UPLC-MS法研究角鲨烯及其氧化物对大鼠体内CoQ10平衡的影响

发布时间：2021-01-12 17:30

　　目的:本文利用超高效液相色谱-高分辨的Obitrap质谱联用仪（UPLC-MS）,建立高灵敏度的大鼠血浆中辅酶Q10（CoQ10）的测定方法,并研究角鲨烯对大鼠体内CoQ10平衡的影响,以及氧化角鲨烯对CoQ10合成的影响。方法:首先,选择CoQ9为内标物,建立测定大鼠血浆中CoQ10的UPLC-MS方法;灌胃给予大鼠两种不同剂量的角鲨烯（100μL和50μL）,采集灌胃后不同时间点的血样,离心得到血浆,采用沉淀蛋白法处理血浆样本;用建立的UPLC-MS法测定血浆中CoQ10的浓度,并进行QC验证,以考察灌胃给予大鼠角鲨烯后是否能影响其体内CoQ10的平衡;分离、纯化、检测角鲨烯的氧化产物,灌胃给予大鼠两种不同剂量的氧化角鲨烯（100μL和50μL）,继而测定血浆中CoQ10的浓度,以考察不同环氧化角鲨烯对CoQ10合成的影响。结果:比较了有机溶剂提取法和沉淀蛋白法两种不同的样品处理方法,发现以沉淀蛋白法得到的结果比较理想。利用高分辨质谱仪,在优化鞘气、辅助气、毛细管温度、毛细管电压、喷雾电压和tube lens电压等质谱参数后,对CoQ10的标准曲线进行了测定,分别以CoQ10的[M... 

【文章来源】：长春中医药大学吉林省

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

实验设计图

长春中医药大学2020届硕士学位论文12图1-5角鲨烯过量后与体内非甾体类异戊二烯化合物的相互转化示意图为了研究服用角鲨烯是否会影响甾族化合物CoQ10的体内平衡，我们以大鼠为实验对象，通过建立一个高效、灵敏的检测血浆中CoQ10含量的LC-MS方法，来研究角鲨烯对CoQ10体内平衡的影响，利用新建立的高灵敏度的方法，继续研究氧化角鲨烯对CoQ10合成的影响。实验路线设计如图1-6所示。图1-6实验设计图

长春中医药大学2020届硕士学位论文17理的样品行了质谱检测，进样20μL，其中进样浓度为100ng/mLCoQ9和CoQ10的血浆样品通过沉淀蛋白法处理后，负谱扫描结果为图2-1所示，图（A）为负离子模式下内标物质CoQ9标准品和CoQ10标准品总离子流图，图（B）为负离子模式下CoQ9标准品质谱全扫图，图（C）为负离子模式下CoQ10标准品质谱全扫图。图（D）为向空白血浆中加入系列标准曲线工作液，再按照沉淀蛋白法处理进样后负离子模式下使用1/X2加权线性回归分析的CoQ10峰面积与浓度比的代表性标准曲线。图2-1（A）负离子模式下CoQ9标准品和CoQ10标准品总离子流图；（B）负离子模式下CoQ9标准品质谱全扫图；（C）负离子模式下CoQ10标准品质谱全扫图；（D）使用1/X2加权线性回归分析的CoQ10峰面积与浓度比的代表性标准曲线经实验结果验证，两种方法的提取回收率和最低定量下限相同，但沉淀蛋白法的操作更为简便，所以我们采用了该方法。2.4.2生物分析方法验证及结果2.4.2.1选择性和个体基质评价分别取4份空白血浆（A、B、C、D）和2份灌胃大鼠角鲨烯7.5h后的血浆（E、F）各100μL，按沉淀蛋白法处理，其中A、B以50%乙醚甲醇溶液替代标准曲线工作液，以纯甲醇溶液代替内标工作液；C以50%乙醚甲醇溶液替代标准曲线工作液，D以纯甲醇溶液替代内标工作液，标准曲线工作液为W-STD4，用建立的UPLC-MS法进行检测，

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本文编号：2973224