RM-1细胞源性外泌体通过CXCL12/CXCR4信号轴促进骨髓源性抑制细胞迁移至肿瘤微环境的机制
发布时间：2021-02-15 02:38
目的研究前列腺癌来源的外泌体是否通过上调趋化因子配体12（CXCL12）的特异性受体4（CXCR4）的表达从而促进MDSCs向肿瘤微环境的聚集,并探索其可能的机制。方法超高速离心法提取外泌体,电镜观察外泌体形态,WB检测表面标志蛋白。流式细胞术检测荷瘤小鼠不同时间肿瘤组织中MDSCs比例;正常小鼠尾静脉注射外泌体后,骨髓、脾脏中MDSCs的比例变化情况;以及荷瘤小鼠尾静脉分别注射PBS、外泌体、外泌体+AMD3100（CXCR4抑制剂）、AMD3100后,每组肿瘤组织中MDSCs的比例变化。Transwell趋化实验验证以上4种方法处理MDSCs后的迁移能力。WB检测外泌体共培养后MDSCs中CXCR4的表达情况。小鼠尾静脉注射外泌体后,流式细胞术检测骨髓、脾脏中MDSCs细胞群的CXCR4阳性表达情况。WB检测PBS、外泌体、外泌体+C29（TLR2抑制剂）、C29 4种方法处理MDSCs后,TLR2、p65、Pp65、CXCR4的蛋白表达情况。结果电镜及WB均表明提取物质为外泌体。MDSCs在脾脏及肿瘤组织中的比例随着荷瘤时间延长而升高。小鼠尾静脉注射外泌体后,MDSCs在骨髓、脾...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：31 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
外泌体表面标志蛋白的鉴定和电镜下观察到的典型形态
重庆医科大学硕士研究生学位论文12图2MDSCs比例随荷瘤时间延长而升高Figure2.ThepercentageofMDSCsinspleenandtumortissuewasincreasedalongwiththetumor-bearingtime.Micewereexecutedatthetimepointsof14days,21daysand28daysafterinjectedRM-1cells,thetumortissue(A,C)andspleen(B,C)weredissociatedtoinvestigatethepercentageofMDSCsbyflowcytometry.Spleeninnormalmiceasthecontrolgroup.*p<0.05,**p<0.01comparedwith14daysgroup.2.3外泌体可诱导MDSCs的扩增和迁移，CXCR4抑制剂AMD3100可在体内外抑制MDSCs的募集正常小鼠经尾静脉以每周3次的频率连续注射外泌体2周，末次注射后1天取骨髓和脾脏，流式细胞术检测CD11b+Gr-1+MDSCs比例。结果显示，注射外泌体的骨髓（Fig.3A,3B）和脾脏（Fig.3C,3D）中MDSCs的比例（分别为47.87%、9.96%）明显高于PBS组（骨髓、脾脏组织分别为43.85%、2.76%）。在荷瘤小鼠模型中，外泌体处理后的MDSCs在肿瘤组织中比例为16.76%，与PBS组（比例为8.37%）相比具有明显的募集作用。此外，外泌体加AMD3100组MDSCs的百分比为10.20%，明显低于仅注射外泌体组(图3E,3F)，提示外泌体诱导的MDSCs在体内的迁移效应可被AMD3100阻断。采用Transwell趋化实验，将上室的MDSCs分为PBS、外泌体、外泌体+AMD3100和AMD3100处理组，在下室中加入CXCL12，共培养24H。结果显示，与PBS组相比，外泌体组可诱导更多的MDSCs迁移到下室，外泌体+AMD3100组较单纯外泌体组MDSCs的迁移效应降低(图3G,3H)，与体内实验结果一致。上述结果表明，外泌体可诱导MDSCs的募集，而体内和体外用AMD3100阻
重庆医科大学硕士研究生学位论文13断CXCL12/CXCR4信号轴后，均发现由外泌体诱导的MDSCs迁移效应被明显抑制。综上所述，我们有理由认为外泌体可以通过调节CXCR4的表达，在一定程度上影响MDSCs的募集。图3外泌体能上调MDSCs的增殖和迁移能力Figure3.ExosomesinducedMDSCsexpansionandmigration.PercentageofMDSCsinBM(A,B)andspleen(C,D)wasexaminedbyflowcytometryafterinjectedexosomestonormalmice.(E,F)PercentageofMDSCsintumortissueof4treatmentgroupswasmeasuredbyflowcytometry.(G,H)ChemotaxiseffectofCXCL12toMDSCsfromBMofmiceaftertreatedwith4differentgroupsdetectedbytranswellchemotaxisassay.*p<0.05,**p<0.01comparedwithPBSgroup
本文编号：3034278
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：31 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
外泌体表面标志蛋白的鉴定和电镜下观察到的典型形态
重庆医科大学硕士研究生学位论文12图2MDSCs比例随荷瘤时间延长而升高Figure2.ThepercentageofMDSCsinspleenandtumortissuewasincreasedalongwiththetumor-bearingtime.Micewereexecutedatthetimepointsof14days,21daysand28daysafterinjectedRM-1cells,thetumortissue(A,C)andspleen(B,C)weredissociatedtoinvestigatethepercentageofMDSCsbyflowcytometry.Spleeninnormalmiceasthecontrolgroup.*p<0.05,**p<0.01comparedwith14daysgroup.2.3外泌体可诱导MDSCs的扩增和迁移，CXCR4抑制剂AMD3100可在体内外抑制MDSCs的募集正常小鼠经尾静脉以每周3次的频率连续注射外泌体2周，末次注射后1天取骨髓和脾脏，流式细胞术检测CD11b+Gr-1+MDSCs比例。结果显示，注射外泌体的骨髓（Fig.3A,3B）和脾脏（Fig.3C,3D）中MDSCs的比例（分别为47.87%、9.96%）明显高于PBS组（骨髓、脾脏组织分别为43.85%、2.76%）。在荷瘤小鼠模型中，外泌体处理后的MDSCs在肿瘤组织中比例为16.76%，与PBS组（比例为8.37%）相比具有明显的募集作用。此外，外泌体加AMD3100组MDSCs的百分比为10.20%，明显低于仅注射外泌体组(图3E,3F)，提示外泌体诱导的MDSCs在体内的迁移效应可被AMD3100阻断。采用Transwell趋化实验，将上室的MDSCs分为PBS、外泌体、外泌体+AMD3100和AMD3100处理组，在下室中加入CXCL12，共培养24H。结果显示，与PBS组相比，外泌体组可诱导更多的MDSCs迁移到下室，外泌体+AMD3100组较单纯外泌体组MDSCs的迁移效应降低(图3G,3H)，与体内实验结果一致。上述结果表明，外泌体可诱导MDSCs的募集，而体内和体外用AMD3100阻
重庆医科大学硕士研究生学位论文13断CXCL12/CXCR4信号轴后，均发现由外泌体诱导的MDSCs迁移效应被明显抑制。综上所述，我们有理由认为外泌体可以通过调节CXCR4的表达，在一定程度上影响MDSCs的募集。图3外泌体能上调MDSCs的增殖和迁移能力Figure3.ExosomesinducedMDSCsexpansionandmigration.PercentageofMDSCsinBM(A,B)andspleen(C,D)wasexaminedbyflowcytometryafterinjectedexosomestonormalmice.(E,F)PercentageofMDSCsintumortissueof4treatmentgroupswasmeasuredbyflowcytometry.(G,H)ChemotaxiseffectofCXCL12toMDSCsfromBMofmiceaftertreatedwith4differentgroupsdetectedbytranswellchemotaxisassay.*p<0.05,**p<0.01comparedwithPBSgroup
本文编号：3034278
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