骨髓间充质干细胞来源的微颗粒减轻过氧化氢诱发H9C2心肌细胞损伤的作用及其机制的初步研究

发布时间：2021-01-08 03:24

　　目的收集并纯化间充质干细胞来源的微颗粒（MSC-MPs）,观察其对过氧化氢（H2O2）诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用,并初步研究其机制。方法使用全骨髓贴壁法分离纯化MSCs,运用显微镜观察细胞形态学变化、流式细胞术鉴定表面抗原、细胞计数法绘制细胞生长曲线以及诱导MSCs成骨和成脂分化四种方法来对MSCs进行鉴定。使用无血清培养基处理第5代MSCs 48 h,收集上清液后梯度离心获取MSCMPs。利用BCA法检测MSC-MPs的蛋白含量,利用流式细胞术检测MSC-MPs的大小、数量和表面抗原。使用80μmol·L-1的H2O2处理细胞3 h,诱导H9C2细胞氧化应激损伤模型,研究24和48μg·ml-1的MSC-MPs预处理H9C2心肌细胞24 h以后,其对细胞存活率、细胞释放的乳酸脱氢酶等指标的影响,包括:使用CCK-8法检测细胞存活率,使用检测试剂盒分别检测细胞中的MDA、SOD、GSH-Px以及细胞LDH释放量,运用JC-1检测试剂盒和ROS检测试剂盒检测ROS相对含量和线粒体膜电位水平,使用Caspase-3检测试剂盒和Caspase-9检测试剂盒检测细胞中Caspase-3... 

【文章来源】： 马瑞君 山西医科大学

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

骨髓间充质干细胞释放微颗粒示意图

山西医科大学硕士学位论文112结果2.1MSCs的形态学特征从大鼠股骨和胫骨内提取的第0代MSCs大小和形态各异，但是第0代细胞经过10d左右的换液后较小的红细胞和其他血细胞的数量逐渐减少，MSCs呈现出典型的“纺锤样”和“鱼群状”排列，MSCs在首次传代后生长速度显著增快，6d左右即可达到融合率90％左右，MSCs培养到第2代时杂细胞含量较少，即获得到高纯度的MSCs。图2-1大鼠MSCs的形态学特征A：分离24h后的MSCs；B：48h后首次换液时的MSCs；C：第1代MSCs；D：第2代的MSCs；E：第3代的MSCs；F：第6代的MSCs。2.2MSCs的生长曲线使用第5代MSCs进行实验，生长曲线呈“S”型，MSCs在接种后的24h内生长速度缓慢，在第2天到第7天生长速度显著增快，呈指数速度生长，在第7天，细胞数量接近饱和，生长速度显著降低，到达平台期。

第5代MSCs细胞生长曲线


本文编号：2963812