苯并[a]芘抑制主穹窿蛋白表达与神经元毒性损伤的潜在机制研究

发布时间：2021-01-20 10:47

　　目的:研究主穹窿蛋白（Major vault protein,MVP）表达对神经元生理功能的影响,探讨苯并芘（Benzo（a）pyrene,B[a]P）抑制MVP表达的可能原因,从DNA甲基化修饰入手研究MVP被抑制的可能原因,为B[a]P致神经系统损伤机制研究提供理论基础。方法:首先采用PC12细胞转染MVP沉默病毒与过表达质粒构建MVP过表达与沉默体外模型,并运用Western blot与Real-time PCR验证模型。随后进行CCK8细胞活性与Hoechst凋亡染色检测MVP的表达对PC12细胞活性和凋亡的影响。对构建好的PC12细胞过表达与沉默模型再进行B[a]P染毒,并再次采取相同的实验方法检测MVP沉默与过表达质粒后B[a]P染毒对PC12细胞活性与凋亡的影响。构建B[a]P染毒体内模型,选取20只3周龄大的雄性SD大鼠在适宜环境下培养一周后,随机分为对照组与B[a]P染毒组（2.0mg/kg）,进行为期7周的灌胃染毒。染毒结束后,采用Morris水迷宫检测大鼠的空间记忆学习能力,随后进行HE染色和RBSS测序,对测序结果进行GO和KEGG分析,采用Real-time ... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

转染后PC12细胞MVP的mRNA的表达;A：转染病毒后，MVP的mRNA表

重庆医科大学硕士研究生学位论文18图1-1转染后PC12细胞MVP的表达水平。A：转染病毒后，MVP的表达；B：转染病毒后，MVP的相对表达量；C：转染质粒后，MVP蛋白的表达；D：转染质粒后，MVP的相对表达量（*P<0.05,与Control-shRNA组或者与pLenti-Control组相比）。Figure1-1MVPexpressionlevelofPC12cellsaftertransfection.A:expressionofproteinaftertransfectionofvirus;B:relativeexpressionofproteinaftertransfectionofvirus;C:expressionofproteinaftertransfectionofplasmid;D:relativeexpressionofproteinaftertransfectionofplasmid(*P<0.05,comparedwithControl-shRNAgrouporpLenti-Controlgroup).图1-2转染后PC12细胞MVP的mRNA的表达;A：转染病毒后，MVP的mRNA表达；B：转染质粒后，MVP的mRNA表达；（*P<0.05,与Control-shRNA组或者与pLenti-Control组相比）Figure1-2MVPmRNAexpressionofPC12cellsaftertransfection;A:MVPmRNAexpressionaftervirustransfection;B:MVPmRNAexpressionafterplasmidtransfection;(*P<0.05,comparewithControl-shRNAgrouporpLenti-Controlgroup)

重庆医科大学硕士研究生学位论文192.2MVP沉默与过表达后对PC12细胞活性和凋亡的影响PC12细胞转染MVP沉默病毒与过表达质粒后首先进行了CCK8细胞活性检测，检测MVP的表达与否对细胞的活性的影响，实验结果发现，分别转染MVP沉默病毒与过表达质粒96小时内，MVP的表达与否对细胞的活性并无影响，如图1-3所示。随后对转染后的细胞进行Hoechst凋亡染色，我们同样发现MVP蛋白的表达与否对PC12细胞凋亡并无影响，如图1-4所示。图1-3转染后PC12细胞活性检测：A:转染病毒4天的细胞活性检测；B：转染质粒后4天的细胞活性检测。Figure1-3PC12cellviabilitytestaftertransfection:A:cellviabilitytest4daysaftertransfectionofvirus;B:cellviabilitytest4daysaftertransfectionofplasmid.图1-4转染后PC12细胞凋亡检测。A、转染病毒后代表性图片，黄色箭头指向凋亡细胞；B：转染病毒后凋亡细胞的阳性计数；C：转染质粒后代表性图片，黄色箭头指向凋亡细胞；D：转染质粒后凋亡细胞的阳性计数。Figure1-4DetectionofPC12cellapoptosisaftertransfection.A.Representativepictures

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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本文编号：2988904