MT1过表达通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路影响SKOV3细胞增殖与凋亡

发布时间：2020-12-31 13:14

　　目的卵巢癌是一种常见的威胁女性健康的恶性肿瘤。然而卵巢癌的发生机制尚不清楚。本研究旨在探讨褪黑激素受体MT1（Melatonin receptor 1A）在人卵巢癌SKOV3细胞中的作用及其主要机制。方法卵巢癌是一种常见的威胁女性健康的恶性肿瘤。MT1-pcDNA3.1质粒（MT1组）与空载体pcDNA3.1（对照组）转染SKOV3细胞,未转染SKOV3细胞作为阴性对照组。转染48小时后,新鲜培养基培养24小时或48小时,观察细胞周期、增殖、凋亡情况,上清液检测褪黑激素表达。此外,在血清缺乏培养基培养细胞并转48h后,更换新鲜培养基并加入4μmol/l PF-04691502抑制剂孵化24h。测定AKT蛋白水平、总mTOR蛋白水平和相应磷酸化蛋白水平。结果与NC组相比,MT1组在细胞周期S期阻滞（p<0.05）,伴随增殖减少和早期凋亡（p<0.05）。三组细胞上清液检测到褪黑激素分泌均随时间增加（p<0.05）。Western-blot分析显示,MT1过表达抑制了PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活。结论SKOV3细胞有自行分泌褪黑激素的能力。MT1过表达可与内源... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

pcDNA3.1-MT1进行基因扩増后的酶切图谱与部分测序片段Fig.1MacrorestrictionmapandsequencingthepartialDNAfragmentsofpcDNA3.1-MT1

SKOV3-MT1组中MT1表达显著升Figure2.MT1expressionwassignificantlyincreasedinSKOV3-MT1group.

重庆医科大学硕士研究生学位论文22图3.Tunel染色与AnnexinV-FITC/PI单染法检测细胞凋亡水平，MT1过表达显著促进SKOV3细胞凋亡Figure3TheapoptosisofSKOV3cellswasdetectedbyTunelStainingandAnnexinV-FITC/PIassay，MT1overexpressionsignificantlypromotedSKOV3cellapoptosis.(A)AnnexinV-FITC/PIassayofapoptosisrateafterMT1transfection(24and48h)inSKOV3..(B)TunelStainingassayofapoptosisinSKOV3-MT1,SKOV3-BLANKandSKOV3-NC,theapoptosiscellswerelabeledwitharrows.*,p＜0.05;**,p＜0.01.2.2MT1过表达导致SKOV3细胞周期在S期发生阻滞并抑制细胞增殖EdU显像结果显示，MT1-pcDNA3.1质粒转染SKOV3细胞48h后，更换新鲜培养基重新培养。在72h内由EDU检测细胞增殖率，与对照组和NC组相比，细胞增殖率随时间延长而降低(图4A，*p<0.05)。使用流式细胞术检测24h和48h后SKOV3细胞的细胞周期。NC组与对照组细胞在细胞周期各阶段的分布无明显差异。与NC组和对照组相比，MT1组在G1期细胞百分比较低，但S期细胞百分比较高(图4B,*p<0.05)。但MT1组与NC组、对照组比较，G2期差异无统计学意义(p>0.05)。这说明SKOV3细胞中MT1过表达可在S期阻滞细胞周期，进而影响细胞增殖。图4.流式细胞术与EDU染色分别检测各组细胞周期与增殖，MT1过表达显著抑制SKOV3细胞增殖并阻滞细胞周期

【参考文献】：
期刊论文
[1]Epidemiology of ovarian cancer:a review[J]. Brett M.Reid,Jennifer B.Permuth,Thomas A.Sellers.  Cancer Biology & Medicine. 2017(01)



本文编号：2949667