖与多酚对黄嘌呤氧化酶抑制作用及对高尿酸血症小鼠降尿酸效果研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：黄嘌呤氧化酶(EC 1.1.3.2.2, Xathine Oxidase, XOD)是机体尿酸代谢的关键酶,在机体内能够将次黄嘌呤氧化为黄嘌呤并且继续氧化生成终产物尿酸、过氧化氢和超氧化物。人体内尿酸含量过高会引发高尿酸血症并最终导致痛风,持续性的高尿酸血症会引起高血压、高血脂、心血管疾病、慢性肾病等并发症的发生。近年来,黄嘌呤氧化酶抑制剂作为一种极为有效的抗高尿酸血症药物受到了国内外研究学者的广泛关注。但是,目前临床中应用的黄嘌呤氧化酶抑制剂类药物普遍存在着严重的毒副作用,因此,从天然活性物质中寻找高效、安全无毒的黄嘌呤氧化酶抑制剂逐渐成为抗高尿酸血症药物研究的新方向。本文研究了鼠尾藻和海带多糖与多酚对XOD的抑制作用,测定了它们在体外对XOD的半抑制浓度(IC50)；动力学方法研究了这些多糖与多酚对XOD的抑制类型、抑制机理和抑制常数；分别测定了它们与别嘌呤醇的联合抑制作用以及在体外对自由基的清除作用；采用氧嗪酸钾腹腔注射小鼠建立高尿酸血症模型,研究了海带多糖对高尿酸血症小鼠的降尿酸效果,并对小鼠肝脏中XOD的活力进行测定。实验结果如下：实验测得鼠尾藻多酚与鼠尾藻多糖对XOD都具有一定的抑制作用,其IC5o分别为0.58mg/mL和1.21mg/mL,动力学分析结果显示,二者对XOD的抑制类型都为竞争性可逆抑制作用,Ki值分别为0.07mg/mL和0.46mg/mL;海带多酚与海带多糖的ICso分别为0.88mg/mL和1.63mg/mL,海带多糖对XOD的抑制类型为竞争性可逆抑制作用,Ki值为0.30mg/mL,海带多酚对XOD的抑制类型为反竞争性可逆抑制作用,Ki值为0.21mg/mL。用等毒法研究这些海藻多糖和多酚与别嘌呤醇的联合抑制作用,结果显示鼠尾藻多酚与别嘌呤醇的联合抑制作用属于弱协同作用；鼠尾藻多糖、海带多酚、海带多糖与别嘌呤醇的联合抑制作用都表现为协同作用。鼠尾藻和海带多糖与多酚在体外对OH-和O2-都具有清除作用,其中鼠尾藻多糖和鼠尾藻多酚对OH-的清除率都大于50%,并且随着清除剂浓度的增大,清除率也随之升高,二者对O2-的清除作用较弱,最高清除率为61.86%,剂量依赖关系不显著。海带多糖和海带多酚对OH-的清除作用更强,清除率最高可达到92.13%,剂量依赖效应显著,而对O2-的清除作用较弱,剂量依赖效应不显著。用不同剂量的海带多糖灌胃7d后,海带多糖高、中剂量组小鼠血尿酸水平明显低于模型组(P0.05),小鼠肝脏中XOD的酶活力与模型组相比差异显著(P0.05),说明海带多糖能够显著降低高尿酸血症小鼠的血尿酸水平,且对小鼠肝脏中XOD酶活具有抑制作用。实验组小鼠的血尿酸水平与正常组小鼠相比无明显差别(P0.05),说明高尿酸血症小鼠的血尿酸已基本恢复至正常水平。此外,海带多糖组小鼠在实验期间体重增长稳定、毛色鲜亮、精神状态良好、无死亡现象,证明海带多糖作为降尿酸药物是安全无毒的。鼠尾藻和海带多糖与多酚对XOD具有较高的抑制活性,在体外对羟自由基和过氧阴离子都具有较强的清除作用,且海带多糖对氧嗪酸钾所致的高尿酸血症具有良好的改善作用。海带是一种食用藻类,其营养丰富,安全无毒,具有多种生物活性功能,鼠尾藻作为沿海常见的优势种海藻,全年生长,分布广泛,目前还未得到充分的开发利用。因此,鼠尾藻和海带多糖与多酚在作为抗高尿酸血症药物和抗氧化剂方面都具有良好的开发前景,本文为鼠尾藻和海带的进一步开发与应用提供了新的研究思路。
【关键词】：鼠尾藻 海带 多糖 多酚 黄嘌呤氧化酶 抑制作用 高尿酸血症
【学位授予单位】：中国海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-14
• 第一章 前言14-30
• 1 高尿酸血症概述14-21
• 1.1 高尿酸血症发病机制14-17
• 1.1.1 原发性高尿酸血症14-16
• 1.1.2 继发性高尿酸血症16-17
• 1.2 高尿酸血症与其他疾病的关系17-19
• 1.2.1 高尿酸血症与心脑血管疾病17-18
• 1.2.2 高尿酸血症与高血压18
• 1.2.3 高尿酸血症与高血脂18
• 1.2.4 高尿酸血症与糖尿病18-19
• 1.3 高尿酸血症的治疗方法19-21
• 1.3.1 药物治疗19-21
• 1.3.2 非药物治疗21
• 2 黄嘌呤氧化酶概述21-27
• 2.1 XOD的结构特征与催化机理22-23
• 2.2 黄嘌呤氧化酶抑制剂23-27
• 2.2.1 化学合成类抑制剂24-26
• 2.2.2 天然来源抑制剂26-27
• 3 实验藻类介绍27-29
• 3.1 鼠尾藻27-28
• 3.2 海带28-29
• 4 立项依据29-30
• 第二章 鼠尾藻多糖和多酚对黄嘌呤氧化酶的抑制作用30-46
• 1 前言30
• 2 实验材料、药品与仪器30-33
• 2.1 实验材料的制备30
• 2.2 药品与试剂的配制30-33
• 2.2.1 药品30-31
• 2.2.2 实验试剂配制31-33
• 2.3 实验仪器33
• 3 实验方法33-38
• 3.1 实验原理33-34
• 3.2 鼠尾藻多酚和多糖样品的制备34-35
• 3.2.1 鼠尾藻多酚的制备34
• 3.2.2 鼠尾藻多糖的制备34-35
• 3.3 鼠尾藻多酚和多糖对XOD抑制活性的研究35-36
• 3.3.1 鼠尾藻多酚和多糖对XOD半抑制浓度的测定35
• 3.3.2 鼠尾藻多酚和多糖对XOD的抑制作用机理的测定35
• 3.3.3 鼠尾藻多酚和多糖对XOD的抑制类型及抑制常数的测定35-36
• 3.4 鼠尾藻多酚和多糖与别嘌呤醇对XOD的联合抑制作用36
• 3.5 鼠尾藻多酚和多糖的体外抗氧化作用36-37
• 3.5.1 鼠尾藻多酚和多糖对OH~-的清除作用36-37
• 3.5.2 鼠尾藻多酚和多糖对O_2~-的清除作用37
• 3.6 数据处理37-38
• 4 实验结果38-44
• 4.1 鼠尾藻多酚和多糖对XOD抑制作用的研究38-41
• 4.1.1 鼠尾藻多酚和多糖对XOD半抑制浓度的测定38
• 4.1.2 鼠尾藻多酚和多糖对XOD抑制作用机理的测定38-39
• 4.1.3 鼠尾藻多酚和多糖对XOD抑制作用类型和抑制常数的测定39-41
• 4.2 鼠尾藻多酚和多糖和别嘌呤醇对XOD的联合抑制作用41-42
• 4.3 鼠尾藻多酚和多糖的体外抗氧化作用42-44
• 4.3.1 鼠尾藻多酚和多糖对OH~-的清除作用42-43
• 4.3.2 鼠尾藻多酚和多糖对O_2~-的清除作用43-44
• 5 讨论44-46
• 第三章 海带多酚和多糖对黄嘌呤氧化酶的抑制作用46-56
• 1 前言46
• 2 实验材料、药品与仪器46
• 2.1 实验材料46
• 2.2 实验药品与试剂46
• 2.2.1 药品46
• 2.2.2 试剂配制46
• 2.3 实验仪器46
• 3 实验方法46-48
• 3.1 海带多糖和多酚的制备46-47
• 3.1.1 海带多糖的制备46-47
• 3.1.2 海带多酚的制备47
• 3.2 海带多酚和多糖对XOD抑制活性的测定47
• 3.2.1 海带多酚和多糖对XOD半抑制浓度的测定47
• 3.2.2 海带多酚和多糖对XOD抑制机理的测定47
• 3.2.3 海带多酚和多糖对XOD抑制类型和抑制常数的测定47
• 3.3 海带多酚和多糖与别嘌呤醇对XOD的联合抑制作用47
• 3.4 海带多酚和多糖的体外抗氧化作用47-48
• 3.4.1 海带多酚和多糖对OH~-的清除作用47-48
• 3.4.2 海带多酚和多糖对O_2~-的清除作用48
• 3.5 数据处理48
• 4 实验结果48-54
• 4.1 海带多酚和多糖对XOD抑制作用的研究48-52
• 4.1.1 海带多酚和多糖对XOD半抑制浓度的测定48
• 4.1.2 海带多酚和多糖对XOD抑制机理的测定48-49
• 4.1.3 海带多酚和多糖对XOD抑制类型和抑制常数的测定49-52
• 4.2 海带多酚和多糖和别嘌呤醇对XOD的联合抑制作用52
• 4.3 海带多酚和多糖的体外抗氧化作用52-54
• 4.3.1 海带多酚和多糖对OH~-的清除作用52-53
• 4.3.2 海带多酚和多糖O_2~-的清除作用53-54
• 5 讨论54-56
• 第四章 海带多糖对高尿酸血症小鼠降尿酸效果的研究56-66
• 1 前言56
• 2 实验材料、药品和仪器56-58
• 2.1 实验材料56
• 2.2 药品与试剂56-58
• 2.2.1 药品56-57
• 2.2.2 试剂配制57-58
• 2.3 仪器58
• 3 实验方法58-60
• 3.1 小鼠实验分组和给药58-59
• 3.2 血清尿酸水平的测定59
• 3.3 海带多糖对小鼠肝脏XOD活力的影响59-60
• 3.3.1 蛋白质标准曲线的绘制59
• 3.3.2 尿酸标准曲线的绘制59-60
• 3.3.3 肝脏XOD活性测定60
• 3.4 数据处理60
• 4 实验结果60-64
• 4.1 海带多糖对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响60-61
• 4.2 海带多糖对小鼠肝脏XOD活力的影响61-63
• 4.2.1 蛋白质标准曲线61-62
• 4.2.2 尿酸标准曲线62
• 4.2.3 小鼠肝脏XOD活力测定62-63
• 4.3 小鼠的生长状态63-64
• 5 讨论64-66
• 全文总结66-68
• 参考文献68-74
• 致谢74-75
• 个人简历75
• 已发表学术论文75

【参考文献】

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1 史s

本文编号：266741