USP14调控E-cadherin泛素化在乳腺癌细胞EMT中的作用及分子机制研究
发布时间：2021-02-03 14:09
乳腺癌是威胁全球女性健康的恶性肿瘤之一,其中乳腺癌转移是导致乳腺癌致死率升高的主要原因。因此,研究乳腺癌转移的分子机制以及在此基础上寻找抑制该过程的小分子药物成为乳腺癌治疗中的一个关键性问题。研究表明USP14影响肿瘤发生发展的众多方面,但目前其对乳腺癌侵袭迁移的研究甚少。上皮-间质转化（epithelial to mesenchymal transition,EMT）为肿瘤的转移侵袭提供了基础,而E-钙黏蛋白（E-cadherin）下调是EMT的标志。本课题中,我们首先发现敲低USP14蛋白的表达和使用USP14特异性抑制剂处理均导致乳腺癌细胞迁移和侵袭能力明显降低;然后,我们通过细胞形态学实验以及检测EMT相关标志物的表达发现敲低USP14可显著抑制乳腺癌细胞的EMT过程;通过Western Blot技术明确USP14通过调控E-cadherin的表达从而影响乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。最后,基于USP14去泛素化酶的特性,我们采用免疫共沉淀技术检测了USP14对E-cadherin泛素化水平的影响。结果发现,敲低或使用特异性抑制剂抑制USP14功能后E-cadherin的K63泛...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
去泛素化酶USP14在乳腺癌细胞中呈高表达
第2章USP14对乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响16图2.2敲低USP14的表达抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭A，B、在乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中，转染USP14特异性的siRNA。48小时后进行细胞划痕实验：每隔12小时用显微镜拍照观察划痕愈合情况（左图）。利用ImageJ软件在每张图中选取五个不同的位置测量划痕宽度，而后用GraphPadPrism软件对数据进行统计分析（右图）。C、在MDA-MB-231细胞中，转染USP14特异性的siRNA，48小时后进行Transwell实验：消化细胞、细胞计数、铺到小室中（5×104个/孔），12小时后对小室进行收样、拍照（左图），对数据进行统计分析（右图）。D、在MDA-MB-231细胞中，转染USP14的siRNA，48小时后进行基质胶侵袭实验：细胞消化、计数、铺Matrigel胶、铺细胞（5×104个/孔），12小时后收样、拍照（左图），对数据进行统计分析（右图）。E，F、免疫印记实验检测MDA-MB-231、MCF-7细胞USP14蛋白表达的干扰效果。
第2章USP14对乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响18图2.3IU1处理抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭A，B、在MDA-MB-231和MCF-7细胞中加入IU1抑制剂处理细胞，48小时后进行划痕处理，12小时后在显微镜下观察划痕、拍照（上图），进行统计分析（下图）。C，D、在MDA-MB-231和MCF-7细胞中加入IU1，处理48小时后进行Transwell实验，12小时后收样、拍照（上图），进行统计分析（下图）。E，F、在MDA-MB-231和MCF-7细胞中，加入IU1，处理48小时后进行基质胶侵袭实验，12小时后收样、拍照（上图），进行统计分析（下图）。2.5讨论USP14是细胞中重要的去泛素化酶，在多种恶性肿瘤中均为高表达[25-33]。在肿瘤的发生发展过程中，细胞迁移是十分重要的生命现象，本部分我们首先通过蛋白质免疫印迹实验在乳腺癌细胞系中检测了USP14的蛋白表达水平，我们的研究结果表明，同其它恶性肿瘤一致，同正常乳腺上皮细胞相比，USP14在乳腺癌细胞中表达升高，这提示我们USP14可能与乳腺癌的发生发展有关。转移是肿瘤细胞主要的基本特征，我们又通过细胞划痕愈合实验、Transwell小室迁移实验以及Matrigel基质胶侵袭实验检测了USP14对乳腺癌细胞迁移能力的影响。在我们的研究中发现，敲低USP14后，乳腺癌细胞的划痕愈合能力、迁移和侵袭能力都受到明显抑制，说明USP14对乳腺癌细胞的迁移、侵袭功能具有显著影响。此外，我们采用USP14特异性抑制剂IU1处理后得到同样的结果，USP14活性被抑制后乳腺癌细胞的迁移能力同样受到阻滞，进一步说明USP14对乳腺癌细胞的迁移侵袭功能具有重要作用。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Bmi-1及E-钙黏蛋白在宫颈鳞状细胞癌中的表达及意义[J]. 赵莉莉,杨筱青. 癌症进展. 2020(02)
[2]卵巢癌及癌旁正常卵巢组织中USP2、USP14和UBE4A的差异表达[J]. 杨瑛,侯建青,曲路云,王桂青,鞠红卫,赵志伟,于振海,羊惠君. 细胞与分子免疫学杂志. 2007(06)
[3]The Ubiquitin-Proteasome System and Its Role in Inflammatory and Autoimmune Diseases[J]. Michael A.Maldonado. Cellular & Molecular Immunology. 2006(04)
本文编号：3016638
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
去泛素化酶USP14在乳腺癌细胞中呈高表达
第2章USP14对乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响16图2.2敲低USP14的表达抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭A，B、在乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中，转染USP14特异性的siRNA。48小时后进行细胞划痕实验：每隔12小时用显微镜拍照观察划痕愈合情况（左图）。利用ImageJ软件在每张图中选取五个不同的位置测量划痕宽度，而后用GraphPadPrism软件对数据进行统计分析（右图）。C、在MDA-MB-231细胞中，转染USP14特异性的siRNA，48小时后进行Transwell实验：消化细胞、细胞计数、铺到小室中（5×104个/孔），12小时后对小室进行收样、拍照（左图），对数据进行统计分析（右图）。D、在MDA-MB-231细胞中，转染USP14的siRNA，48小时后进行基质胶侵袭实验：细胞消化、计数、铺Matrigel胶、铺细胞（5×104个/孔），12小时后收样、拍照（左图），对数据进行统计分析（右图）。E，F、免疫印记实验检测MDA-MB-231、MCF-7细胞USP14蛋白表达的干扰效果。
第2章USP14对乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响18图2.3IU1处理抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭A，B、在MDA-MB-231和MCF-7细胞中加入IU1抑制剂处理细胞，48小时后进行划痕处理，12小时后在显微镜下观察划痕、拍照（上图），进行统计分析（下图）。C，D、在MDA-MB-231和MCF-7细胞中加入IU1，处理48小时后进行Transwell实验，12小时后收样、拍照（上图），进行统计分析（下图）。E，F、在MDA-MB-231和MCF-7细胞中，加入IU1，处理48小时后进行基质胶侵袭实验，12小时后收样、拍照（上图），进行统计分析（下图）。2.5讨论USP14是细胞中重要的去泛素化酶，在多种恶性肿瘤中均为高表达[25-33]。在肿瘤的发生发展过程中，细胞迁移是十分重要的生命现象，本部分我们首先通过蛋白质免疫印迹实验在乳腺癌细胞系中检测了USP14的蛋白表达水平，我们的研究结果表明，同其它恶性肿瘤一致，同正常乳腺上皮细胞相比，USP14在乳腺癌细胞中表达升高，这提示我们USP14可能与乳腺癌的发生发展有关。转移是肿瘤细胞主要的基本特征，我们又通过细胞划痕愈合实验、Transwell小室迁移实验以及Matrigel基质胶侵袭实验检测了USP14对乳腺癌细胞迁移能力的影响。在我们的研究中发现，敲低USP14后，乳腺癌细胞的划痕愈合能力、迁移和侵袭能力都受到明显抑制，说明USP14对乳腺癌细胞的迁移、侵袭功能具有显著影响。此外，我们采用USP14特异性抑制剂IU1处理后得到同样的结果，USP14活性被抑制后乳腺癌细胞的迁移能力同样受到阻滞，进一步说明USP14对乳腺癌细胞的迁移侵袭功能具有重要作用。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Bmi-1及E-钙黏蛋白在宫颈鳞状细胞癌中的表达及意义[J]. 赵莉莉,杨筱青. 癌症进展. 2020(02)
[2]卵巢癌及癌旁正常卵巢组织中USP2、USP14和UBE4A的差异表达[J]. 杨瑛,侯建青,曲路云,王桂青,鞠红卫,赵志伟,于振海,羊惠君. 细胞与分子免疫学杂志. 2007(06)
[3]The Ubiquitin-Proteasome System and Its Role in Inflammatory and Autoimmune Diseases[J]. Michael A.Maldonado. Cellular & Molecular Immunology. 2006(04)
本文编号：3016638
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