MicroRNA-7过表达对小鼠胸腺CD8 + SP细胞发育的影响及机制研究
发布时间：2020-12-05 19:05
目的:观察microRNA-7过表达对小鼠胸腺CD8+SP细胞发育的影响并初步探讨其分子机制。方法:1.利用分子生物学技术构建miR-7（microRNA-7,miR-7）真核表达载体;利用显微胚胎注射技术成功构建miR-7过表达（miR-7 overexpression,miR-7 OE）小鼠。常规剪取7只F0代miR-7 OE小鼠尾巴（0.5-1cm）,按照小鼠基因型鉴定试剂盒抽提DNA,同时,剪取一只野生型（wild-type,WT）小鼠尾巴作为阴性对照。利用特异性引物,采用PCR技术扩增目的基因片段。2.提取WT和miR-7 OE小鼠的心脏、肝脏以及脾脏等11个不同组织器官的总RNA,用miR-7特异性引物逆转录成cDNA,利用Real-time PCR茎环法检测各组织器官中miR-7成熟体的表达水平。3.观测并记录WT和miR-7 OE小鼠从2周龄到9周龄的体重变化;HE染色观察8周龄WT和miR-7 OE小鼠心脏、肺脏以及肝脏等重要脏器的组织学结构改变。4.分别检测4周龄和8周龄WT和miR-7 OE小鼠胸腺大小、重量以及细胞总数的变化;HE染色观察各...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图0-1.胸腺T细胞的发育过程
遵义医科大学硕士学位论文胡琳12图0-2.不同的miRNA分子在CD8+T细胞发育过程中的作用Fig0-2.miRNA-mediatedregulationofCD8+Tcelldevelopment.(YanLiang,etal.JLeukocBiol.2015)总之，这些研究显示胸腺细胞及其亚群中特定miRNAs的表达对于其发育具有重要的调控作用。鉴于miRNAs家族的庞大性以及T细胞发育的复杂性，因此，深入研究新的特定miRNA分子在胸腺细胞特别是CD8+T细胞发育中的调控作用，无疑为后续进一步深入探讨miRNA分子在免疫细胞亚群发育和功能中的生物学作用，以及后续相关临床疾病的免疫生物治疗新策略开发均具有积极意义。3.微小RNA-7及其生物学功能微小RNA-7（microRNA-7，miR-7）是2001年由Loags-Quintana首先发现的miRNA家族成员，其成熟体由23个核苷酸组成[25]。现已发现分别在人和鼠类的9，15，19号染色体上存在的不同DNA序列可以转录加工成为相同的成熟miR-7序列[26]。miR-7高表达于脑、小肠、胸腺、脾脏、肺脏等多种组织器官[27]（图0-3），参与了机体组织器官的发育[28,29]和多种细胞的生物学功能[30,31]。如：Doxakis等研究发现[32]，miR-7在帕金森患者的大脑中表达水平显著增高，且与神经元的发展密切相关；Pollock等研究发现[33]，miR-7可通过调控P53信号途径，进而抑制大脑皮层的发育过程；Oldenburger等研究亦发现[34]，miR-7对气管道平滑肌细胞的生长发育发挥重要的调控作用。现今miR-7的相关研究主要集中在其参与调控肿瘤的发生发展（图0-4）。我们在前期研究中也发现，miR-7在临床肺癌组织中低表达，且miR-7模拟物（mimics）可显著抑制人肺癌细胞的体外生长和侵袭[35-37]；此外，我们利用miR-7过表达载体进行研究发现，
遵义医科大学硕士学位论文胡琳13无论是在体内还是体外，miR-7均可抑制人肺癌细胞的生长和侵袭[38-40]。这些相关研究显示miR-7可能在肺癌发生发展中起重要调控作用，是肺癌基因治疗潜在新靶标[41]。图0-3.不同组织器官中miR-7的表达水平[30]Fig0-3.TheexpressionlevelofmiR-7indifferentorgansandtissues.图0-4.miR-7参与调控不同组织器官的生理和病理过程的概述Fig0-4.AnoverviewofmiR-7involvementinhealthanddiseaseofvariousorgans.(Horshametal.IntJBiochemCellBiol.2015)然而，目前关于miR-7与机体免疫细胞发育和功能的相关研究才刚开展。例如，Stumpfova等[42]研究显示miR-7高表达于活化的DC细胞上，提示miR-7对DC细胞的免疫学功能有重要的调节作用。我们新近研究发现miR-7敲减后可显著改善LPS诱导的ALI模型小鼠的肺损伤[43]；并且，miR-7参与了ConA诱导的小鼠肝脏炎症变
【参考文献】：
期刊论文
[1]转基因小鼠模型的制备与应用[J]. 范艳艳,钟磊发,肖义军. 生物学教学. 2018(04)
[2]微小RNA-7敲减对ConA诱导的小鼠急性肝损伤的影响[J]. 岳东旭,赵娟娟,张忆雄,丁涛,陈慧子,徐林. 中国病理生理杂志. 2017(09)
[3]微小RNA-7慢病毒过表达载体的构建及其作用[J]. 徐华林,赵娟娟,褚风云,郭萌萌,何志旭,陈超,徐林. 遵义医学院学报. 2016(05)
[4]microRNA-7基因敲减对小鼠CD4+SP细胞胸腺发育的影响[J]. 陶弋婧,朱顺飞,陈超,赵娟娟,郭萌萌,张忆雄,秦娜林,徐林. 中国免疫学杂志. 2015(09)
[5]MicroRNA-7基因敲减小鼠模型的鉴定[J]. 朱顺飞,李永菊,陈超,胡燕,赵娟娟,郭萌萌,陶弋婧,秦娜琳,徐林. 遵义医学院学报. 2014(06)
[6]miRNA-126基因敲减小鼠肠系膜淋巴结T淋巴细胞比例的变化[J]. 张忆雄,胡燕,郭萌萌,朱顺飞,陶弋婧,赵娟娟,周涯,郑静,徐林. 中国免疫学杂志. 2014(09)
[7]过表达microRNA-7通过下调CGG结合蛋白1的表达抑制人肺癌细胞生长[J]. 胡燕,廖珍媛,陈超,秦娜琳,郑静,田丹,李永菊,朱顺飞,罗军敏,徐林. 细胞与分子免疫学杂志. 2014(02)
[8]微小RNA-7过表达对人肺癌细胞体内外转移的影响[J]. 朱顺飞,廖珍媛,胡燕,陈超,李永菊,刘思静,罗军敏,熊思东,徐林. 遵义医学院学报. 2013(05)
[9]miRNA-7真核表达载体的构建与鉴定[J]. 宋永祥,李颖,秦安东,廖珍媛,李永菊,罗军敏,任涛,徐林. 西安交通大学学报(医学版). 2013(04)
[10]miRNA-7在小鼠不同组织器官中表达的检测及其意义[J]. 郑静,李颖,秦安东,秦娜琳,罗军敏,徐林. 遵义医学院学报. 2012(02)
本文编号：2899935
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图0-1.胸腺T细胞的发育过程
遵义医科大学硕士学位论文胡琳12图0-2.不同的miRNA分子在CD8+T细胞发育过程中的作用Fig0-2.miRNA-mediatedregulationofCD8+Tcelldevelopment.(YanLiang,etal.JLeukocBiol.2015)总之，这些研究显示胸腺细胞及其亚群中特定miRNAs的表达对于其发育具有重要的调控作用。鉴于miRNAs家族的庞大性以及T细胞发育的复杂性，因此，深入研究新的特定miRNA分子在胸腺细胞特别是CD8+T细胞发育中的调控作用，无疑为后续进一步深入探讨miRNA分子在免疫细胞亚群发育和功能中的生物学作用，以及后续相关临床疾病的免疫生物治疗新策略开发均具有积极意义。3.微小RNA-7及其生物学功能微小RNA-7（microRNA-7，miR-7）是2001年由Loags-Quintana首先发现的miRNA家族成员，其成熟体由23个核苷酸组成[25]。现已发现分别在人和鼠类的9，15，19号染色体上存在的不同DNA序列可以转录加工成为相同的成熟miR-7序列[26]。miR-7高表达于脑、小肠、胸腺、脾脏、肺脏等多种组织器官[27]（图0-3），参与了机体组织器官的发育[28,29]和多种细胞的生物学功能[30,31]。如：Doxakis等研究发现[32]，miR-7在帕金森患者的大脑中表达水平显著增高，且与神经元的发展密切相关；Pollock等研究发现[33]，miR-7可通过调控P53信号途径，进而抑制大脑皮层的发育过程；Oldenburger等研究亦发现[34]，miR-7对气管道平滑肌细胞的生长发育发挥重要的调控作用。现今miR-7的相关研究主要集中在其参与调控肿瘤的发生发展（图0-4）。我们在前期研究中也发现，miR-7在临床肺癌组织中低表达，且miR-7模拟物（mimics）可显著抑制人肺癌细胞的体外生长和侵袭[35-37]；此外，我们利用miR-7过表达载体进行研究发现，
遵义医科大学硕士学位论文胡琳13无论是在体内还是体外，miR-7均可抑制人肺癌细胞的生长和侵袭[38-40]。这些相关研究显示miR-7可能在肺癌发生发展中起重要调控作用，是肺癌基因治疗潜在新靶标[41]。图0-3.不同组织器官中miR-7的表达水平[30]Fig0-3.TheexpressionlevelofmiR-7indifferentorgansandtissues.图0-4.miR-7参与调控不同组织器官的生理和病理过程的概述Fig0-4.AnoverviewofmiR-7involvementinhealthanddiseaseofvariousorgans.(Horshametal.IntJBiochemCellBiol.2015)然而，目前关于miR-7与机体免疫细胞发育和功能的相关研究才刚开展。例如，Stumpfova等[42]研究显示miR-7高表达于活化的DC细胞上，提示miR-7对DC细胞的免疫学功能有重要的调节作用。我们新近研究发现miR-7敲减后可显著改善LPS诱导的ALI模型小鼠的肺损伤[43]；并且，miR-7参与了ConA诱导的小鼠肝脏炎症变
【参考文献】：
期刊论文
[1]转基因小鼠模型的制备与应用[J]. 范艳艳,钟磊发,肖义军. 生物学教学. 2018(04)
[2]微小RNA-7敲减对ConA诱导的小鼠急性肝损伤的影响[J]. 岳东旭,赵娟娟,张忆雄,丁涛,陈慧子,徐林. 中国病理生理杂志. 2017(09)
[3]微小RNA-7慢病毒过表达载体的构建及其作用[J]. 徐华林,赵娟娟,褚风云,郭萌萌,何志旭,陈超,徐林. 遵义医学院学报. 2016(05)
[4]microRNA-7基因敲减对小鼠CD4+SP细胞胸腺发育的影响[J]. 陶弋婧,朱顺飞,陈超,赵娟娟,郭萌萌,张忆雄,秦娜林,徐林. 中国免疫学杂志. 2015(09)
[5]MicroRNA-7基因敲减小鼠模型的鉴定[J]. 朱顺飞,李永菊,陈超,胡燕,赵娟娟,郭萌萌,陶弋婧,秦娜琳,徐林. 遵义医学院学报. 2014(06)
[6]miRNA-126基因敲减小鼠肠系膜淋巴结T淋巴细胞比例的变化[J]. 张忆雄,胡燕,郭萌萌,朱顺飞,陶弋婧,赵娟娟,周涯,郑静,徐林. 中国免疫学杂志. 2014(09)
[7]过表达microRNA-7通过下调CGG结合蛋白1的表达抑制人肺癌细胞生长[J]. 胡燕,廖珍媛,陈超,秦娜琳,郑静,田丹,李永菊,朱顺飞,罗军敏,徐林. 细胞与分子免疫学杂志. 2014(02)
[8]微小RNA-7过表达对人肺癌细胞体内外转移的影响[J]. 朱顺飞,廖珍媛,胡燕,陈超,李永菊,刘思静,罗军敏,熊思东,徐林. 遵义医学院学报. 2013(05)
[9]miRNA-7真核表达载体的构建与鉴定[J]. 宋永祥,李颖,秦安东,廖珍媛,李永菊,罗军敏,任涛,徐林. 西安交通大学学报(医学版). 2013(04)
[10]miRNA-7在小鼠不同组织器官中表达的检测及其意义[J]. 郑静,李颖,秦安东,秦娜琳,罗军敏,徐林. 遵义医学院学报. 2012(02)
本文编号：2899935
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