CD9在生物电场介导的表皮细胞迁移中的作用及机制研究

发布时间：2020-12-06 00:25

　　背景:创面愈合是一复杂且有序的生理学过程,包含多种类型细胞的迁移和增殖,其中表皮细胞迁移是关系到创面是否能够完全愈合的关键。创面生物电场在创面形成即刻产生,创缘为正极,创面中心为负极,其强度缓慢升高后逐渐降低,一直持续到再上皮化完成后消失。电场对创面的愈合起着关键的作用,体内研究表明电场能够促进表皮细胞方向性迁移,但其机制尚不明确。CD9是一种膜蛋白,与其他跨膜分子或蛋白结合后影响细胞的移行、分化、信号转导等。我们的前期研究发现CD9在正常皮肤高表达,在创面愈合早、中期表达显著降低促进表皮细胞迁移,创面愈合后期恢复至正常水平。结合创面生物电场与CD9在创面愈合中的强弱对应关系,我们猜测电场可能是通过调节表皮细胞内CD9的表达来调控细胞迁移。AMPK是一种AMP依赖性蛋白激酶,是调节生物能量代谢的关键分子,也与细胞迁移密切相关。有研究发现抑制AMPK的活性可以提高表皮细胞的运动能力,并且AMPK是四跨膜蛋白家族的上游信号分子。我们猜想AMPK可能参与了电场对CD9的调控。本研究提出生物电场通过AMPK调节CD9表达促进表皮细胞迁移这一科学假设,通过外源性电场模拟创面电场,检测电场条件下C... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

U型管Figure1-1U-tubesize.

重庆医科大学硕士研究生学位论文15以保证一组实验的实验环境一致。玻璃板使用504胶固定粘贴，注意粘贴过程胶水用量不宜过多，否则易堵住小室使小爬片无法顺利进入缝隙。粘贴后尽量倒置，待胶水风干后测试其密封性。此模型可反复使用，使用前用75%酒精浸泡并与紫外灯下照射30min。图1-2电场小室改造Figure1-2electricfieldchamber1.1.4.9.大玻璃片（大爬片）将24mm×50mm的盖玻片严格泡酸处理，按1.1.4.7中的方法处理爬片后在鼓风干燥箱子存放。1.1.4.10.电场室（适用于大爬片）用玻璃刀将1mm厚的玻璃板裁成20.6cm×14.9cm的长方形，同1.1.4.8中制作的电场小室一样，横向分为四行，纵向分为五行。图纸如下图1-3所示。完成后可形成四个大小一致、左右对称的电场室，可以保证一组实验的实验环境一致。玻璃板使用504胶固定粘贴，注意粘贴过程胶水用量不宜过多，否则易堵住小室使小爬片无法顺利进入缝隙。粘贴后尽量倒置，待胶水风干后测试其密封性。此模型可反复使用，使用前用75%酒精浸泡并与紫外灯下照射30min。

重庆医科大学硕士研究生学位论文16图1-3电场室Figure1-3Electricdeviceforbigslide1.1.4.11.银丝电极将银丝剪断后用镊子将其弯曲，使之能很好地固定在电线及装置上。1.2实验方法及操作步骤1.2.1HaCaT细胞培养（1）从-80℃液氮罐中取出一支冻存的HaCaT细胞，迅速置于37℃温水中，并快速搅拌使其尽快融化。（2）待其彻底融化后，在超净台下用玻璃滴管吸净冻存管中的细胞悬液至无菌培养皿中，再往其中加入含有10%FBS、1%双抗的1640培养液，充分混匀后，置于37℃培养箱中培养。（3）次日，在超净台下倒出培养皿中的培养液，用复温后的无菌PBS冲洗培养皿2-3次，加入复温好的含有10%FBS的1640培养液，置于37℃培养箱中继续培养。（4）细胞融合至80%-90%后，在超净台下倒尽培养皿中的液体，加入0.25%胰酶2mL，放入培养箱中消化4min。（5）拿出后用力拍打培养皿，显微镜下观察到细胞变圆漂浮后，加入2mL


本文编号：2900362