专利化合物HDF的体外抗肿瘤活性和机制研究
发布时间：2021-01-08 04:23
本研究报道了一个具有抗微管聚合活性的杜鹃素衍生物6,8-二甲基-7,4’-二甲氧基-5-羟基甲烷（HDF）。而杜鹃素作为止咳祛痰药物并没有展现出微管靶向的生物活性。通过细胞生物学实验,验证了HDF具有抑制肿瘤细胞增殖、影响细胞形态、抑制细胞迁移、阻滞细胞周期以及诱导细胞凋亡的生物活性。通过显微成像技术、生物化学和生物物理学手段,证实HDF能够抑制微管组装从而扰乱细胞内微管的排布。材料方法:以人急性早幼粒白血病细胞系HL-60、人肺癌细胞系A549和人宫颈癌细胞系HeLa细胞为模型,以及从猪脑中分离提取微管蛋白,进行了一系列细胞生物学、生物化学和生物物理学实验。（1）应用MTT比色法测定了HDF对细胞增殖的影响。（2）用划痕迁移法测定HDF对A549和HeLa这两种贴壁细胞迁移能力的影响。（3）用流式细胞术检测了HDF对细胞周期和细胞凋亡水平的影响。（4）用免疫荧光成像展现了HDF对细胞内微管空间定位的影响。（5）通过微管体外组装实验和对细胞内蛋白提取物免疫印迹分析,判断出HDF对微管组装的影响。（6）用等温滴定量热技术鉴定α/β-微管蛋白异二聚体与HDF是否存在直接相互作用。结果:（1...
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
α/β-微管蛋白上已知的六个结合位点
106,109]、抗微生物(抗细菌[110-112]、抗真菌[112,113]和抗病毒[112,113])、抗癌[106,114]和止泻[115]等活性而被广泛研究。近年来，随着对其构效关系的深入研究，越来越多黄酮类化合物作为靶向药物的潜能被发现[116]。1.3.2黄酮类化合物的理化特征与生物活性从广义上讲，黄酮类化合物泛指两个苯环通过中央三碳链相互连结而形成的一系列C6-C3-C6化合物的总称[117]。根据国际纯粹与应用化学联合会(IUPAC)的定义，黄酮类化合物可以被分为：1)flavonoidsorbioflavonoids2)isoflavonoids3)neoflavonoids图1-2黄酮类化合物的15-碳基础分子结构。Figure1-2.Molecularstructureofthe15-carbonskeleton.以上三种黄酮类化合物都具有15个碳原子骨架的一般结构，该骨架由两个苯环(A环和B环)和一个杂环(C环)组成(图1-2)。大量的流行病学研究表明，药用类黄酮化合物的消耗与各类疾病的发展呈负
兰州大学硕士学位论文专利化合物HDF的体外抗肿瘤活性和机制研究10第二章实验材料和方法2.1实验材料2.1.1化合物6，8-二甲基-7，4"-二甲氧基-5-羟基甲烷(HDF)经杜鹃素修饰得到(图2-1)。杜鹃素与1.5当量的(CH3)2SO4/K2CO3在丙酮中得到鹃花醇(化合物1)(a)；鹃花醇加入醋酸酐溶液冲，冰浴条件下滴加浓硫酸，经淬灭、萃娶洗涤、干燥、过滤以及浓缩，得到白色晶体化合物2(b)；将化合物2溶解在四氢呋喃(THF)/H2O的溶液中，冰浴条件下加入NaBH4、搅拌，后经淬灭、萃娶干燥、过滤、浓缩，得到白色晶体HDF(c)。HDF粉末保存在-20℃条件下供后续实验使用。图2-1HDF由杜鹃素经3步修饰得到。试剂和条件：(a)(CH3)2SO4，丙酮，K2CO3，回流，75.9%;(b)Ac2O，H2SO4，0°C，94.24%；(c)NaBH4，THF/H2O，0°C，62.85%。Figure2-1.FarrerolwasmodifiedtoaffordtheHDFaccordingtothreesteps.Reagentandconditions:(a)(CH3)2SO4,acetone,K2CO3,reflux,75.9%;(b)Ac2O,H2SO4,0°C,94.24%;(c)NaBH4,THF/H2O,0°C,62.85%.2.1.2细胞系人早幼粒髓性白血病细胞系HL-60、人肺腺癌细胞系A549和人宫颈癌细胞系HeLa均购于上海细胞库保存中心(ChinaCenterforTypeCultureCollection,CCTCC)。2.1.3富含微管结合蛋白的微管蛋白溶液的制备
本文编号：2963902
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
α/β-微管蛋白上已知的六个结合位点
106,109]、抗微生物(抗细菌[110-112]、抗真菌[112,113]和抗病毒[112,113])、抗癌[106,114]和止泻[115]等活性而被广泛研究。近年来，随着对其构效关系的深入研究，越来越多黄酮类化合物作为靶向药物的潜能被发现[116]。1.3.2黄酮类化合物的理化特征与生物活性从广义上讲，黄酮类化合物泛指两个苯环通过中央三碳链相互连结而形成的一系列C6-C3-C6化合物的总称[117]。根据国际纯粹与应用化学联合会(IUPAC)的定义，黄酮类化合物可以被分为：1)flavonoidsorbioflavonoids2)isoflavonoids3)neoflavonoids图1-2黄酮类化合物的15-碳基础分子结构。Figure1-2.Molecularstructureofthe15-carbonskeleton.以上三种黄酮类化合物都具有15个碳原子骨架的一般结构，该骨架由两个苯环(A环和B环)和一个杂环(C环)组成(图1-2)。大量的流行病学研究表明，药用类黄酮化合物的消耗与各类疾病的发展呈负
兰州大学硕士学位论文专利化合物HDF的体外抗肿瘤活性和机制研究10第二章实验材料和方法2.1实验材料2.1.1化合物6，8-二甲基-7，4"-二甲氧基-5-羟基甲烷(HDF)经杜鹃素修饰得到(图2-1)。杜鹃素与1.5当量的(CH3)2SO4/K2CO3在丙酮中得到鹃花醇(化合物1)(a)；鹃花醇加入醋酸酐溶液冲，冰浴条件下滴加浓硫酸，经淬灭、萃娶洗涤、干燥、过滤以及浓缩，得到白色晶体化合物2(b)；将化合物2溶解在四氢呋喃(THF)/H2O的溶液中，冰浴条件下加入NaBH4、搅拌，后经淬灭、萃娶干燥、过滤、浓缩，得到白色晶体HDF(c)。HDF粉末保存在-20℃条件下供后续实验使用。图2-1HDF由杜鹃素经3步修饰得到。试剂和条件：(a)(CH3)2SO4，丙酮，K2CO3，回流，75.9%;(b)Ac2O，H2SO4，0°C，94.24%；(c)NaBH4，THF/H2O，0°C，62.85%。Figure2-1.FarrerolwasmodifiedtoaffordtheHDFaccordingtothreesteps.Reagentandconditions:(a)(CH3)2SO4,acetone,K2CO3,reflux,75.9%;(b)Ac2O,H2SO4,0°C,94.24%;(c)NaBH4,THF/H2O,0°C,62.85%.2.1.2细胞系人早幼粒髓性白血病细胞系HL-60、人肺腺癌细胞系A549和人宫颈癌细胞系HeLa均购于上海细胞库保存中心(ChinaCenterforTypeCultureCollection,CCTCC)。2.1.3富含微管结合蛋白的微管蛋白溶液的制备
本文编号：2963902
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