小鼠睾丸、附睾和前列腺组织细胞外囊泡蛋白质组分的鉴定

发布时间：2020-12-10 22:37

　　目的:通过鉴定小鼠睾丸、附睾和前列腺组织细胞外囊泡（extracellular vesicles,EVs）的蛋白,明确睾丸、附睾和前列腺来源的细胞外囊泡的蛋白组分在精子发育成熟及功能维持方面所发挥的不同作用。方法:使用TEI（Total Exosome Isolation）方法分别富集小鼠睾丸、附睾和前列腺组织的EVs,用免疫印迹分析EVs标记蛋白的表达,在透射电镜下观察EVs形态,用动态光散射粒径分析仪（dynamic light scattering,DLS）分析颗粒大小分布。通过液相色谱串联质谱法（LC MS/MS）分析三种EVs的蛋白组分。运用DAVID 6.8在线分析工具从细胞组分、分子功能和生物学过程三方面对小鼠睾丸、附睾和前列腺组织的EVs蛋白进行GO（gene ontology）富集分析。结果:1.免疫印迹分析富集到的EVs表达CD63、TSG101等细胞外囊泡标记物。在透射电镜下观察EVs多呈圆形杯状,用动态光散射粒径分析仪（dynamic light scattering,DLS）分析颗粒大小分布,发现睾丸组织来源的EVs分布范围较大（13-450nm）,以30-1... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：93 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

免疫印迹分析睾丸、附睾和前列腺组织EVs的标记蛋白提取小鼠睾丸、附睾和前列腺组织和EVs蛋白，12%的SDS-PAGE凝胶，组织上样量10μg，EVs上样量30μg

山西医科大学硕士学位论文92.2睾丸、附睾和前列腺组织EVs的电镜观察与DLS粒径测量透射电镜观察小鼠睾丸，附睾和前列腺组织的EVs，多呈圆形杯状，睾丸和附睾标本中大小囊泡均可见到，前列腺标本中以小囊泡多见（见图1-2）。为了进一步明确睾丸、附睾和前列腺组织的EVs大小分布，我们用DLS对睾丸、附睾和前列腺组织EVs的样品进行测量。结果显示睾丸组织EVs在13-450nm之间广泛分布，直径为30-140nm的囊泡数量最多；附睾组织EVs直径大小分布在13-24nm、24-50nm、50-250nm三个区段，直径在105nm左右的囊泡数量最多；前列腺组织EVs中30-220nm的囊泡数量是最多的，其中在50nm和90nm左右有两个峰值，另外在7-28nm处还有集中的一群小囊泡（见图1-3）。DLS结果与电镜下观察到的结果相一致，表明睾丸、附睾和前列腺组织EVs的大小分布确实有一定的差异。图1-2电镜观察睾丸、附睾和前列腺组织EVs的形态电镜下，通过负染显示EVs呈“杯状”。(A)睾丸组织EVs；(B)附睾组织EVs；(C)前列腺组织EVs。箭头指示EVs，标尺为100nm。图1-3DLS分析睾丸、附睾和前列腺组织EVs的粒径分布范围

山西医科大学硕士学位论文92.2睾丸、附睾和前列腺组织EVs的电镜观察与DLS粒径测量透射电镜观察小鼠睾丸，附睾和前列腺组织的EVs，多呈圆形杯状，睾丸和附睾标本中大小囊泡均可见到，前列腺标本中以小囊泡多见（见图1-2）。为了进一步明确睾丸、附睾和前列腺组织的EVs大小分布，我们用DLS对睾丸、附睾和前列腺组织EVs的样品进行测量。结果显示睾丸组织EVs在13-450nm之间广泛分布，直径为30-140nm的囊泡数量最多；附睾组织EVs直径大小分布在13-24nm、24-50nm、50-250nm三个区段，直径在105nm左右的囊泡数量最多；前列腺组织EVs中30-220nm的囊泡数量是最多的，其中在50nm和90nm左右有两个峰值，另外在7-28nm处还有集中的一群小囊泡（见图1-3）。DLS结果与电镜下观察到的结果相一致，表明睾丸、附睾和前列腺组织EVs的大小分布确实有一定的差异。图1-2电镜观察睾丸、附睾和前列腺组织EVs的形态电镜下，通过负染显示EVs呈“杯状”。(A)睾丸组织EVs；(B)附睾组织EVs；(C)前列腺组织EVs。箭头指示EVs，标尺为100nm。图1-3DLS分析睾丸、附睾和前列腺组织EVs的粒径分布范围

【参考文献】：
期刊论文
[1]附睾小体功能蛋白及sRNA研究进展[J]. 肖娟,王讯,罗毅,李晓开,李学伟.  遗传. 2018(03)
[2]调控精子成熟和功能的生殖道胞外囊泡研究进展[J]. 李坤,倪崖.  生命科学. 2017(06)
[3]细胞外囊泡研究新进展[J]. 王琎,陈建英.  中国组织工程研究. 2017(04)
[4]外泌体与生殖细胞生长发育的研究进展[J]. 胡頲,胡蓉.  国际生殖健康/计划生育杂志. 2017(01)



本文编号：2909395