高效亲和层析填料的制备

发布时间：2017-03-25 21:15

  本文关键词：高效亲和层析填料的制备，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：蛋白A亲和层析载量高、操作简单、一步就能得到纯度很高的抗体,无论是在欧美发达国家还是中国,绝大部分抗体纯化的第一步都选择了蛋白A亲和层析。每升蛋白A亲和层析填料价格超过1万美元,是抗体产品生产成本中的重要因素。为了降低抗体生产成本,本文尝试制备蛋白A亲和层析填料,最终得到了高质量的填料。首先,我们选择了3种不同材料的基质作为填料的骨架,即Sepharose 4FF、Profinity Epoxide和Polar MC60-Epoxy,其中Sepharose 4FF在600cm/h的线性流速时的压力就高达3.5bar,背景压力高、耐压性较差,首先被排除,Profinity Epoxide在保留时间仅为0.5分钟时的动态载量就达到了静态载量的52.8%,传质速率比Polar MC60-Epoxy明显要好,所以我们最终选择了Profinity Epoxide作为我们进行交联的骨架。其次,通过比浊法确定了蛋白A在不同盐浓度下的稳定性,通过正交实验确定了最佳pH和最佳温度,通过全因素实验确定了最佳的盐浓度和反应时间。然后比较了不同蛋白A添加量对载量的影响,确定了最佳的蛋白A添加量。通过这几个实验确定了所有影响交联的参数,即pH为8.5,盐浓度为1.3mol/L Na2SO4,反应温度为37℃,反应时间为4小时,蛋白A的添加量为8mg蛋白A/mL基质。最后我们又进行了放大和重复,证明了该工艺稳定可放大。最后,我们对所制备的蛋白A亲和层析填料进行了评价。自制的蛋白A亲和层析填料在保留时间为8分钟时动态载量为34.5mg/mL,在线性流速为1000cm/h时背景压力仅为2.7bar,实际使用时的蛋白A脱落为10ppm。最后,用自制的蛋白A亲和层析填料纯化了3株抗体,结果显示自制填料纯化抗体收率高,纯度好。本文建立了一种有效的蛋白A亲和层析填料制备方法,所得填料刚性强、传质快、背压低、载量高、收率高、纯度好,可以有效降低抗体的生产成本,为国产蛋白A亲和填料的制备提供了一种行之有效的方法。
【关键词】：亲和层析 蛋白A 抗体 纯化 交联
【学位授予单位】：北京理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 第1章 绪论11-19
• 1.1 本论文研究的目的和意义11-12
• 1.2 国内外研究现状及发展趋势12-19
• 1.2.1 蛋白A简介12-15
• 1.2.2 蛋白A亲和层析的原理15-17
• 1.2.3 蛋白A亲和层析填料的现状17-19
• 第2章 基质的选择19-26
• 2.1 引言19
• 2.2 材料与试剂19-20
• 2.2.1 主要仪器与设备19-20
• 2.2.2 主要试剂与材料20
• 2.2.3 主要溶液及配方20
• 2.3 实验方法20-22
• 2.3.1 基质的刚性20-21
• 2.3.2 基质的传质速率21-22
• 2.4 实验结果22-25
• 2.4.1 三种基质的刚性22-23
• 2.4.2 基质的传质速率23-25
• 2.5 小结25-26
• 第3章 偶联条件的优化26-38
• 3.1 引言26
• 3.2 材料与试剂26-27
• 3.2.1 主要仪器与设备26
• 3.2.2 主要试剂与材料26-27
• 3.2.3 主要溶液及配方27
• 3.3 实验方法27-33
• 3.3.1 蛋白A的稳定性27-28
• 3.3.2 偶联条件的优化28-31
• 3.3.3 蛋白A的加入量31-32
• 3.3.4 放大与与重复32-33
• 3.4 实验结果33-37
• 3.4.1 蛋白A的稳定性33
• 3.4.2 偶联条件的优化33-36
• 3.4.3 蛋白A的加入量36-37
• 3.4.4 放大与重复37
• 3.5 小结37-38
• 第4章 填料的评价38-45
• 4.1 引言38
• 4.2 材料与试剂38-39
• 4.2.1 主要仪器与设备38
• 4.2.2 主要试剂与材料38
• 4.2.3 主要溶液及配制方法38-39
• 4.3 实验方法39-40
• 4.3.1 蛋白A亲和层析填料的动态载量39
• 4.3.2 蛋白A亲和层析填料的压力流速关系39
• 4.3.3 蛋白A的脱落39-40
• 4.3.4 实际抗体纯化应用40
• 4.4 实验结果40-44
• 4.4.1 蛋白A亲和层析填料的动态载量40-41
• 4.4.2 蛋白A亲和层析填料的压力流速关系41-42
• 4.4.3 蛋白A的脱落42
• 4.4.4 实际抗体纯化应用42-44
• 4.5 小结44-45
• 结论45-47
• 参考文献47-52
• 致谢52

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本文编号：267808