吡咯喹啉醌对促进软骨细胞增殖及抑制IL-1β介导的软骨细胞凋亡的影响

发布时间：2017-04-01 20:12

  本文关键词：吡咯喹啉醌对促进软骨细胞增殖及抑制IL-1β介导的软骨细胞凋亡的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的观察吡咯喹啉醌(Pyrroloquinoline quinone,PQQ)对促进兔膝关节软骨细胞的增殖及对IL-1β介导的软骨细胞凋亡的影响,以探讨PQQ在保护软骨细胞方面的作用机制。方法1.在无菌的环境下取1月龄的新西兰白兔的膝关节软骨组织,加入0.2%的Ⅱ型胶原酶对其进行消化,消化完成后用200目钢网过滤、离心、重悬软骨细胞于含10%FBS及1%双抗的DMEM/F-12培养液中,然后放于37℃,5%CO2孵箱中培养软骨细胞。2.倒置相差显微镜下观察原代软骨细胞自接种到培养皿中开始直到基本长满培养皿底部时的不同时期的形态。3.取第2代对数生长期的软骨细胞,调整至合适的细胞密度,细胞贴壁后用PQQ浓度分别为0,6.25,12.5,25.0,50.0,100.0μmol/L的无血清培养基分别培养软骨细胞48h,采用MTT法来检测软骨细胞的增殖活力。4.将第2代对数生长期的软骨细胞调至适当密度后接种于6个100mm培养皿中,24h贴壁后,弃上清,分别加用PQQ浓度为0,6.25,12.5,25.0,50.0,100.0μmol/L的无血清培养基继续培养30h,收集软骨细胞,取1ml的单细胞悬液离心去掉上清,加入70%冷乙醇500μl固定,4℃过夜,PBS洗去固定液,加入100μl RNase A37℃水浴30min,再加入400μl的Propidium Iodide染色混匀后用流式细胞仪检测细胞周期,计算软骨细胞增殖指数。5.在100mm培养皿中接种软骨细胞,细胞贴壁后用PQQ浓度分别为0,6.25,12.5,25.0,50.0,100.0μmol/L无血清培养基预处理软骨细胞24h,然后加入终浓度为10 ng/mL的IL-1β,继续作用15h,收集上清液,与用0.25%的胰酶(不含EDTA)消化收集后的细胞悬液混合,离心,预冷PBS洗涤细胞,加入200μl的Binding Buffer悬浮细胞,然后加入5μl的Annexin V-FITC(AV)混匀,继续加入5μl Propidium Iodide(PI)混匀,避光、室温孵育15min,加入300μl Binding Buffer轻轻混匀。采用流式细胞术测软骨细胞的凋亡率。结果1.实验中的软骨细胞贴壁后细胞呈现三角形、多角形或不规则形,当软骨细胞生长连接成片时可见呈现“铺路石样”。2.MTT实验结果显示,与对照组相比软骨细胞的增殖活力随PQQ浓度的增加而成逐渐升高的趋势,差异具有统计学意义(P0.05),在PQQ浓度为25.0μmol/L时达到最大值,50.0μmol/L和100.0μmol/L时细胞增殖活力下降。3.PQQ能明显提高软骨细胞的增殖活力、S(%)期,G2/M(%)的比例和软骨细胞的增殖指数(P0.05),且在PQQ浓度为12.5μmol/L和25.0μmol/L时作用最强。4.PQQ能明显抑制IL-1β介导的软骨细胞早期凋亡和晚期凋亡(P0.05),在PQQ浓度为25.0μmol/L时作用最明显。结论PQQ可以促进膝关节软骨细胞的分裂与增殖,对IL-1β介导的软骨细胞的凋亡具有抑制作用。
【关键词】：吡咯喹啉醌 软骨细胞 流式细胞术 细胞周期 细胞凋亡
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R68
【目录】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 材料与方法13-17
• 1.实验材料13-14
• 1.1 实验对象13
• 1.2 药品与试剂13
• 1.3 主要仪器13-14
• 1.4 溶液配制14
• 2.实验方法14-16
• 2.1 软骨细胞提取和培养14-15
• 2.2 软骨细胞的形态学观察15
• 2.3 MTT比色法测细胞增殖15
• 2.4 细胞周期的检测15-16
• 2.5 细胞凋亡的检测16
• 3.统计学分析16-17
• 结果17-21
• 1.软骨细胞的形态学观察17-18
• 2. 不同浓度PQQ对软骨细胞增殖活力的影响18
• 3. 不同浓度PQQ对软骨细胞周期的影响18-19
• 4．不同浓度PQQ对抑制IL-1β 介导的软骨细胞凋亡的影响19-21
• 讨论21-22
• 结论22-23
• 参考文献23-26
• 综述26-37
• 参考文献32-37
• 攻读学位期间发表文章情况37-38
• 致谢38-39

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 何清义,李起鸿,许建中,杨柳;转化软骨细胞与正常软骨细胞的生物特性比较[J];中国临床康复;2002年10期

2 王小虎;卫小春;陈维毅;;软骨细胞力学特性的研究进展[J];中华医学杂志;2006年21期

3 沈雁,唐毅,李斯明,钟灿灿,梁佩红;碱性成纤维细胞生长因子与透明质酸对培养兔软骨细胞的作用[J];中华创伤杂志;2000年06期

4 林建华,吴朝阳,许卫红;不同培养时间软骨细胞的生物学特性[J];福建医科大学学报;2000年02期

5 张文涛,卢世璧,黄英,李楠;软骨细胞形态对其缝隙连接的影响[J];中国创伤骨科杂志;2000年04期

6 杨物鹏,许建中;软骨细胞培养及其调控[J];中国矫形外科杂志;2000年08期

7 杨彩荣;软骨细胞培养及其调控因素研究进展[J];国外医学.耳鼻咽喉科学分册;2002年03期

8 张文涛,卢世璧,黄英,李楠;软骨细胞形态、表型与胞间通讯研究[J];中国修复重建外科杂志;2002年05期

9 杨运东 ,陈基长;不同施加因素对软骨细胞的影响[J];中医正骨;2002年09期

10 张艳,柴岗,崔磊,刘伟,曹谊林;不同类型人软骨细胞体外生物学特性比较[J];中华实验外科杂志;2003年06期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 张春雷;孙美乐;姚洪菊;;抗氧化剂和透明质酸对软骨细胞的保护作用[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年

2 任宏造;;软骨细胞的超生结构病理[A];第六次全国电子显微学会议论文摘要集[C];1990年

3 张杨;崔丽;郭悦;孙晓雷;李秀兰;;滑膜细胞微环境对软骨细胞生物学活性的影响[A];第十八届全国中西医结合骨伤科学术研讨会论文汇编[C];2011年

4 柏涛;;骨髓间充质干细胞诱导表达软骨细胞表型的研究进展[A];玉溪市第三届二次骨科学术研讨会论文汇编[C];2009年

5 周红辉;万福生;;人骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的实验研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年

6 王正辉;吴宝俊;许珉;;壳聚糖/明胶复合不同软骨细胞体外构建组织工程软骨的实验研究[A];全国耳鼻咽喉头颈外科中青年学术会议论文汇编[C];2012年

7 马剑雄;马信龙;张华锋;张园;王志钢;杨阳;;生物力学因素在激素性股骨头坏死中对软骨细胞的作用[A];2009第十七届全国中西医结合骨伤科学术研讨会论文汇编[C];2009年

8 李建华;黄建荣;康奕飞;许继德;涂永生;;体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的研究[A];中南地区第六届生理学学术会议论文摘要汇编[C];2004年

9 石印玉;曹月龙;冯伟;郑昱新;石瑛;王翔;;补肾、柔肝中药对软骨细胞生物功能的影响[A];2004'中华中医药科技成果专辑[C];2004年

10 许道荣;金丹;肖庭辉;余斌;;长时间拉伸应变对软骨细胞生化环境的影响[A];第20届中国康协肢残康复学术年会论文选集[C];2011年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 聂翠蓉;英科学家从成人骨骼中找到软骨干细胞[N];科技日报;2008年

2 吴一福;西安交大：用人胎儿软骨细胞培养成功软骨组织工程种子细胞[N];中国医药报;2006年

3 中文;人体软骨举足轻重[N];广东科技报;2000年

4 刘霞;英用患者组织细胞成功培育出再生软骨[N];科技日报;2010年

5 保健时报特约记者 方序;体外“养”一块软骨补膝盖[N];保健时报;2011年

6 记者 张可喜;培养软骨细胞[N];新华每日电讯;2002年

7 健康时报记者 李海清;软骨破了打“补丁”[N];健康时报;2009年

8 杨春;药物增高不可信[N];大众卫生报;2005年

9 黄枫 谢国平;中医药治疗膝骨关节炎实验研究进展[N];中国中医药报;2006年

10 记者 何屹;英国用干细胞成功培育出软骨组织[N];科技日报;2005年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 王晓凤;自噬在软骨发育不全与软骨生成中的作用与机制研究[D];第三军医大学;2015年

2 王胜楠;杜仲苷对IL-1β诱导的软骨细胞分解代谢和凋亡的影响及其作用机制[D];南方医科大学;2015年

3 张元民;MiR-145在原发性膝关节骨性关节炎软骨中的表达及其意义[D];天津医科大学;2015年

4 张龙强;整合素β1促进GIT1表达而影响软骨细胞增殖凋亡的研究[D];山东大学;2015年

5 梁锦前;瘦素对于人OA软骨细胞RhoA/LIMK1/Cofilin细胞骨架调控通路的作用[D];中国协和医科大学;2010年

6 杨运东;骨炎定对体外培养软骨细胞的影响[D];广州中医药大学;2001年

7 张e，

本文编号：281213