虎杖饮片加工工艺及其活性成分对痛风性关节炎的作用研究

发布时间：2020-10-30 05:18

　　 虎杖作为常用中药,用药历史悠久,古籍中记载了很多虎杖的炮制方法,从东汉《神农本草经》到明朝的《本草纲目》等,主要以“细锉,晒干”为主,也有“洗去皴皮,锉焙捣筛”、“烧,锉”等不一样的炮制方法,但其具体的炮制工艺并未详细说明。现今,2015版《中国药典》对虎杖的炮制方法为“切厚片,干燥”,也并未具体描述工艺;文献研究发现虎杖对痛风具有很好临床疗效,但其药效物质基础不明确。因此,本论文对虎杖饮片加工工艺、抗痛风性关节炎的物质基础进行研究,以期规范虎杖炮制工艺,明确虎杖抗痛风性关节炎主要活性成分及其作用机理。主要研究内容如下:1.单因素实验与正交实验相结合优选虎杖饮片的加工工艺首先将虎杖药材分为大小两档,然后采用单因素实验设计法,以浸泡时间、润制温度、润制时间为考察因素,以虎杖饮片浸出物、灰分、虎杖苷、白藜芦醇、大黄素8-O-β-D葡萄糖苷、大黄素及大黄素甲醚为评价指标,通过聚类分析分析各组5种有效成分之间的差异并结合浸出物和灰分的数据,综合优选出最佳的软化工艺。虎杖的干燥工艺采用正交实验设计法,以干燥时间、干燥温度、干燥厚度、翻动次数为考察因素,以水分、浸出物、虎杖苷、白藜芦醇、大黄素8-O-β-D葡萄糖苷、大黄素及大黄素甲醚为评价指标,通过AHP层域分析软件计算出各个指标的权重系数,然后采用综合加权评分法优选虎杖干燥工艺,并对大小档虎杖药材的软化和干燥工艺进行工艺验证。小档虎杖药材最佳炮制工艺为:浸泡30min后于20℃下润制24h,切制成厚片,在60℃下干燥4h,干燥厚度为3cm,干燥期间翻动1次;大档虎杖药材最佳炮制工艺为:浸泡30min后于20℃下润制45h,切制成厚片,在60℃下干燥4h,干燥厚度为4cm,干燥期间翻动1次。2.虎杖HPLC指纹图谱与抗痛风性关节炎的谱效关系研究采用高效液相色谱法对10批虎杖饮片进行分析,建立虎杖HPLC指纹图谱,以小鼠足垫厚度、血清中UA含量为虎杖抗痛风性关节炎药效指标,采用灰色关联度分析法分析其谱效关系,最终发现虎杖的抗痛风性关节炎作用可能是多成分共同作用的结果。其中抗痛风性关节炎作用贡献较大的特征峰主要有峰7(虎杖苷)、峰9(槲皮素)、峰11(白藜芦醇),峰12(槲皮苷)、峰13(大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷)、峰16(大黄素)和峰18(大黄素甲醚)。3.虎杖苷抗痛风性关节炎药效学研究将SD大鼠随机分为6组,分别为空白对照组、模型组、虎杖苷低剂量组、虎杖苷中剂量组、虎杖苷高剂量组、秋水仙碱组,每组6只,除了空白对照组外,其他组大鼠均皮下注射0.2 ml(4mg)无内毒素的MSU晶体悬液进入右侧足垫诱导炎症造模。造模后虎杖苷低、中、高剂量组分别灌胃给药25、50、100mg/kg,秋水仙碱组灌胃给药1mg/kg,空白对照组和模型组给予相同体积的生理盐水灌胃。连续给药3天。通过大鼠的足垫厚度肿胀程度、血清IL-1β、IL-6、PGE2、MCP-1、UA、MPO、NO、XOD含量,来评价虎杖苷对痛风性关节炎的影响,并进行研究。与模型组相比,各给药组均能明显减轻SD大鼠的足垫肿胀程度,而且虎杖苷低、中、高剂量组均能不同程度降低IL-6、IL-1β、UA、XOD、NO、PGE2、MPO、MCP-1的含量,其中高剂量组效果最好(P0.05)。以上结果可以推测出虎杖苷可以从嘌呤代谢、尿酸代谢和抑制炎性细胞因子三个方面来发挥抗痛风性关节炎的作用。
【学位单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2020
【中图分类】：R259;R283
【部分图文】：

虎杖饮片加工工艺及其活性成分对痛风性关节炎的作用研究5按照“2.1.1”实验选择的软化工艺条件，软化虎杖药材并切制成厚片，选择温度、时间、厚度以及翻动次数对干燥效果有直接影响的因素，按L9(34)正交表设计试验（见表1-2），每份100g，分组干燥，制成虎杖饮片。图1-1大小档虎杖药材照片（左为大档，右为小档）表1-1小档虎杖药材软化工艺（单因素）实验条件因素变化条件固定条件浸泡时间15、30、45min润制温度20℃、润制时间28h润制温度10、15、20℃浸泡时间30min、润制时间28h润制时间24、28、32h浸泡时间30min、润制温度20℃表1-2虎杖饮片干燥工艺因素水平表水平因素A温度（℃）B时间（h）C厚度（cm）D翻转次数（次）140421260632380843

虎杖饮片加工工艺及其活性成分对痛风性关节炎的作用研究9图1-2小档虎杖药材不同浸泡、润制工艺样品聚类分析图2.6.2干燥工艺研究小档虎杖药材按“2.6.1”实验结果，即药材浸泡30min后，于20℃润制24h，切厚片。根据表1-2实验条件进行分组干燥，将制好的样品按照以上测定方法，对水分、浸出物、及5种有效成分进行测定，其测定结果如表1-4。表1-4小档虎杖干燥工艺样品水分、浸出物及含量测定结果样品123456789水分（%）8.688.477.226.215.595.556.385.696.03浸出物（%）16.8517.1317.3416.8016.6616.7116.0716.1716.88虎杖苷（%）1.361.341.321.491.501.481.161.211.11白藜芦醇（%）0.670.750.770.740.720.680.770.780.84大黄素8-O-β-D葡萄糖苷（%）0.530.530.590.680.650.650.360.370.33大黄素（%）0.951.131.111.001.070.981.181.201.24大黄素甲醚（%）0.740.700.640.810.620.820.730.740.71将虎杖各指标成分含量作为权重指标予以量化，确定各指标的优先顺序为虎杖苷含量＞大黄素含量＞水分＞浸出物＞白藜芦醇含量

湖北中医药大学2020届硕士学位论文16第2组和第4、5组聚在一起并无很大差异，其中第2、4、5组中只有润制温度不同（分别为20、10、15℃），结合表2实验数据发现：相对其它两组，第2组（润制20℃）虎杖苷、大黄素含量较高，灰分含量较小，综合各个因素得出润制工艺最佳润制温度为20℃；第7组和第2、6组样品差异较大，其中第2、6、7组中只有润制时间不同（分别为40、45、50h），结合表2实验数据发现：第7组（润制50h）与其它两组相比虎杖苷、大黄素、白藜芦醇、大黄素甲醚都偏低，因此润制50h并不太合适，再加上润制40h组在润制结束后发现有部分药材并未润透心的情况存在，因此综合各个因素最终得出润制工艺最佳润制时间为45h。图1-3大档虎杖药材不同浸泡、润制工艺样品聚类分析图2.3.2干燥工艺按上述大档虎杖药材优选的软化工艺条件进行软化、切制成厚片。根据表1-2实验条件进行分组干燥，将制好的样品按照以上测定
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本文编号：2862043