LncRNA Gm2115调控糖尿病肾病骨髓间充质干细胞迁移的机制研究

发布时间：2021-01-02 03:45

　　目的探讨lnc RNA Gm2115对糖尿病肾病骨髓间充质干细胞迁移的影响以及潜在的机制。方法运用二代测序技术（RNA sequencing,RNA-seq）检测正常小鼠及糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）模型小鼠肾脏组织中差异表达的长链非编码RNA（long non-coding RNA,lnc RNA）,采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,q RT-PCR）检测候选lnc RNA在DN模型小鼠及对照小鼠肾脏组织中的表达情况。我们采用C57BL/6J雄性小鼠提取股骨和胫骨的骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）进行原代培养,通过流式细胞仪检测BMSCs表面标志物、成骨成脂诱导实验对第三代BMSCs进行鉴定。对BMSCs进行DN样微环境（高糖、高脂多糖、高糖基末期终产物）培养,构建DN BMSCs模型,运用划痕实验检测DN BMSCs和正常BMSCs的迁移能力。通过q RT-PCR检测候选DN相关的lnc RNA,仅lnc RNA Gm2115的差异表达趋势... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

RNA-seq检测正常和DN模型小鼠肾脏组织差异表达lncRNAs

重庆医科大学硕士研究生学位论文21图1.2qRT-PCR检测13个候选lncRNA在正常和DN模型小鼠肾脏组织中的表达(*，p<0.05；**，p<0.01；NS，nosignificant)Fig1.2ThethirteenlncRNAcandidatesweredetectedbyqRT-PCRinkidneytissuesofnormalandDNmice(*，p<0.05；**，p<0.01；NS，nosignificant)3.2小鼠骨髓间充质干细胞原代培养及鉴定我们采用C57BL/6J雄性小鼠提取股骨和胫骨BMSCs进行原代培养，通过流式细胞仪检测BMSCs表面标志物、成骨成脂诱导实验对第三代BMSCs进行鉴定。结果显示，第三代BMSCs高表达CD29，阳性表达率为99.1%，CD45表达呈低表达，表达率为7.71%（图1.3）；成脂诱导液培养21天后，镜下观察可见部分细胞可被染成点状橘红色，说明BMSCs分化为脂肪样细胞；成骨诱导液诱导28天后细胞可被染成橘红色，并且出现钙结节，说明BMSCs分化成骨样细胞(图1.4)。以上结果表明BMSCs模型构建成功，可用于后续实验。

流式细胞仪检测BMSCs表面标志物CD29、CD45的表达

【参考文献】：
期刊论文
[1]Risks of rapid decline renal function in patients with type 2 diabetes[J]. Yi-Jing Sheen,Wayne HH Sheu.  World Journal of Diabetes. 2014(06)



本文编号：2952587