Notch3表达异常影响胎盘滋养细胞分化的检测分析与调控机制研究

发布时间：2020-12-04 11:41

　　合体滋养细胞作为母胎屏障的重要组成部分,承担母胎间营养、气体交换和激素分泌等生物学功能,在维持正常妊娠的过程中扮演重要角色。Notch信号在人干细胞生态位的自我更新和分化,决定细胞命运发挥重要作用。Notch3作为Notch信号通路受体蛋白,亦可决定人胎盘滋养细胞命运,但其在人胎盘合体滋养细胞分化中的作用,以及此生物过程调控异常是否参与子痫前期的发生,目前均不明确。本研究利用人早孕绒毛、足月胎盘组织、原代滋养细胞（Primary Human Trophoblast,PHT）及BeWo细胞合体化模型,采用IFC、IHC、Western blot及qRT-PCR等检测技术,验证Notch3在人胎盘滋养细胞中的表达模式,明确Notch3在滋养细胞合体化过程中的作用;采用血清饥饿法阻滞BeWo细胞周期验证细胞周期阻滞对滋养细胞合体化过程的影响;利用缺氧培养BeWo细胞模型验证缺氧对滋养细胞合体化过程的影响;最后利用Ad-N3ICD腺病毒构建体内Notch3过表达孕鼠模型,明确Notch3对孕鼠的影响以及探究Notch3在子痫前期发病中的作用。现研究结果如下:一、Notch3在人胎盘滋养细胞中的... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Notch家族在人原代滋养细胞合体化中的检测

重庆医科大学硕士研究生学位论文29养细胞，模拟滋养细胞合体化过程。IHC检测Notch3的表达，结果显示，早孕绒毛外层的合体滋养细胞被成功的破坏并重新诱导生成合体滋养细胞；Notch3表达于细胞滋养细胞中，并在新生的合体滋养细胞中基本不表达（图2C）。这进一步验证了Notch3主要表达于细胞滋养细胞中，并在滋养细胞合体化中下调表达。图2Notch3在人早孕绒毛及足月胎盘组织中检测分析A.IF检测人早孕绒毛中Notch3和CK7的表达。细胞核使用DAPI染色。箭头指示CK7标记绒毛中单核的细胞滋养细胞，比例尺：20μm。B.IHC检测人早孕绒毛及足月胎盘中Notch3的表达。细胞核使用苏木精染色。箭头指示CK7标记绒毛中单核的细胞滋养细胞，比例尺：20μm。C.IHC检测人早孕绒毛合体滋养细胞重建模型中Notch3的表达，(a、b)为绒毛合体滋养细胞消化组织；(c、d)为FSK诱导绒毛合体滋养细胞重建组织。细胞核使用苏木精染色。箭头指示CK7标记绒毛中单核的细胞滋养细胞，比例尺：20μm。Figure2TheexpressionpatternofNotch3inhumanearlypregnancyvillousandtermplacentaA.ImmunofluorescencestainingofNotch3andCK7inthehumanplacentavillousfromthefirsttrimester.NuclearwerestainedwithDAPI.CK7-labeledmonocyteCTBcellsinthevillous(indicatedbyarrows);Scalebarrepresents20μm.B.ImmunohistochemicalstainingofNotch3,

重庆医科大学硕士研究生学位论文31图3Notch3对BeWo细胞合体化的影响A.IFC检测BeWo细胞合体化中Notch3和E-Cad的表达。细胞核使用DAPI染色。比例尺：20μm。B.Westernblot检测BeWo细胞合体化中Notch3,Syn2,GCM1及β-hCG的表达。C.qRT-PCR检测BeWo细胞合体化中Notch3,Hey1,Syn2,GCM1和β-hCG的mRNA水平。结果表示为平均值±样本标准差；*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。D.Westernblot检测DAPT

【参考文献】：
期刊论文
[1]缺氧诱导因子1α和血管内皮生长因子在子宫内膜癌中的表达及临床意义[J]. 孙文惠子,Dhruba Paudel,欧阳一芹,宋思蕊,童晓文,李怀芳,王建军,初磊.  第二军医大学学报. 2019(04)
[2]缺氧对胎盘滋养层细胞细胞周期和凋亡的影响[J]. 赵海君,张园,高玲玲,高超,崔毓桂,刘嘉茵.  江苏医药. 2012(19)



本文编号：2897541