肺炎克雷伯菌耐药性分析与碳青霉烯类耐药基因研究
发布时间：2020-12-24 17:49
目的:收集重庆医科大学附属大学城医院2013-2018年间从临床标本分离所得的肺炎克雷伯菌,筛选出对碳青霉烯类抗菌药物不敏感的菌株（CRKP）,对其耐药机制及耐药基因进行研究和检测,为临床合理用药提供依据,为监测CRKP的耐药性变化提供数据支持。方法:收集重庆医科大学附属大学城医院2013-2018年间临床分离所得381株肺炎克雷伯菌,使用全自动微生物分析仪及药敏纸片扩散法筛选出CRKP。使用改良Carba NP试验从CRKP中筛选出能够产碳青霉烯酶的菌株。对耐药菌株进行受体菌质粒接合试验,研究耐药基因的水平传播性。最后利用PCR法扩增相应耐药基因,对PCR产物进行测序及比对分析。结果:从临床标本中共收集筛选出11株CRKP,其中大部分菌株对美罗培南、亚胺培南、厄他培南均耐药。改良Carba NP试验显示有6株菌株产酶表型为阳性,分别为A类、B类酶。受体菌质粒接合试验显示耐药基因可从供体菌转移至受体菌,具有水平传播性。PCR法对耐药基因进行扩增,测序结果与基因库比对后结果显示,其中4株菌株携带KPC基因,1株携带NDM基因,1株携带VIM基因。结论:致病菌产生碳青霉烯酶是造成耐药菌出现...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：32 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
1PCR鉴定肺炎克雷伯菌KPC基因电泳图
重庆医科大学博士研究生学位论文14和B类酶。2.2质粒接合试验结果在含有利福平及氨苄西林的平板上，均长出了菌落。结果显示6株菌株耐药基因质粒接合试验均成功，提示耐药基因均可通过质粒从供体菌水平转移至受体菌，存在传播性。2.3PCR法扩增耐药基因及琼脂糖凝胶电泳结果6株菌株中有4株检测出KPC基因，1株检测出NDM基因，1株检测出VIM基因。123456789101112图2.3.1PCR鉴定肺炎克雷伯菌KPC基因电泳图Fig2.3.1ThegelelectrophoreticofidentificationofKlebsiellapneumoniaebyPCR注：2、7、9、11为样品，12为阴性对照，1为2000bpmarker123456789101112图2.3.1PCR鉴定肺炎克雷伯菌NDM基因电泳图Fig2.3.1ThegelelectrophoreticofidentificationofKlebsiellapneumoniaebyPCR注：8为样品，2为阴性对照，1为2000bpmarker2000bp1000bp750bp500bp250bp100bp2000bp1000bp750bp500bp250bp100bp
重庆医科大学博士研究生学位论文15123图2.3.1PCR鉴定肺炎克雷伯菌VIM基因电泳图Fig2.3.1ThegelelectrophoreticofidentificationofKlebsiellapneumoniaebyPCR注：3为样品，2为阴性对照，1为2000bpmarker3讨论随着临床抗生素越来越广泛的使用，耐药菌的出现也未曾停止，并呈现出逐年上升的趋势。肺炎克雷伯菌属肠杆菌科，是一种条件致病菌，占院内感染致病菌的第三位。医院的患者相比正常人免疫力下降，作为易感人群，很容易感染肺炎克雷伯菌。且医院环境相对封闭，给细菌滋生提供了条件，一旦疏忽，极易造成医院感染大爆发。在CRKP中有一类携带了NDM基因的菌株被认为是“超级细菌”，近年来也越来越频繁地出现在各研究人员的视野中[18]。该类细菌耐药性强，致病性也不弱，成为临床用药中极为棘手的问题。CRKP的主要耐药机制为耐药菌产生能够水解β-内酰胺酶的碳青霉烯酶，从而对抗生素耐药。本次研究也是对收集得到的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的产酶机制进行了探索。采用了改良CarbaNP试验研究细菌的产酶机制。该方法敏感性及特异性较高，但在操作过程中较容易出现问题，温度过高会使酶失去活性，影响实验结果。本次实验中改良CarbaNP试验结果显示6株菌株均产B类酶。进一步采用PCR法扩增耐药基因得到4株KPC型，1株VIM型，1株NDM型。可见本院较为流行的是KPC型碳青霉烯酶，与全国流行趋势较为一致[19]。本次研究中仍有5株菌株未检测出其具体耐药机制，可通过进一步研究明确结果。质粒接合转移试验结果显示，6株耐药菌均能将自身携带的耐药基因转移至受体菌。此结果提示耐药基因可通过质粒从耐药菌水平转移至敏感菌，为医院感染的防控带来了巨大挑战。因此，在日常工作中，医务人员应树立较强的院内感染控制意识，加强无菌观念，严格遵守无
【参考文献】：
期刊论文
[1]2019年CHINET三级医院细菌耐药监测[J]. 胡付品,郭燕,朱德妹,汪复,蒋晓飞,徐英春,张小江,张朝霞,季萍,谢轶,康梅,王传清,王爱敏,徐元宏,黄颖,孙自镛,陈中举,倪语星,孙景勇,褚云卓,田素飞,胡志东,李金,俞云松,林洁,单斌,杜艳,郭素芳,魏莲花,邹凤梅,张泓,王春,胡云建,艾效曼,卓超,苏丹虹,郭大文,赵金英,喻华,黄湘宁,刘文恩,李艳明,金炎,邵春红,徐雪松,鄢超,王山梅,楚亚菲,张利侠,马娟,周树平,周艳,朱镭,孟晋华,董芳,郑红艳,胡芳芳,沈瀚,周万青,贾伟,李刚,吴劲松,卢月梅,李继红,段金菊,康建邦,马晓波,郑燕萍,郭如意,朱焱,陈运生,孟青. 中国感染与化疗杂志. 2020(03)
[2]肺炎克雷伯菌的分布及耐药性分析[J]. 殷红莲,汤国宁,郭丽红. 当代医学. 2020(14)
[3]高毒力肺炎克雷伯菌分子致病机制研究进展[J]. 张颖,李轶,郭思. 检验医学与临床. 2020(09)
[4]黄连素对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药性的体外逆转作用[J]. 李永伟,许晓娜,刘心伟,张小倩,王志盛,赵芝静,王春霞. 中国现代医药杂志. 2020(04)
[5]产KPC型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的检测及耐药状况研究[J]. 张维杰,汪杨,王国强,金春杰. 中国医药指南. 2020(10)
[6]2018年CHINET中国细菌耐药性监测[J]. 胡付品,郭燕,朱德妹,汪复,蒋晓飞,徐英春,张小江,张朝霞,季萍,谢轶,康梅,王传清,王爱敏,徐元宏,沈继录,孙自镛,陈中举,倪语星,孙景勇,褚云卓,田素飞,胡志东,李金,俞云松,林洁,单斌,杜艳,郭素芳,魏莲花,邹凤梅,张泓,王春,胡云建,艾效曼,卓超,苏丹虹,汪瑞忠,房华,俞碧霞,赵勇,龚萍,郭大文,赵金英,刘文恩,李艳明,金炎,邵春红,温开镇,张贻荣,徐雪松,鄢超,喻华,黄湘宁,王山梅,楚亚菲,张利侠,马娟,周树平,周艳,朱镭,孟晋华,董芳,郑红艳,沈瀚,周万青,贾伟,李刚,吴劲松,卢月梅,李继红,刘江山,廖龙凤,顾洪芹,姜琳,贺雯,薛顺虹,冯佼,窦睿,岳春雷. 中国感染与化疗杂志. 2020(01)
[7]2014-2017年某院肺炎克雷伯菌分布及耐药性分析[J]. 周馨,马筱玲,戴媛媛,黄家祥,王影. 中华医院感染学杂志. 2019(21)
[8]2005—2017年中国CHINET常见革兰阴性菌对碳青霉烯类抗生素耐药的监测结果[J]. 郑少微,李萍,张正良,裴红红. 临床急诊杂志. 2019(01)
[9]2017年CHINET中国细菌耐药性监测[J]. 胡付品,郭燕,朱德妹,汪复,蒋晓飞,徐英春,张小江,张朝霞,季萍,谢轶,康梅,王传清,王爱敏,徐元宏,沈继录,孙自镛,陈中举,倪语星,孙景勇,褚云卓,田素飞,胡志东,李金,俞云松,林洁,单斌,杜艳,郭素芳,魏莲花,邹凤梅,张泓,王春,胡云建,艾效曼,卓超,苏丹虹,汪瑞忠,房华,俞碧霞,赵勇,龚萍,郭大文,赵金英,刘文恩,李艳明,金炎,邵春红,温开镇,张贻荣,徐雪松,鄢超,喻华,黄湘宁,王山梅,楚亚菲,张利侠,马娟,周树平,周艳,朱镭,孟晋华,董芳,郑红艳,沈瀚,周万青,贾伟,李刚,吴劲松,卢月梅. 中国感染与化疗杂志. 2018(03)
[10]2010-2014年耐碳青霉烯类肠杆菌的耐药性分析[J]. 施倩妮,王喆,黄磊,徐国兵,孙立颖. 中华医院感染学杂志. 2016(12)
本文编号：2936065
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：32 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
1PCR鉴定肺炎克雷伯菌KPC基因电泳图
重庆医科大学博士研究生学位论文14和B类酶。2.2质粒接合试验结果在含有利福平及氨苄西林的平板上，均长出了菌落。结果显示6株菌株耐药基因质粒接合试验均成功，提示耐药基因均可通过质粒从供体菌水平转移至受体菌，存在传播性。2.3PCR法扩增耐药基因及琼脂糖凝胶电泳结果6株菌株中有4株检测出KPC基因，1株检测出NDM基因，1株检测出VIM基因。123456789101112图2.3.1PCR鉴定肺炎克雷伯菌KPC基因电泳图Fig2.3.1ThegelelectrophoreticofidentificationofKlebsiellapneumoniaebyPCR注：2、7、9、11为样品，12为阴性对照，1为2000bpmarker123456789101112图2.3.1PCR鉴定肺炎克雷伯菌NDM基因电泳图Fig2.3.1ThegelelectrophoreticofidentificationofKlebsiellapneumoniaebyPCR注：8为样品，2为阴性对照，1为2000bpmarker2000bp1000bp750bp500bp250bp100bp2000bp1000bp750bp500bp250bp100bp
重庆医科大学博士研究生学位论文15123图2.3.1PCR鉴定肺炎克雷伯菌VIM基因电泳图Fig2.3.1ThegelelectrophoreticofidentificationofKlebsiellapneumoniaebyPCR注：3为样品，2为阴性对照，1为2000bpmarker3讨论随着临床抗生素越来越广泛的使用，耐药菌的出现也未曾停止，并呈现出逐年上升的趋势。肺炎克雷伯菌属肠杆菌科，是一种条件致病菌，占院内感染致病菌的第三位。医院的患者相比正常人免疫力下降，作为易感人群，很容易感染肺炎克雷伯菌。且医院环境相对封闭，给细菌滋生提供了条件，一旦疏忽，极易造成医院感染大爆发。在CRKP中有一类携带了NDM基因的菌株被认为是“超级细菌”，近年来也越来越频繁地出现在各研究人员的视野中[18]。该类细菌耐药性强，致病性也不弱，成为临床用药中极为棘手的问题。CRKP的主要耐药机制为耐药菌产生能够水解β-内酰胺酶的碳青霉烯酶，从而对抗生素耐药。本次研究也是对收集得到的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的产酶机制进行了探索。采用了改良CarbaNP试验研究细菌的产酶机制。该方法敏感性及特异性较高，但在操作过程中较容易出现问题，温度过高会使酶失去活性，影响实验结果。本次实验中改良CarbaNP试验结果显示6株菌株均产B类酶。进一步采用PCR法扩增耐药基因得到4株KPC型，1株VIM型，1株NDM型。可见本院较为流行的是KPC型碳青霉烯酶，与全国流行趋势较为一致[19]。本次研究中仍有5株菌株未检测出其具体耐药机制，可通过进一步研究明确结果。质粒接合转移试验结果显示，6株耐药菌均能将自身携带的耐药基因转移至受体菌。此结果提示耐药基因可通过质粒从耐药菌水平转移至敏感菌，为医院感染的防控带来了巨大挑战。因此，在日常工作中，医务人员应树立较强的院内感染控制意识，加强无菌观念，严格遵守无
【参考文献】：
期刊论文
[1]2019年CHINET三级医院细菌耐药监测[J]. 胡付品,郭燕,朱德妹,汪复,蒋晓飞,徐英春,张小江,张朝霞,季萍,谢轶,康梅,王传清,王爱敏,徐元宏,黄颖,孙自镛,陈中举,倪语星,孙景勇,褚云卓,田素飞,胡志东,李金,俞云松,林洁,单斌,杜艳,郭素芳,魏莲花,邹凤梅,张泓,王春,胡云建,艾效曼,卓超,苏丹虹,郭大文,赵金英,喻华,黄湘宁,刘文恩,李艳明,金炎,邵春红,徐雪松,鄢超,王山梅,楚亚菲,张利侠,马娟,周树平,周艳,朱镭,孟晋华,董芳,郑红艳,胡芳芳,沈瀚,周万青,贾伟,李刚,吴劲松,卢月梅,李继红,段金菊,康建邦,马晓波,郑燕萍,郭如意,朱焱,陈运生,孟青. 中国感染与化疗杂志. 2020(03)
[2]肺炎克雷伯菌的分布及耐药性分析[J]. 殷红莲,汤国宁,郭丽红. 当代医学. 2020(14)
[3]高毒力肺炎克雷伯菌分子致病机制研究进展[J]. 张颖,李轶,郭思. 检验医学与临床. 2020(09)
[4]黄连素对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药性的体外逆转作用[J]. 李永伟,许晓娜,刘心伟,张小倩,王志盛,赵芝静,王春霞. 中国现代医药杂志. 2020(04)
[5]产KPC型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的检测及耐药状况研究[J]. 张维杰,汪杨,王国强,金春杰. 中国医药指南. 2020(10)
[6]2018年CHINET中国细菌耐药性监测[J]. 胡付品,郭燕,朱德妹,汪复,蒋晓飞,徐英春,张小江,张朝霞,季萍,谢轶,康梅,王传清,王爱敏,徐元宏,沈继录,孙自镛,陈中举,倪语星,孙景勇,褚云卓,田素飞,胡志东,李金,俞云松,林洁,单斌,杜艳,郭素芳,魏莲花,邹凤梅,张泓,王春,胡云建,艾效曼,卓超,苏丹虹,汪瑞忠,房华,俞碧霞,赵勇,龚萍,郭大文,赵金英,刘文恩,李艳明,金炎,邵春红,温开镇,张贻荣,徐雪松,鄢超,喻华,黄湘宁,王山梅,楚亚菲,张利侠,马娟,周树平,周艳,朱镭,孟晋华,董芳,郑红艳,沈瀚,周万青,贾伟,李刚,吴劲松,卢月梅,李继红,刘江山,廖龙凤,顾洪芹,姜琳,贺雯,薛顺虹,冯佼,窦睿,岳春雷. 中国感染与化疗杂志. 2020(01)
[7]2014-2017年某院肺炎克雷伯菌分布及耐药性分析[J]. 周馨,马筱玲,戴媛媛,黄家祥,王影. 中华医院感染学杂志. 2019(21)
[8]2005—2017年中国CHINET常见革兰阴性菌对碳青霉烯类抗生素耐药的监测结果[J]. 郑少微,李萍,张正良,裴红红. 临床急诊杂志. 2019(01)
[9]2017年CHINET中国细菌耐药性监测[J]. 胡付品,郭燕,朱德妹,汪复,蒋晓飞,徐英春,张小江,张朝霞,季萍,谢轶,康梅,王传清,王爱敏,徐元宏,沈继录,孙自镛,陈中举,倪语星,孙景勇,褚云卓,田素飞,胡志东,李金,俞云松,林洁,单斌,杜艳,郭素芳,魏莲花,邹凤梅,张泓,王春,胡云建,艾效曼,卓超,苏丹虹,汪瑞忠,房华,俞碧霞,赵勇,龚萍,郭大文,赵金英,刘文恩,李艳明,金炎,邵春红,温开镇,张贻荣,徐雪松,鄢超,喻华,黄湘宁,王山梅,楚亚菲,张利侠,马娟,周树平,周艳,朱镭,孟晋华,董芳,郑红艳,沈瀚,周万青,贾伟,李刚,吴劲松,卢月梅. 中国感染与化疗杂志. 2018(03)
[10]2010-2014年耐碳青霉烯类肠杆菌的耐药性分析[J]. 施倩妮,王喆,黄磊,徐国兵,孙立颖. 中华医院感染学杂志. 2016(12)
本文编号：2936065
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