人乳寡糖的分离纯化及其结构解析

发布时间：2017-03-30 13:04

  本文关键词：人乳寡糖的分离纯化及其结构解析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：人乳寡糖(HMOs)有益生、抗病毒和促进婴儿大脑发育等多种生物活性,然而人乳寡糖的合成瓶颈限制了人乳寡糖构效关系的研究,这就凸显了分离纯化天然人乳寡糖的重要性。本文以人乳为原料,经离心脱脂、除蛋白后获得HMOs粗提取物,粗品得率为53g/L,其总糖含量为92.5%(W/W),蛋白含量为3.7%(W/W)。首次联合运用低压凝胶渗透色谱、高效离子交换色谱、多孔石墨化碳色谱分离纯化技术分离获得了18个中性人乳寡糖和8个酸性人乳寡糖组分,并运用电喷雾碰撞诱导串联质谱技术(ESI-CID-MS/MS)对其进行结构解析。结果表明,获得的寡糖聚合度为3-9,且同一聚合度的寡糖有连接方式不同的异构体。在得到的18种天然中性人乳寡糖中,三糖异构体有2种,四糖异构体有2种,五糖异构体有3种,六糖异构体有2种,七糖异构体有2种,八糖异构体有4种,九糖异构体有2种：在得到的8种天然酸性人乳寡糖中,三糖异构体2种,五糖异构体2种,六糖异构体2种,七糖和八糖各1种。这些寡糖主链的二元结构核心单元Galβ1-4Glc和Galβ1-3GlcNAc或Galβl-4GlcNAc,且还原端二元结构为Gal/β1-4Glc,各二元结构之间通过β1-3或β1-6连接,Fuc可连接在Gal的C2位、Glc的C3位、GlcNAc的C3或C4位；Neu5Ac连接在GlcNAc的C6位、Gal的C3或C6位上。本文首次利用多维色谱技术将结构复杂的人乳寡糖进行分离,获得了包括不同异构体在内的26种天然人乳寡糖,并采用先进的ESI-CID-MS/MS技术确定了它们的结构序列,克服了非衍生寡糖异构体分离度较低以及寡糖异构体结构确定难的问题,为进一步从事人乳寡糖构校关系的研究奠定了方法学参考。
【关键词】：人乳寡糖 石墨化碳色谱 分离纯化 电喷雾碰撞诱导串联质谱 结构解析
【学位授予单位】：中国海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R151
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 第一章 前言11-28
• 1 人乳寡糖的分离纯化技术11-15
• 1.1 薄层色谱法12
• 1.2 凝胶色谱法12
• 1.3 离子交换色谱法12-13
• 1.4 亲和色谱法13
• 1.5 高效毛细管电泳法13
• 1.6 吸附色谱法13-14
• 1.7 多孔石墨化碳色谱14-15
• 2 人乳寡糖的结构与含量分析研究进展15-21
• 2.1 人乳寡糖的结构研究16-20
• 2.2 人乳寡糖的含量20-21
• 3 人乳寡糖的合成21-23
• 3.1 人乳寡糖的体内合成途径21-22
• 3.2 人乳寡糖的酶合成22-23
• 3.3 人乳寡糖的化学合成23
• 4 人乳寡糖的活性研究23-27
• 4.1 免疫调节作用24
• 4.2 抗病毒活性24-26
• 4.3 调节肠道微生物生长26
• 4.4 促进大脑发育26-27
• 5 研究目的及意义27-28
• 第二章 人乳寡糖的提取方法研究28-37
• 1 引言28
• 2 试剂仪器及材料28-29
• 2.1 实验材料28
• 2.2 实验试剂28
• 2.3 实验仪器28-29
• 3 实验方法29-32
• 3.1 脱脂29
• 3.2 除蛋白29-30
• 3.3 粗品POS的理化性质研究30-32
• 4 实验结果与讨论32-36
• 4.1 总糖和蛋白含量检测32-33
• 4.2 单糖组成测定33-34
• 4.3 唾液酸测定34-36
• 5 小结36-37
• 第三章 人乳寡糖的分离纯化研究37-52
• 1 引言37
• 2 仪器及试剂37-38
• 2.1 实验试剂37-38
• 2.2 实验仪器38
• 3 实验方法38-41
• 3.1 中性和酸性人乳寡糖的分离38-39
• 3.2 中性人乳寡糖的凝胶柱分离39-40
• 3.3 人乳寡糖的PGC色谱分离40-41
• 4 实验结果与讨论41-50
• 4.1 中性和酸性人乳寡糖分离方法讨论41-43
• 4.2 中性人乳寡糖的凝胶柱分离效果分析43-46
• 4.3 人乳寡糖的PGC色谱分离46-50
• 5 小结50-52
• 第四章 人乳寡糖的结构序列分析研究52-70
• 1 引言52
• 2 仪器与试剂52
• 3 实验方法52-53
• 4 实验结果与讨论53-69
• 4.1 中性人乳寡糖的结构序列分析53-64
• 4.2 酸性人乳寡糖的结构序列分析64-69
• 5 小结69-70
• 结语70-71
• 创新点71-72
• 参考文献72-81
• 发表的学术文章81-82
• 致谢82

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