中药有效成分促人诱导多能干细胞神经方向分化功效的评价研究

发布时间：2021-01-13 23:53

　　研究目的:使用小鼠胚胎干细胞报告细胞系及人诱导多能干细胞系对中药有效成分促神经分化功效进行检测,筛选出具有较强促神经分化功效的中药有效成分,为研发促内源性神经再生药物提供实验数据支持。研究方法:1.应用诱导多能干细胞技术,对从健康人与阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）患者尿液中分离的人肾上皮细胞进行重编程,获得人诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells,iPSCs）系。通过碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色、体内畸胎瘤形成实验以及核型分析等,对所构建的人iPSCs进行鉴定。获取可用于促神经分化功效检测的人iPSCs细胞系。2.应用来源于小鼠的胚胎干细胞（Embryonic stem cells,ESCs）报告细胞系CGR8-21uc,以非那吡啶盐酸盐作为阳性对照药物,对中药有效成分与天然产物库中464种药物促神经分化功效进行检测,应用双荧光素酶检测试剂盒,对反映细胞增殖的海肾荧光素酶表达,以及反映细胞神经方向分化的萤火虫荧光素酶表达进行检测。采用K-Means聚类对筛选结果进行聚类分析,筛选得到较阳性对照药物促神经分化功效更强的候... 

【文章来源】：中国中医科学院北京市

【文章页数】：86 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－２尿液样本分离细胞培养至不冋时间点肾上皮细胞形态??注：尿液样本来源于ＮＤＣ－１受试者；（ａ）受试者新鲜尿液样本采集后分离所得??

中药有效成分促人诱导多能干细胞神经方向分化功效的评价研究??■??图１－３传代后培养肾上皮细胞形态??注：图片中细胞为ＮＤＣ－１受试者尿液样本分离培养所得；图片中比例尺为??４００｜ｉｍ。??２．２人ｉＰＳＣｓ细胞系的建立与扩增培养??将Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、Ｋｌｆ４、ｃ－Ｍｙｃ四个转录因子转入从尿液中分离扩增培养得到??的肾上皮细胞。在加入转录因子后第３天，与正常培养肾上皮细胞（图ｌ－４ａ）相??比，可见其形态发生明显改变，外形不规则，可见部分脱落死细胞，如图ｌ－４ｂ所??７Ｊ＼〇??３４??

中国中医科学院硕士论文??■■??图丨－４正常培养肾上皮细胞与加入转录因子培养三天后细胞形态比较??注：图片中细胞来源于ＮＤＣ－１受试者尿液样本分离所得；（ａ）正常培养肾上皮??细胞形态；（ｂ）加入转录因子培养三天后细胞形态；图片中比例尺均为４０〇ｎｍ。??将加入转录因子后重编程的细胞传代后继续培养，可观察到典型克隆生氏，??克隆内细胞连接紧密，类圆形，核质比较大；克隆边缘清晰锐利；克隆外可见肾??上皮细胞生长，如图１－５所示。??ｍｕ??图１－５重编程细胞形态??注．？?ＮＤＣ－１肾上皮细胞加入转录因子后培养２４天细胞形态；（ａ）图片中比例尺??为１０００｜ｉｍ；?（ｂ）图片中比例尺为２００ｐｍ。??使用机械法分离挑取克隆至新培养板中扩增培养，细胞生长良好，克隆形态??典型，边缘锐利，未见明显分化细胞；克隆内细胞连接紧密，细胞核较大，如图??３５??


本文编号：2975783