循环肿瘤细胞预测局部晚期直肠癌新辅助放化疗疗效及转移的临床研究
发布时间：2020-12-06 04:40
目的:新辅助放化疗后的疗效判断对于局部晚期直肠癌的综合治疗策略非常有意义。新辅助放化疗后达到临床完全缓解（cCR）的患者可采用“观察等待”策略,避免手术保留直肠器官。当前挑战在于如何评价cCR的时机和标准,以及缺乏更精确的判断和预测cCR的方法。目前的影像学等常规方法无法准确识别cCR。循环肿瘤细胞（CTCs）是肿瘤生物标志物的实时来源。CTCs的分离和分型将有助于识别cCR患者,CTCs动态观察可监测直肠癌新辅助放化疗治疗的疗效。方法:本研究采集了 2017-01至2019-11在安徽省立医院诊断为直肠癌的48例患者外周血样本,进行本项目研究。第一次血样采样在患者新辅助放化疗前,第二次血液采样在手术前。所有血液样本均在采集后4 h内处理。为避免产生偏见,收集样本,收集和/或分析数据或评估CTCs亚型的医师和患者均不知临床分期。本研究使用CanPatrol CTCs富集技术,外周血标本中CTCs计数>3个CTCs/7.5 ml则被认为阳性结果。采用磁共振进行临床分期和疗效判断。分析临床病理参数与不同EMT表型的CTCs在局部晚期直肠癌患者中的临床意义。结果:本研究纳入了 48例符...
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１：循环肿瘤细胞形成远处转移不意图（Ｍａｓｓａｇｕ６，Ｊ，Ｎａｔｕｒｅ，２０１６）??ＣＴＣｓ是液体活检重要的组成部分［２］
?山东大学硕士学位论文???糸籲參?ｃ＿？ｒ？＾一?＿?？??？?Ｗ〇〇４?＜？？？?ＭＩＭ?Ｐ＊ｒｖ？ｃｎ？?Ｃ??—二一??：??（ｄ，??图２：膜孔大小及过滤装置示意图（Ｙｏｏｎ?Ｙ，?Ｓｃｉ?Ｒ印，２０１６）??该装置设计了包括１２个直径为８ｐｍ圆柱形的孔，可直接过滤１０?ｍｌ?１：１０稀释的??样品。可以在不破坏肿瘤细胞的情况下富集到肿瘤细胞，但其特异性低阻碍了其??实用性。与ＩＳＥＴ？相似，ＳｃｒｅｅｎＣｅｌｌ？过滤装置使用圆形的过滤膜，具有６．５ｐｍ和??７．５?ｐｍ的滤孔，分别用于分离流动细胞和吸附固定细胞。该设备包括三种不同的??类型：ＳｃｒｅｅｎＣｅｌｌ１＊?ｃｅｌｌ分离固定相细胞用于细胞学研宄；ＳｃｒｅｅｎＣｅｌ广ＣＣ和??ＳｃｒｅｅｎＣｅｌｌ？ＭＢ分离流动相细胞，用于细胞分子生物学。与ＩＳＥＴ？相比，??ＳｃｒｅｅｎＣｅｌｌ？具有可富集不固定活动细胞的优势。然而，由于白细胞的污染，特异??性仍有待提高。此外，ＣｅｌｌＳｉｅｖｅ？（Ｃｒｅａｔｖ?ＭｉｃｒｏＴｅｃｈ）包含１６０，０００个直径为７?ｆｘｍ??滤孔，均匀分布在直径９ｍｍ的过滤区域。该设计分别将液相和固相的捕获效率??分别提高了?２５％和３５％。此外，过滤器污染从４７８４０个减少到３９２０个白细胞，??减少了十倍以上。如何进一步优化过滤装置是微孔过滤分离富集ＣＴＣｓ的核心。??采用ＲＩＥ技术来刻蚀聚对二甲苯膜，可以精确控制过滤器中膜孔大小，几何形??状和密度。可以在ｌｃｍ２的聚对二甲苯膜上刻出ｌＯｐｎ直径的圆形膜孔。使ＣＴＣｓ??的回收率＞９０％。然而，由于ＣＴＣｓ和白细胞之间的大小重叠，基于过滤器的分??离富集ＣＴ
?山东大学硕士学位论文???（ａ）?７ｂ）＂＂??ＢＴＩｆｌｆ漏＝纖二纖??ｒＺｇ＾Ｂｇ??ｐｉ邊＿??，分？－〇「］?Ｍ?＊?—？…一??７－＾ｌｉｍｍ?Ｓ？：：：：Ｓ??Ｖｅｌｏｃｉｔｙ?Ｖａｌｌｅｙ?Ｍａｇｎｅｔｉｃ?Ｒａｎｋｉｎｇ??图３：基于抗体的代表性ＣＴＣ富集技术原理ａ?：?ＣＴＣ芯片。ｂ：?３ＤＰＤＭＳ??支架芯片。Ｃ：微流体分型技术（ＰｏｕｄｉｎｅｈＭ，?ＮａｔＮａｎｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１７）??人字形（ＨＢ）芯片的工作原理与ＣＴＣ芯片相同，只不过它是由ＰＤＭＳ制成。??ＨＢ芯片的设计旨在通过人字形增强ＣＴＣ捕获效率，该人字形通过诱导微涡旋破??坏层流，从而增加了?ＣＴＣ与设备中功能化表面的相互作用。ＨＢ芯片在相同流速??下提高了?ＣＴＣｓ的捕获效率。ＮａｎｏＶｅｌｃｒｏ?ＣＴＣ芯片采用纳米柱涂层，可最大程??度地提高ＣＴＣｓ和抗ＥｐＣＡＭ抗体之间的接触频率，从而提高ＣＴＣ的捕获率。??２．?１．３第三类：杂交分离富集技术??第一类和第二类技术都有其优势和局限性，因此将它们组合在同一设备中可??以减少每种技术各自面临的弊端，并为ＣＴＣｓ富集提供更高的灵敏度和特异性??［２４］。在ＣＴＣ－ｉＣｈｉｐ分离富集系统中。将基于细胞大小过滤，磁珠抗体分选组合??在一个设备中［２５］。在阴性选择模式下，将全血样品与ＣＤ１５和ＣＤ４５免疫磁珠预??混合用以标记白细胞。然后在预先标记有抗ＥｐＣＡＭ偶联的免疫磁珠进行阳性选??择。在分离富集时体积较小的红细胞和血小板在过滤阶段首先被清除，而有核细??胞（白细胞和ＣＴＣｓ）则进入下一阶段。白细胞和ＣＴＣｓ通过蛇形通道时，聚焦??为单细胞排列。最后，
本文编号：2900741
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１：循环肿瘤细胞形成远处转移不意图（Ｍａｓｓａｇｕ６，Ｊ，Ｎａｔｕｒｅ，２０１６）??ＣＴＣｓ是液体活检重要的组成部分［２］
?山东大学硕士学位论文???糸籲參?ｃ＿？ｒ？＾一?＿?？??？?Ｗ〇〇４?＜？？？?ＭＩＭ?Ｐ＊ｒｖ？ｃｎ？?Ｃ??—二一??：??（ｄ，??图２：膜孔大小及过滤装置示意图（Ｙｏｏｎ?Ｙ，?Ｓｃｉ?Ｒ印，２０１６）??该装置设计了包括１２个直径为８ｐｍ圆柱形的孔，可直接过滤１０?ｍｌ?１：１０稀释的??样品。可以在不破坏肿瘤细胞的情况下富集到肿瘤细胞，但其特异性低阻碍了其??实用性。与ＩＳＥＴ？相似，ＳｃｒｅｅｎＣｅｌｌ？过滤装置使用圆形的过滤膜，具有６．５ｐｍ和??７．５?ｐｍ的滤孔，分别用于分离流动细胞和吸附固定细胞。该设备包括三种不同的??类型：ＳｃｒｅｅｎＣｅｌｌ１＊?ｃｅｌｌ分离固定相细胞用于细胞学研宄；ＳｃｒｅｅｎＣｅｌ广ＣＣ和??ＳｃｒｅｅｎＣｅｌｌ？ＭＢ分离流动相细胞，用于细胞分子生物学。与ＩＳＥＴ？相比，??ＳｃｒｅｅｎＣｅｌｌ？具有可富集不固定活动细胞的优势。然而，由于白细胞的污染，特异??性仍有待提高。此外，ＣｅｌｌＳｉｅｖｅ？（Ｃｒｅａｔｖ?ＭｉｃｒｏＴｅｃｈ）包含１６０，０００个直径为７?ｆｘｍ??滤孔，均匀分布在直径９ｍｍ的过滤区域。该设计分别将液相和固相的捕获效率??分别提高了?２５％和３５％。此外，过滤器污染从４７８４０个减少到３９２０个白细胞，??减少了十倍以上。如何进一步优化过滤装置是微孔过滤分离富集ＣＴＣｓ的核心。??采用ＲＩＥ技术来刻蚀聚对二甲苯膜，可以精确控制过滤器中膜孔大小，几何形??状和密度。可以在ｌｃｍ２的聚对二甲苯膜上刻出ｌＯｐｎ直径的圆形膜孔。使ＣＴＣｓ??的回收率＞９０％。然而，由于ＣＴＣｓ和白细胞之间的大小重叠，基于过滤器的分??离富集ＣＴ
?山东大学硕士学位论文???（ａ）?７ｂ）＂＂??ＢＴＩｆｌｆ漏＝纖二纖??ｒＺｇ＾Ｂｇ??ｐｉ邊＿??，分？－〇「］?Ｍ?＊?—？…一??７－＾ｌｉｍｍ?Ｓ？：：：：Ｓ??Ｖｅｌｏｃｉｔｙ?Ｖａｌｌｅｙ?Ｍａｇｎｅｔｉｃ?Ｒａｎｋｉｎｇ??图３：基于抗体的代表性ＣＴＣ富集技术原理ａ?：?ＣＴＣ芯片。ｂ：?３ＤＰＤＭＳ??支架芯片。Ｃ：微流体分型技术（ＰｏｕｄｉｎｅｈＭ，?ＮａｔＮａｎｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１７）??人字形（ＨＢ）芯片的工作原理与ＣＴＣ芯片相同，只不过它是由ＰＤＭＳ制成。??ＨＢ芯片的设计旨在通过人字形增强ＣＴＣ捕获效率，该人字形通过诱导微涡旋破??坏层流，从而增加了?ＣＴＣ与设备中功能化表面的相互作用。ＨＢ芯片在相同流速??下提高了?ＣＴＣｓ的捕获效率。ＮａｎｏＶｅｌｃｒｏ?ＣＴＣ芯片采用纳米柱涂层，可最大程??度地提高ＣＴＣｓ和抗ＥｐＣＡＭ抗体之间的接触频率，从而提高ＣＴＣ的捕获率。??２．?１．３第三类：杂交分离富集技术??第一类和第二类技术都有其优势和局限性，因此将它们组合在同一设备中可??以减少每种技术各自面临的弊端，并为ＣＴＣｓ富集提供更高的灵敏度和特异性??［２４］。在ＣＴＣ－ｉＣｈｉｐ分离富集系统中。将基于细胞大小过滤，磁珠抗体分选组合??在一个设备中［２５］。在阴性选择模式下，将全血样品与ＣＤ１５和ＣＤ４５免疫磁珠预??混合用以标记白细胞。然后在预先标记有抗ＥｐＣＡＭ偶联的免疫磁珠进行阳性选??择。在分离富集时体积较小的红细胞和血小板在过滤阶段首先被清除，而有核细??胞（白细胞和ＣＴＣｓ）则进入下一阶段。白细胞和ＣＴＣｓ通过蛇形通道时，聚焦??为单细胞排列。最后，
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