左卡尼汀对模拟高原环境雄性大鼠生殖功能损伤的防护研究

发布时间：2020-11-11 05:55

　　 目的:1、观察模拟高原低压低氧环境对Wistar雄性大鼠睾丸器官指数、精子质量检测、睾丸组织形态、氧化损伤和血清性激素水平的影响;2、观察不同浓度左卡尼汀对模拟高原低压低氧环境Wistar雄性大鼠生殖能力的保护效果;方法:1、将36只12周的雄性Wistar大鼠随机分为四组,A组空白组,B组模型组,C组左卡尼汀低剂量组,D组左卡尼汀高剂量组。A组在低压氧舱外饲养(当地海拔1436m),B组、C组、D组均于模拟海拔6500m氧舱内饲养;A组空白组和B组模型组,均腹腔注射与C组左卡尼汀低剂量组相同容积的生理盐水,C组舱内左卡尼汀低剂量组采用腹腔注射50mg/kg·d,D组舱内左卡尼汀高剂量组则注射100mg/kg·d。干预28天后,将各组大鼠腹腔注射麻醉后称重,腹主动脉采血,离心取血清。2、取大鼠双侧睾丸组织称重计算睾丸组织器官指数;双侧附睾尾制成精子悬液,在显微镜下观察检测精子活动率、精子畸形率、精子计数和精子前向运动。3、取各组大鼠的睾丸组织,左侧睾丸组织进行苏木素-伊红染色(Hematoxylin-Eosin Sainingt,HE)后观察光镜下Wistar大鼠睾丸组织的形态改变,取材右侧睾丸组织在透射电镜(Transmission Eectronl Microscope,TEM)下观察Wistar大鼠睾丸组织中精原细胞、支持细胞等立体超微结构。取剩余右侧睾丸组织制备均浆液,使用试剂盒检测脂质过氧化代谢产物丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dsmutase,SODi)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GSH-PX)。4、使用Elisa分析试剂盒检测血清中睾酮(Testosterone,T)、黄体生成素(Luteinizing Hormones,LH)、促卵泡激素(Follicle Stimulating Hormone,FSH)等性激素水平。结果:1、在模拟高原低压低氧环境下,雄性Wistar大鼠睾丸器官指数与A组空白组相比较,B组模型组、C组左卡尼汀低剂量组和D组左卡尼汀高剂量组器官指数均下降(P0.01);与B组模型组相比较,C组左卡尼汀低剂量组和D组左卡尼汀高剂量组器官指数均升高(P0.01);与C组左卡尼汀低剂量组相比较,D组左卡尼汀高剂量组器官指数升高(P0.05)。2、模拟高原环境下,雄性Wistar大鼠精液参数比较:与A组空白组相比较,B组模型组、C组左卡尼汀低剂量组和D组左卡尼汀高剂量组精子活动率、前向运动下降,精子畸形率升高(P0.01),而B组模型组精子计数下降(P0.01);与B组模型组相比较,C组左卡尼汀低剂量组、D组左卡尼汀高剂量组精子活率、精子计数均明显升高,精子畸形率明显降低(P0.01),C组左卡尼汀低剂量组精子前向运动升高(P0.05),D组左卡尼汀高剂量组前向运动明显升高(P0.01);与C组左卡尼汀低剂量组相比较,D组左卡尼汀高剂量组精子畸形率增加(P0.05)。3、HE染色观察A组空白组,大鼠睾丸组织生精小管基膜完整,可见精子发生全过程,管腔内精子数量较多,精子无明显受损,细胞排列整齐,细胞极性规则,Johnsen评分(9.40±0.38)。与A组空白组相比较,B组模型组大鼠的睾丸组织生精小管基膜萎缩、变薄,褶皱、分层明显,可见明显空泡,精子数量极少,可见少数早期生精细胞,细胞排列极紊乱,层数减少,细胞极性消失,B组模型组Johnsen评分(5.83±0.64);而C组左卡尼汀低剂量组和D组左卡尼汀高剂量组的大鼠睾丸组织生精小管基膜有轻微的褶皱、萎缩、分层,精子数量增加,精子发生受损不明显,成熟生精细胞缺乏,细胞排列有少许的紊乱、稀疏,层数3-5层,细胞极性可见,但病理改变仍比A组空白组明显,C组左卡尼汀低剂量组Johnsen评分(8.39±0.49),D组左卡尼汀高剂量组Johnsen评分(8.29±0.64)。TEM观察各组大鼠睾丸组织中的精原细胞和支持细胞等,A组空白组可见正常的精原细胞、支持细胞等结构清晰,基膜完整,细胞见少量脂滴,线粒体无肿胀,内质网无扩张。B组模型组支持细胞胞浆内形成大量空泡,细胞器水肿空化明显,线粒体断裂肿胀,脂质异常增多;间质细胞核膜破裂,线粒体水肿,胞浆局部缺如、空化,细胞核异染色质增多,内质网扩张;精原细胞膜周围可见少量空泡,细胞膜破损明显;初级精母细胞内质网轻微肿胀,细胞膜模糊,细胞核异染色质增多;次级精母细胞周围大空泡形成。C组左卡尼汀低剂量组支持细胞与生精上皮轻微脱离,细胞膜及核膜结构尚清晰,线粒体轻微肿胀;间质细胞内质网轻度扩张,精原细胞核膜结构清晰,线粒体较正常。D组左卡尼汀高剂量组,支持细胞结构尚清晰,胞浆内可见少量空泡,线粒体轻微肿胀;间质细胞、精原细胞、初级精母细胞结构清晰,基膜完整,线粒体无肿胀,内质网无肿胀。4、MDA:与A组空白组相比较,B组模型组、C组左卡尼汀低剂量组和D组左卡尼汀高剂量组均升高(P0.01);与B组模型组相比较,C组左卡尼汀低剂量组、D组左卡尼汀高剂量组降低(P0.01)。SOD:与A组空白组相比较,B组模型组(P0.01)、C组左卡尼汀低剂量组(P0.01)和D组左卡尼汀高剂量组(P0.05)均降低;与B组模型组相比较,C组左卡尼汀低剂量组、D组左卡尼汀高剂量组升高(P0.01)。GSH-PX:与A组空白组相比较,B组模型组、C组左卡尼汀低剂量组和D组左卡尼汀高剂量组均降低(P0.01);与B组模型组相比较,C组左卡尼汀低剂量组、D组左卡尼汀高剂量组升高(P0.01)。5、睾酮T:与A组空白组相比较,B组模型组、C组左卡尼汀低剂量组和D组左卡尼汀高剂量组均降低(P0.01);黄体生成素LH:各组间并无差异;促卵泡激素FSH:B组模型组(P0.05)、C组左卡尼汀低剂量组(P0.05)和D组左卡尼汀高剂量组(P0.01)均降低。结论:1、模拟高原低压低氧环境可降低Wistar雄性大鼠睾丸器官指数;降低精子活率、前向运动、精子计数,提高畸形率;造成睾丸组织形态损伤、氧化损伤和血清性激素水平改变;2、左卡尼汀对模拟高原低压低氧环境Wistar雄性大鼠生殖能力具有一定保护作用以100mg/kg,1/日时效果较佳。
【学位单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2020
【中图分类】：R965
【部分图文】：

左卡尼汀对模拟高原环境雄性大鼠生殖功能损伤的防护研究-21-图1各组大鼠睾丸器官指数2.4.2各组大鼠精子质量检测结果各组大鼠精子质量检测结果见表2、图2。与A组空白组相比较，B组模型组、C组左卡尼汀低剂量组和D组左卡尼汀高剂量组精子活动率、前向运动下降，精子畸形率升高，差异有显著统计学意义（P＜0.01），而B组模型组精子计数下降，差异有显著统计学意义（P＜0.01）；与B组模型组相比较，C组左卡尼汀低剂量组、D组左卡尼汀高剂量组精子活动率、精子计数均明显升高，精子畸形率明显降低，差异有显著统计学意义（P＜0.01）；C组左卡尼汀低剂量组精子前向运动升高，差异有统计学意义（P＜0.05），D组左卡尼汀高剂量组前向运动明显升高（P＜0.01），差异有显著统计学意义；与C组左卡尼汀低剂量组相比较，D组左卡尼汀高剂量组精子畸形率增加，差异有统计学意义（P＜0.05）。表2各组大鼠精子质量检测结果（，n等于9）组别n精子活动率(%)精子畸形率(%)精子计数(×106/ml)精子前向运动(%)A组空白组B组模型组9930.13±3.3715.44±2.81a1.51±0.033.78±0.14a31.54±2.2320.29±2.75a13.87±2.375.91±2.02a

左卡尼汀对模拟高原环境雄性大鼠生殖功能损伤的防护研究-22-注：与A组空白组比较，a：P＜0.01，b：P＜0.05；与B组模型组比较，c：P＜0.01，d：P＜0.05；与C左卡尼汀低剂量组相比较，e：P＜0.01，f：P＜0.05图2各组大鼠精子质量检测结果2.4.3睾丸组织形态各组睾丸组织形态，见下图3-5，光镜下观察A组空白组，大鼠睾丸组织生精小管基膜完整，可见精子发生全过程，管腔内精子数量较多，精子受损不明显，细胞排列整齐，约5-7层，细胞极性规则，Johnsen评分（9.40±0.38）。与A组空白组相比较，B组模型组，大鼠的睾丸组织生精小管基膜萎缩、变雹褶皱、分层明显，可见明显空泡，精子数量极少，可见少数早期生精细胞，细胞排列极紊乱，层数减少，细胞极性消失，A组空白组与B组模型组Johnsen评分【（9.40±0.38）vs（5.83±0.64)】，差异有显著统计学意义（P＜0.01）；而C组左卡尼汀低剂量组和D组左卡尼汀高剂量组的大鼠睾丸组织生精小管基膜有轻微的褶皱、萎缩、分层，精子数量增加，精子发生受损不明显，成熟生精细胞缺乏，细胞排列有少许的紊乱、稀疏，层数3-5层，细胞极性可见，但病理改变仍比A组空白组明显，A组空白组与C组左卡尼汀低剂量组Johnsen评分【（9.40±0.38）vs（8.39±0.49)】，A组空白组与D组左卡尼汀高剂量组Johnsen评分【（9.40±0.38）vs（8.29±0.64)】，P＜0.01，差异有明显的统计学意义。B组模型组与C组左卡尼汀低剂量组Johnsen评分【（5.83±0.64）vs（8.39±0.49)】，B组模型组与D组左卡尼汀高剂量组Johnsen评分【（5.83±0.64）vs（8.29±0.64)】，P＜C组左卡尼汀低剂量组D组左卡尼汀高剂量组9920.25±2.67ac21.47±4.09ac2.23±0.13ac2.34±0.15acf30.35±2.00c29.80±2.16c8.37±2.54ad9

左卡尼汀对模拟高原环境雄性大鼠生殖功能损伤的防护研究0.01，差 异 有 明 显 的 统 计 学 意 义 。C组 左 卡 尼 汀 低 剂 量 组 与 D组 左 卡 尼 汀高 剂 量 组 比 较 ， P＞ 0.05， 差 异 无 统 计 学 意 义 。
【参考文献】

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本文编号：2878838