从组分Ⅳ沉淀制备人血白蛋白工艺研究

发布时间：2021-02-23 05:30

　　人血白蛋白（Human Serum Albumin,HSA）是一种在人类的血浆中含量最为丰富的一种血浆可溶性蛋白质,在肾脏和肝细胞中进行转化合成,本质上是一种简单的血浆单体可溶性蛋白质,没有任何辅基和以共价碳氢键形式结合的、脂质或其他碳水化合物。临床上人血白蛋白的生物学结构性质和种类较多,包括与有机阴离子和无机阳离子的结合、与其他药物的离子耦合、药物的靶向、抗氧化活性和酶活性等。我国是世界上消耗人血白蛋白的第一大国,国内产品供不应求。虽然我国血液制品行业发展迅速,采浆量年年稳中有升。但是,进口人血白蛋白制品也在冲击着国内市场,进口制品销售占比也在逐年增长,2018年已超过60%。目前,人血白蛋白的收率在2400-3000瓶/吨血浆,提取率仅占总白蛋白的60-70%。在提取过程中,因为多种原因造成了白蛋白的流失,其中最主要流失的地方是:组分Ⅳ（Fraction IV）沉淀。因此,从组分Ⅳ沉淀中制备人血白蛋白具有非常重要的理论意义和应用价值。本学位论文以Cohn组分Ⅳ为原料,采用低温乙醇法,先在实验室制备白蛋白,其中包括:考察了组分Ⅳ溶解液白蛋白溶出、组分Ⅳ-1分离条件、组分Ⅳ-2分离条件... 

【文章来源】：山西大学山西省

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

人血白蛋白分子结构[3]

第二章从组分IV沉淀中分离提纯人血白蛋白的工艺研究14图2.2组分IV溶解液电泳扫描Figure2.2ElectrophoresisscanningofFractionIVlysate鉴于组分IV沉淀中含有一定的凝血酶原和金属离子，为了不引起凝血效应，我们选择了含有枸橼酸钠、氯化钠的乙醇溶液作为组分IV沉淀的溶解液。通过对组分IV沉淀在不同温度、不同溶解倍数、不同乙醇浓度条件下，对组分IV沉淀中蛋白质的溶出做了试验。本试验采用（L934）[42]正交试验考察3因数3个水平，按表2.2和表2.3配组进行正交试验，对组分IV的溶解液白蛋白溶出率的影响。为减少测量蛋白质含量过程中对实验结果的影响，以上条件溶解后均采用0.22μm滤膜将样品过滤，准确计量上清液体积，再对上清进行蛋白质含量和纯度的检测。根据纯度结果，计算出上清液中白蛋白，白蛋白的值作为试验结果并进行方差分析。1.3.2组分IV-1分离的最佳条件选择按照选取出组分IV溶解最佳条件，另取同批混合的组分IV溶解液，分成9份，每份100ml，按表2.5和表2.6配组进行正交试验。每份样品反应结束后继续搅拌2小时，静置4小时，再对9份样品进行0.22μm滤膜过滤，过滤上清为组分IV-1上清，准确计量体积后，取样测蛋白质含量和纯度，计算出组分IV-1上清中白蛋白的量，以白蛋白的量作为试验结果并进行方差分析。

第二章从组分IV沉淀中分离提纯人血白蛋白的工艺研究20图2.3不同浓度的氯化钠溶液透析对白蛋白溶液中铝离子含量的影响Figure2.3EffectofDifferentConcentrationsofSodiumChlorideSolutiononAluminumIonContentinAlbuminSolution3讨论3.1工艺最佳条件的确定由于组分IV沉淀蛋白质种类多，与白蛋白沉淀相似的杂蛋白也较多，结构复杂，PKA含量高，组分IV沉淀作为起始材料，在实验室获得成功的实验有时难以放大至生产规模。通过大量的试验数据对比，同时，也为了验证所选取最佳条件组合的效果，我们逐步确定了从组分IV沉淀中提取分离人血白蛋白的生产流程，以低温乙醇法为分离主要方法，经超滤、巴氏病毒灭活，获得在同类药品内在的高质量，安全性、稳定性符合消费者预期的生物制品。组分IV沉淀溶解的最佳条件为pH值6.4、乙醇浓度25%，温度0℃，其中影响因素最大的为pH值和乙醇浓度；组分IV-1的分离的最佳条件为pH值6.4、乙醇浓度38%，温度-5.5℃，其中影响因素最大的为pH值；组分IV-2的分离的最佳条件为pH值5.7、乙醇浓度42%，温度-6.0℃，其中影响因素最大的为pH值。3.2降低人血白蛋白制品中铝离子的含量应用低温乙醇法制备的人血白蛋白，由于乙醇、助滤剂、原辅料会引入乙醇、金属离子等，为了达到静脉注射的要求，脱盐、脱醇就显得很有必要。目前，国内

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3047091