Akt抑制剂MK-2206在缺氧环境下对结肠癌SW480细胞增殖、侵袭的作用研究
发布时间：2021-01-20 20:36
目的:1.评价Akt抑制剂MK-2206对常氧和缺氧环境下的人结肠癌SW480细胞的增殖、侵袭的影响;2.对比在MK-2206作用下的常氧和缺氧环境中的SW480细胞的Akt、mTOR、HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平的差异;3.初步阐明PI3K/Akt/mTOR信号通路与HIF-1α在调控结直肠癌SW480细胞的增殖、侵袭的作用。方法:1.常规培养SW480细胞株,待细胞贴壁生长后分别使用0、100、200、250、300μmol/L的CoCl2诱导细胞缺氧,观察细胞生长情况。结合参考文献选取适宜浓度的CoCl2来进行实验,利用CCK-8实验检测细胞的增殖活性,得到SW480细胞缺氧模型组。2.在细胞中加入0、5、10、15、20μmol/L浓度的Akt抑制剂MK-2206处理24h、48h、72h,CCK-8实验检测不同浓度下的MK-2206对细胞增殖的影响。3.选取能够显著抑制细胞生长的最小的MK-2206浓度,结合之前的CoCl2浓度,然后将实验分成4个组:空白组,MK-2206组,缺氧（CoCl2...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CoCl2作用24-72h时对结肠癌SW480细胞相对增殖率的影响
遵义医科大学硕士学位论文刘琦21显差异(P＞0.05)，高于10μmol/L的组与对照组有显著差异(P＜0.05)，同时在显微镜下观察到MK-2206浓度越高，细胞的间距越大，悬浮细胞越多。而72h时，结果提示各浓度组增殖率明显下降(P＜0.05)，且在镜下可见大量悬浮细胞，详见图2。由此得知MK-2206具有一定的浓度和时间依赖性，且10μmol/L的MK-2206作用24h时已开始产生抑制效果，作用48h时抑制作用显著，且细胞活性相对较好，故48h可作为检测时间点，而10μmol/L的MK-2206可作为实验抑制浓度。图2MK-2206作用24-72h时对结肠癌SW480细胞相对增殖率的影响Fig2TheeffectofMK-2206ontherelativeproliferationrateofcoloncancerSW480cellsat24-72h2.1.3MK-2206对不同氧环境下的SW480细胞侵袭及迁移的影响结合以上预实验结果，最终我们选择了200μmol/L的CoCl2、10μmol/L的MK-2206来处理细胞，选择细胞活性相对较好的48h为检测时间节点。最后由四个实验组中的侵袭实验结果得知，缺氧组比空白组的侵袭性明显增加(P＜0.05)，同时也高于MK-2206+缺氧组(P＜0.05)；MK-2206组的侵袭性显著降低(P＜0.05)，而MK-2206组和MK-2206+缺氧组的结果表明无明显差异(P＞0.05)，如图3A、表2、图4A、B示。在迁移实验中，缺氧组无论是和空白组比较还是和MK-2206+缺氧组相比，其迁移数量均明显增加(P＜0.05)，MK-2206组较空白组和MK-2206+缺氧组穿过transwell小室的细胞数量显著减少(P＜0.05)。详见图3B、表2、图4C、D。
遵义医科大学硕士学位论文刘琦22图3各组镜下结晶紫染色后Transwell小室侵袭、迁移实验结果(×200）Fig3TheexperimentalresultsofTranswellchamberinvasionandmigrationaftermicroscopiccrystalvioletstainingineachgroup(×200）表2各组细胞侵袭、迁移实验比较（×200）Tab2Thecomparisonofcellinvasionandmigrationexperimentsineachgroup（×200）空白组aMK-2206b缺氧组cMK-2206+缺氧d侵袭细胞数(个)p1p2125.00±6.5671.67±14.360.0010.255183.67±14.010.0010.00084.67±15.14迁移细胞数(个)p1p2160.67±14.7498.00±6.000.0010.003258.67±20.600.0000.000144.00±8.54注：p1是以a为对照组时b、c组p值，p2是以d为对照时b、c组p值。BA
【参考文献】：
期刊论文
[1]缺氧诱导因子1-α参与结直肠癌细胞上皮间质转化及DNA同源重组修复的机制[J]. 唐康,程勇,庞云,伍鑫,张百川,王五艺. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2016(06)
[2]结直肠癌研究30年回顾和现状[J]. 郑树,张苏展,黄彦钦. 实用肿瘤杂志. 2016(01)
[3]Strategies to overcome resistance to epidermal growth factor receptor monoclonal antibody therapy in metastatic colorectal cancer[J]. Woo-Jeong Jeong,Pu-Hyeon Cha,Kang-Yell Choi. World Journal of Gastroenterology. 2014(29)
硕士论文
[1]牛磺酸对结直肠癌细胞凋亡与自噬的影响[D]. 舒婷.南昌大学 2017
本文编号：2989743
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CoCl2作用24-72h时对结肠癌SW480细胞相对增殖率的影响
遵义医科大学硕士学位论文刘琦21显差异(P＞0.05)，高于10μmol/L的组与对照组有显著差异(P＜0.05)，同时在显微镜下观察到MK-2206浓度越高，细胞的间距越大，悬浮细胞越多。而72h时，结果提示各浓度组增殖率明显下降(P＜0.05)，且在镜下可见大量悬浮细胞，详见图2。由此得知MK-2206具有一定的浓度和时间依赖性，且10μmol/L的MK-2206作用24h时已开始产生抑制效果，作用48h时抑制作用显著，且细胞活性相对较好，故48h可作为检测时间点，而10μmol/L的MK-2206可作为实验抑制浓度。图2MK-2206作用24-72h时对结肠癌SW480细胞相对增殖率的影响Fig2TheeffectofMK-2206ontherelativeproliferationrateofcoloncancerSW480cellsat24-72h2.1.3MK-2206对不同氧环境下的SW480细胞侵袭及迁移的影响结合以上预实验结果，最终我们选择了200μmol/L的CoCl2、10μmol/L的MK-2206来处理细胞，选择细胞活性相对较好的48h为检测时间节点。最后由四个实验组中的侵袭实验结果得知，缺氧组比空白组的侵袭性明显增加(P＜0.05)，同时也高于MK-2206+缺氧组(P＜0.05)；MK-2206组的侵袭性显著降低(P＜0.05)，而MK-2206组和MK-2206+缺氧组的结果表明无明显差异(P＞0.05)，如图3A、表2、图4A、B示。在迁移实验中，缺氧组无论是和空白组比较还是和MK-2206+缺氧组相比，其迁移数量均明显增加(P＜0.05)，MK-2206组较空白组和MK-2206+缺氧组穿过transwell小室的细胞数量显著减少(P＜0.05)。详见图3B、表2、图4C、D。
遵义医科大学硕士学位论文刘琦22图3各组镜下结晶紫染色后Transwell小室侵袭、迁移实验结果(×200）Fig3TheexperimentalresultsofTranswellchamberinvasionandmigrationaftermicroscopiccrystalvioletstainingineachgroup(×200）表2各组细胞侵袭、迁移实验比较（×200）Tab2Thecomparisonofcellinvasionandmigrationexperimentsineachgroup（×200）空白组aMK-2206b缺氧组cMK-2206+缺氧d侵袭细胞数(个)p1p2125.00±6.5671.67±14.360.0010.255183.67±14.010.0010.00084.67±15.14迁移细胞数(个)p1p2160.67±14.7498.00±6.000.0010.003258.67±20.600.0000.000144.00±8.54注：p1是以a为对照组时b、c组p值，p2是以d为对照时b、c组p值。BA
【参考文献】：
期刊论文
[1]缺氧诱导因子1-α参与结直肠癌细胞上皮间质转化及DNA同源重组修复的机制[J]. 唐康,程勇,庞云,伍鑫,张百川,王五艺. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2016(06)
[2]结直肠癌研究30年回顾和现状[J]. 郑树,张苏展,黄彦钦. 实用肿瘤杂志. 2016(01)
[3]Strategies to overcome resistance to epidermal growth factor receptor monoclonal antibody therapy in metastatic colorectal cancer[J]. Woo-Jeong Jeong,Pu-Hyeon Cha,Kang-Yell Choi. World Journal of Gastroenterology. 2014(29)
硕士论文
[1]牛磺酸对结直肠癌细胞凋亡与自噬的影响[D]. 舒婷.南昌大学 2017
本文编号：2989743
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