体内噬菌体展示技术筛选人髓样乳腺癌细胞Bcap-37特异性结合肽
发布时间：2020-12-03 22:50
目的:利用噬菌体展示技术体内筛选法获得人髓样乳腺癌细胞Bcap-37特异性结合肽,为乳腺癌早期诊断提供分子靶向探针。方法:制备人髓样乳腺癌Bcap-37细胞荷瘤裸鼠模型,采用噬菌体环七肽库进行3轮体内筛选。免疫组化检测筛选过程中噬菌体在肿瘤及正常组织中的分布情况。酶联免疫吸附试验（ELISA）鉴定单克隆噬菌体对Bcap-37细胞的亲和力。提取阳性单克隆噬菌体DNA并测序,选取重复率高的序列合成多肽,制备光学分子探针。MTT法检测多肽及光学分子探针对Bcap-37细胞的毒性。用荧光倒置显微镜术和流式细胞术鉴定光学分子探针与Bcap-37细胞的特异性。最后在荷瘤裸鼠模型体内验证其对乳腺移植瘤的特异性和靶向性。结果:1经过三轮体内筛选,获得了特异性结合Bcap-37细胞异体移植瘤的噬菌体。随着每轮筛选,噬菌体的回收率不断提高,第三轮的回收率是第一轮的107.2倍。2免疫组化结果显示,随着筛选轮数的增加,肿瘤组织中结合的噬菌体数依次增加,肿瘤组织中噬菌体结合数明显高于正常组织。肿瘤组织切片扫描图像的吸光度（A）值均较正常组织高,差异均有统计学意义（均P<0.05）。3经ELISA鉴定,随...
【文章来源】： 郭超 山西医科大学
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人髓样乳腺癌Bcap-37细胞荷瘤裸鼠模型
山西医科大学硕士学位论文132结果2.1荷瘤裸鼠模型的建立接种人髓样乳腺癌Bcap-37细胞与Matrigel基底膜基质胶混悬液的裸鼠，2周内注射部位无明显变化。3周后，前肢腋窝部逐渐隆起长径约0.3～0.5cm的肿瘤。4～5周后瘤体长径可达2～2.5cm，形状规则近似球形，触之质地均一，无化脓和破损。（图2-1）图2-1人髓样乳腺癌Bcap-37细胞荷瘤裸鼠模型2.2肿瘤组织特异性结合噬菌体的富集经过三轮体内筛选，获得了能特异性结合Bcap-37细胞异体移植瘤的噬菌体。每轮筛选前，通过调整保持所加入噬菌体数量基本相同，但筛选后，从重量接近的肿瘤组织中回收的噬菌体数量逐渐增加，即表明回收率在不断提高。第三轮筛选中噬菌体的回收率是第一轮的107.2倍，富集效果明显。（图2-2,表2-1）图2-2三轮筛选中肿瘤组织洗脱噬菌体滴度测试
山西医科大学硕士学位论文14注：蓝色斑点为噬菌斑，代表一个阳性单克隆噬菌体。2A-2C分别为第一、二、三轮筛选后所回收噬菌的结果。表2-1每轮体内筛选中的噬菌体回收率轮次肿瘤重量（g）投入噬菌体数(pfu)回收噬菌体数(pfu)回收率第1轮0.451.0×10101.0×1042.222×10-6第2轮0.411.0×10105.0×1041.220×10-5第3轮0.421.0×10101.0×1062.381×10-4注：回收率=回收噬菌体数/投入噬菌体数/肿瘤重量2.3筛选中噬菌体在不同组织的分布情况三轮筛选中所分离肿瘤组织的免疫组化结果显示：随着每一轮筛选，与Bcap-37细胞异体移植瘤结合的噬菌体逐渐增加。全自动病理组织切片扫描仪输出的结果显示：三轮筛选中肿瘤组织切片扫描图像的A值逐渐增高且均高于空白对照肿瘤组织，差异均有统计学意义（均P<0.05）。（图2-3,表2-2）图2-3免疫组化鉴定三轮筛选中与肿瘤组织结合的噬菌体注：3A.空白对照为未参与筛选的移植瘤组织，3B-3D.分别为一、二、三轮筛选中的肿瘤组织，3A-3D均为DAB染色，放大200倍。表2-2三轮筛选中肿瘤组织切片扫描图像的吸光度(A)值(ｘ_±ｓ)肿瘤组织A值空白对照0.83±0.07第一轮4.46±0.68第二轮8.08±0.95第三轮12.28±1.79注：每轮筛选中肿瘤组织与空白对照相比，P<0.05；每轮筛选的肿瘤组织之间相比，P<0.05。
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于人群的乳腺癌预后参数研究现状[J]. 陈莉莉,石菊芳,刘玉琴,岳馨培,王乐,马恒敏,黄慧瑶,王仲照,代敏. 中华乳腺病杂志(电子版). 2018(06)
[2]光学分子影像学在肿瘤外科应用的前景[J]. 杨晓峰. 肿瘤防治研究. 2018(06)
[3]中国女性乳腺癌筛查现状及适宜模式探索[J]. 沈松杰,孙强. 协和医学杂志. 2018(04)
[4]肿瘤导向肽的研究进展[J]. 苗婕,张瑞,杨晓峰. 生命的化学. 2016(02)
[5]异硫氰酸荧光素在荧光标记领域的应用[J]. 张雪梅,胡志宇. 昆明学院学报. 2015(06)
[6]异硫氰酸荧光素-CSNRDARRC分子探针的荧光特性及其在体标记膀胱癌原位移植瘤的靶向性研究[J]. 闫三华,庞建智,杨晓峰,刘杰昊,张自强,张帆,罗俊茜. 中华泌尿外科杂志. 2015 (09)
[7]肝癌特异性结合肽的筛选及鉴定[J]. 朱小华,吴华. 中华核医学杂志. 2004(06)
本文编号：2896593
【文章来源】： 郭超 山西医科大学
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人髓样乳腺癌Bcap-37细胞荷瘤裸鼠模型
山西医科大学硕士学位论文132结果2.1荷瘤裸鼠模型的建立接种人髓样乳腺癌Bcap-37细胞与Matrigel基底膜基质胶混悬液的裸鼠，2周内注射部位无明显变化。3周后，前肢腋窝部逐渐隆起长径约0.3～0.5cm的肿瘤。4～5周后瘤体长径可达2～2.5cm，形状规则近似球形，触之质地均一，无化脓和破损。（图2-1）图2-1人髓样乳腺癌Bcap-37细胞荷瘤裸鼠模型2.2肿瘤组织特异性结合噬菌体的富集经过三轮体内筛选，获得了能特异性结合Bcap-37细胞异体移植瘤的噬菌体。每轮筛选前，通过调整保持所加入噬菌体数量基本相同，但筛选后，从重量接近的肿瘤组织中回收的噬菌体数量逐渐增加，即表明回收率在不断提高。第三轮筛选中噬菌体的回收率是第一轮的107.2倍，富集效果明显。（图2-2,表2-1）图2-2三轮筛选中肿瘤组织洗脱噬菌体滴度测试
山西医科大学硕士学位论文14注：蓝色斑点为噬菌斑，代表一个阳性单克隆噬菌体。2A-2C分别为第一、二、三轮筛选后所回收噬菌的结果。表2-1每轮体内筛选中的噬菌体回收率轮次肿瘤重量（g）投入噬菌体数(pfu)回收噬菌体数(pfu)回收率第1轮0.451.0×10101.0×1042.222×10-6第2轮0.411.0×10105.0×1041.220×10-5第3轮0.421.0×10101.0×1062.381×10-4注：回收率=回收噬菌体数/投入噬菌体数/肿瘤重量2.3筛选中噬菌体在不同组织的分布情况三轮筛选中所分离肿瘤组织的免疫组化结果显示：随着每一轮筛选，与Bcap-37细胞异体移植瘤结合的噬菌体逐渐增加。全自动病理组织切片扫描仪输出的结果显示：三轮筛选中肿瘤组织切片扫描图像的A值逐渐增高且均高于空白对照肿瘤组织，差异均有统计学意义（均P<0.05）。（图2-3,表2-2）图2-3免疫组化鉴定三轮筛选中与肿瘤组织结合的噬菌体注：3A.空白对照为未参与筛选的移植瘤组织，3B-3D.分别为一、二、三轮筛选中的肿瘤组织，3A-3D均为DAB染色，放大200倍。表2-2三轮筛选中肿瘤组织切片扫描图像的吸光度(A)值(ｘ_±ｓ)肿瘤组织A值空白对照0.83±0.07第一轮4.46±0.68第二轮8.08±0.95第三轮12.28±1.79注：每轮筛选中肿瘤组织与空白对照相比，P<0.05；每轮筛选的肿瘤组织之间相比，P<0.05。
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于人群的乳腺癌预后参数研究现状[J]. 陈莉莉,石菊芳,刘玉琴,岳馨培,王乐,马恒敏,黄慧瑶,王仲照,代敏. 中华乳腺病杂志(电子版). 2018(06)
[2]光学分子影像学在肿瘤外科应用的前景[J]. 杨晓峰. 肿瘤防治研究. 2018(06)
[3]中国女性乳腺癌筛查现状及适宜模式探索[J]. 沈松杰,孙强. 协和医学杂志. 2018(04)
[4]肿瘤导向肽的研究进展[J]. 苗婕,张瑞,杨晓峰. 生命的化学. 2016(02)
[5]异硫氰酸荧光素在荧光标记领域的应用[J]. 张雪梅,胡志宇. 昆明学院学报. 2015(06)
[6]异硫氰酸荧光素-CSNRDARRC分子探针的荧光特性及其在体标记膀胱癌原位移植瘤的靶向性研究[J]. 闫三华,庞建智,杨晓峰,刘杰昊,张自强,张帆,罗俊茜. 中华泌尿外科杂志. 2015 (09)
[7]肝癌特异性结合肽的筛选及鉴定[J]. 朱小华,吴华. 中华核医学杂志. 2004(06)
本文编号：2896593
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