基于UHPLC-Q-TOF/MS技术的淫羊藿和山楂叶质量研究
发布时间：2021-01-02 03:17
目的:采用UHPLC-PDA-Q-TOF/MS（超高效液相色谱-二极管阵列检测器-四级杆飞行时间质谱）通过定性和相对定量的方法对中药淫羊藿和山楂叶进行质量研究。方法:本文第一部分以当前栽培产业的主要种类箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿和天平山淫羊藿为研究对象,首先运用UHPLC-Q-TOF/MS结合UNIFI数据分析平台对淫羊藿化学成分进行快速鉴定。其次,结合PCA及OPLS-DA等化学计量学方法对淫羊藿不同部位样品和三个种淫羊藿栽培种质、相应野生种质以及国内其他野生种质进行差异性分析。最后利用UHPLC-PDA（λ=270nm）结合热图可视化分析对三个种淫羊藿不同部位化学成分以及栽培、相应野生和其他野生淫羊藿样本中12个黄酮类成分和总黄酮进行相对定量。本文第二部分以不同种（野山楂和山里红）和不同季节山楂叶（山里红）为研究对象,首先运用UHPLC-Q-TOF/MS结合UNIFI数据分析平台对山楂叶化学成分进行分析鉴定。其次,通过PCA及OPLS-DA等化学计量学方法对不同种山楂叶进行差异性分析。最后利用UHPLC-PDA（λ=280nm）对不同季节山里红叶中含量较高的5个黄酮类成分和总黄酮以及3...
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：100 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
淫羊藿中黄酮类化合物主要母核类型以及糖基取代基结构
山西医科大学硕士学位论文8图1-2UHPLC-Q-TOF/MS结合UNIFI数据分析平台快速鉴定淫羊藿中黄酮类化合物示意图碎片裂解规律及色谱规律如下：1)淫羊藿中黄酮类化合物在负离子低能量时易出现[M-H]的准分子离子峰且多数化合物会伴随较高丰度的[M＋HCOO]以及[M-H+2H2O]的加合离子峰，在正离子低能量时存在丰度较高的[M+H]+的准分子离子峰，通过准分子离子峰及特征加合离子峰可判断化合物的分子量和分子式。2)在负离子高能量下，可观察到连续脱糖后的特征母核碎片，其中m/z367是A类黄酮化合物的特征碎片，m/z353是B类黄酮化合物的特征碎片，m/z383是C类黄酮化合物的特征碎片，m/z369是D类黄酮化合物的特征碎片，m/z285是E类黄酮化合物的特征碎片，m/z301是F类黄酮化合物的特征碎片，通过特征母核碎片可判断化合物母核的类型。3)在负离子模式下，淫羊藿中黄酮类成分会优先脱去C-7位上的糖基而在正离子模式下更倾向于脱去C-3位上的糖基，通过正负离子模式下糖基脱落的顺序可以判断糖基所连位置。4)在正负离子高能量通道下，会观察到一系列脱糖的特征碎片，例如162mDa意味着脱掉一分子葡萄糖，132mDa意味着脱掉一分子木糖，146mDa意味着脱掉一分
山西医科大学硕士学位论文9子鼠李糖等，通过一系列脱糖的特征碎片可以判断淫羊藿中黄酮类化合物所连糖基的类型。5)此外，对比糖基类型相同但连接位点不同的对照品以及相关文献报道的该类化合物色谱行为发现[28]，在反相C18色谱柱上，当C-3位糖基为rha-glc或rha-xyl连接时，出峰时间顺序为1-4位连接>1-3位连接>1-2位连接;当C-3位为rha-rha连接时,出峰时间顺序为1-3位连接>1-2位连接>1-4位连接。2.2.2淫羊藿不同部位化学成分的鉴定采用所建立的UHPLC-Q-TOF/MS方法快速分析箭叶、柔毛、天平山淫羊藿叶、茎以及根茎样品，箭叶淫羊藿不同部位样品BPI图见图1-3，柔毛淫羊藿不同部位样品BPI图见图1-4，天平山淫羊藿不同部位样品BPI图见图1-5。将建立的淫羊藿数据库导入UNIFI软件中，创建分析方法并对采集到的数据进行分析，UNIFI软件会对样品中的色谱峰与数据库中化合物进行自动匹配同时给出经处理后的可信数据，包括化合物名称、保留时间、质量数误差、标识的高能量碎片数目以及化学式等信息。将UNIFI给出的初步鉴定结果与2.2.1项下总结的规律进行匹配与确证，共鉴定箭叶、柔毛、天平山淫羊藿不同部位化合物74个，见表1-1。其中分别以色谱峰3、7、10、11、16、17、21以及33为例，详细论述化合物结构鉴定过程。图1-3负离子模式下箭叶淫羊藿不同部位样品UHPLC-Q-TOF/MS表征BPI图(a):叶；(b):茎；(c):根茎
【参考文献】：
期刊论文
[1]LC-MS法研究黄芪对附子6种乌头生物碱大鼠药代动力学的影响[J]. 刘玉婷,蒋且英,黄国勇,陈绪龙,廖正根. 药学学报. 2019(12)
[2]基于一测多评法测定淫羊藿中6种黄酮类化合物的含量[J]. 马越,李德坤,叶正良,郭巧生. 中药材. 2019(05)
[3]淫羊藿、女贞子及其相关方剂治疗骨质疏松症的研究进展[J]. 李晓曦,刘仁慧. 医学研究杂志. 2019(04)
[4]淫羊藿和巫山淫羊藿药材经加热处理淫羊藿苷含量变化研究[J]. 孙欣光,周茗,马百平,郭宝林. 中国中药杂志. 2019(09)
[5]UPLC-Q-TOF-MSE技术结合UNIFI筛查平台快速分析补骨脂化学成分[J]. 丁玉婷,郑竹宏,赵仁云,张娜,孙玉杰,李剑豪,王景红,罗杰,贾珊珊,孙毅坤. 质谱学报. 2018(06)
[6]冬虫夏草蛋白LC-MS指纹图谱研究[J]. 李文庆,甄达明,田野,杨丰庆,钱正明,李文佳. 时珍国医国药. 2018(10)
[7]液质联用技术在中药质量控制中的应用[J]. 张黎媛. 世界中医药. 2018(02)
[8]恒山仿野生黄芪绝对生长年限鉴别及黄酮和皂苷积累规律研究[J]. 高四云,李科,熊一峰,秦雪梅,崔贵梅,张翔,杜冠华. 药学学报. 2018(01)
[9]基于HPLC-MS/MS比较不同产地山楂叶中8个成分含量[J]. 潘海峰,杨明宇,徐宝欣,李艳荣. 药物分析杂志. 2017(12)
[10]基于指纹图谱结合多元统计分析评价山楂叶质量差异性[J]. 王领弟,臧亚茹,潘伟东,高婧,杜义龙,潘海峰. 中国现代中药. 2017(12)
本文编号：2952546
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：100 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
淫羊藿中黄酮类化合物主要母核类型以及糖基取代基结构
山西医科大学硕士学位论文8图1-2UHPLC-Q-TOF/MS结合UNIFI数据分析平台快速鉴定淫羊藿中黄酮类化合物示意图碎片裂解规律及色谱规律如下：1)淫羊藿中黄酮类化合物在负离子低能量时易出现[M-H]的准分子离子峰且多数化合物会伴随较高丰度的[M＋HCOO]以及[M-H+2H2O]的加合离子峰，在正离子低能量时存在丰度较高的[M+H]+的准分子离子峰，通过准分子离子峰及特征加合离子峰可判断化合物的分子量和分子式。2)在负离子高能量下，可观察到连续脱糖后的特征母核碎片，其中m/z367是A类黄酮化合物的特征碎片，m/z353是B类黄酮化合物的特征碎片，m/z383是C类黄酮化合物的特征碎片，m/z369是D类黄酮化合物的特征碎片，m/z285是E类黄酮化合物的特征碎片，m/z301是F类黄酮化合物的特征碎片，通过特征母核碎片可判断化合物母核的类型。3)在负离子模式下，淫羊藿中黄酮类成分会优先脱去C-7位上的糖基而在正离子模式下更倾向于脱去C-3位上的糖基，通过正负离子模式下糖基脱落的顺序可以判断糖基所连位置。4)在正负离子高能量通道下，会观察到一系列脱糖的特征碎片，例如162mDa意味着脱掉一分子葡萄糖，132mDa意味着脱掉一分子木糖，146mDa意味着脱掉一分
山西医科大学硕士学位论文9子鼠李糖等，通过一系列脱糖的特征碎片可以判断淫羊藿中黄酮类化合物所连糖基的类型。5)此外，对比糖基类型相同但连接位点不同的对照品以及相关文献报道的该类化合物色谱行为发现[28]，在反相C18色谱柱上，当C-3位糖基为rha-glc或rha-xyl连接时，出峰时间顺序为1-4位连接>1-3位连接>1-2位连接;当C-3位为rha-rha连接时,出峰时间顺序为1-3位连接>1-2位连接>1-4位连接。2.2.2淫羊藿不同部位化学成分的鉴定采用所建立的UHPLC-Q-TOF/MS方法快速分析箭叶、柔毛、天平山淫羊藿叶、茎以及根茎样品，箭叶淫羊藿不同部位样品BPI图见图1-3，柔毛淫羊藿不同部位样品BPI图见图1-4，天平山淫羊藿不同部位样品BPI图见图1-5。将建立的淫羊藿数据库导入UNIFI软件中，创建分析方法并对采集到的数据进行分析，UNIFI软件会对样品中的色谱峰与数据库中化合物进行自动匹配同时给出经处理后的可信数据，包括化合物名称、保留时间、质量数误差、标识的高能量碎片数目以及化学式等信息。将UNIFI给出的初步鉴定结果与2.2.1项下总结的规律进行匹配与确证，共鉴定箭叶、柔毛、天平山淫羊藿不同部位化合物74个，见表1-1。其中分别以色谱峰3、7、10、11、16、17、21以及33为例，详细论述化合物结构鉴定过程。图1-3负离子模式下箭叶淫羊藿不同部位样品UHPLC-Q-TOF/MS表征BPI图(a):叶；(b):茎；(c):根茎
【参考文献】：
期刊论文
[1]LC-MS法研究黄芪对附子6种乌头生物碱大鼠药代动力学的影响[J]. 刘玉婷,蒋且英,黄国勇,陈绪龙,廖正根. 药学学报. 2019(12)
[2]基于一测多评法测定淫羊藿中6种黄酮类化合物的含量[J]. 马越,李德坤,叶正良,郭巧生. 中药材. 2019(05)
[3]淫羊藿、女贞子及其相关方剂治疗骨质疏松症的研究进展[J]. 李晓曦,刘仁慧. 医学研究杂志. 2019(04)
[4]淫羊藿和巫山淫羊藿药材经加热处理淫羊藿苷含量变化研究[J]. 孙欣光,周茗,马百平,郭宝林. 中国中药杂志. 2019(09)
[5]UPLC-Q-TOF-MSE技术结合UNIFI筛查平台快速分析补骨脂化学成分[J]. 丁玉婷,郑竹宏,赵仁云,张娜,孙玉杰,李剑豪,王景红,罗杰,贾珊珊,孙毅坤. 质谱学报. 2018(06)
[6]冬虫夏草蛋白LC-MS指纹图谱研究[J]. 李文庆,甄达明,田野,杨丰庆,钱正明,李文佳. 时珍国医国药. 2018(10)
[7]液质联用技术在中药质量控制中的应用[J]. 张黎媛. 世界中医药. 2018(02)
[8]恒山仿野生黄芪绝对生长年限鉴别及黄酮和皂苷积累规律研究[J]. 高四云,李科,熊一峰,秦雪梅,崔贵梅,张翔,杜冠华. 药学学报. 2018(01)
[9]基于HPLC-MS/MS比较不同产地山楂叶中8个成分含量[J]. 潘海峰,杨明宇,徐宝欣,李艳荣. 药物分析杂志. 2017(12)
[10]基于指纹图谱结合多元统计分析评价山楂叶质量差异性[J]. 王领弟,臧亚茹,潘伟东,高婧,杜义龙,潘海峰. 中国现代中药. 2017(12)
本文编号：2952546
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