基于16S rDNA技术与代谢组学探究枯草杆菌二联活菌治疗急性肝损伤的作用机制
发布时间：2021-03-04 18:13
目的:本实验通过硫代乙酰胺（TAA）建立急性肝损伤（ALI）大鼠模型,观察复合益生菌制剂（枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊LCBE）对急性肝损伤的防治作用,利用16S rDNA扩增子测序检测粪便肠道菌群变化、液相色谱质谱法检测血清代谢组学变化,并进行关联性分析,分析防治机制,为其治疗急性肝损伤提供理论依据。方法:将36只雄性SD大鼠随机分为正常对照组（Nor）、ALI组（TAA）、干预组（TAA+LCBE）,每组12只。ALI组及干预组分别以200mg/kg体重剂量的TAA于实验第6、7天对大鼠行腹腔注射制备ALI模型,对照组给予等量生理盐水腹腔注射。同时,干预组从实验第1天至实验结束,给予200mg/kg体重剂量的LCBE灌胃,每天一次,其余两组给予等量生理盐水灌胃,共8天。第9天隔夜禁食后,麻醉状态下腹主动脉取血,应用ELISA法检测ALT、ALB、TBIL反映肝功能,检测D-乳酸反映肠屏障,应用液相色谱质谱法检测血清代谢组学变化及KEGG富集分析;留取大鼠肝脏行HE染色;同时无菌操作下留取结肠远端新鲜粪便行16SrDNA扩增子测序检测肠道菌群变化。并采用Pearson统计学方法对差异菌群...
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
动物实验设计
山西医科大学（博）硕士学位论文72结果2.1肝功能变化ALI组较对照组ALT、TBIL显著升高，ALB显著下降（P＜0.05），差异有统计学意义。干预组较ALI组ALT、TBIL有下降趋势，ALB有升高趋势（P＞0.05），无显著差异。（表2-1）。表2-1各组大鼠肝功能变化（注：*表示与对照组比较P＜0.05）2.2肠道屏障功能变化以D-乳酸反映肠屏障功能，对照组、ALI组、干预组的D-乳酸水平分别为72.51±14.13ng/ml、137.23±25.33ng/ml、89.38±6.72ng/ml。其中，ALI组较对照组D-乳酸显著升高（P＜0.05），差异有统计学意义。经LCBE治疗后显著降低（P＜0.05），差异有统计学意义。（图2-1）图2-1各组大鼠D-乳酸变化直方图（注：*表示两组对比P＜0.05）2.3肝脏HE染色病理变化对照组大鼠肝小叶结构完整，肝窦结构清晰，可见汇管区，肝板及肝血窦围绕中央静脉向周围放射状排列。与对照组相比，ALI组肝板结构破坏，部分区域肝细胞可组别ALT(U/L)白蛋白（g/l）总胆红素（umol/l）对照组49.82±10.2335.23±1.865.91±3.38ALI组136.22±20.45*30.25±1.55*14.47±3.22*干预组124.1±15.7133.41±0.9510.94±4.37
山西医科大学（博）硕士学位论文8见气球样变、点状及嗜酸性坏死，肝血窦扩张，炎细胞浸润。而干预组肝小叶汇管区少量炎细胞浸润，中央静脉轻度扩张淤血，周围有少量肝细胞点状坏死。（图2-2）对照组ALI组干预组图2-2各组大鼠肝脏HE染色（×100）2.4大鼠肠道菌群16SrDNA扩增子测序结果基于IonS5TMXL测序平台，利用单端测序的方法，研究三组大鼠模型肠道菌群的变化。通过对Reads剪切过滤、质控、OTUs（OperationalTaxonomicUnits）聚类及与Silva132数据库进行物种注释，依据97%相似度水平共划分为1285个OTUs、23种菌门以及225种菌属。绘制各组OTU数目分布的韦恩（Venn）图，可以比较直观的表现样本的OTU数目组成的相似性及重叠情况。如图2-3所示，有694个OTU在三组样本中都有分布，另外有119个OTU在干预组和对照组样本中都有分布，有84个OTU在干预组和ALI组样本中都有分布，有111个OTU在对照组和ALI组样本中都有分布，即三组样本具有较高的相似性。另外，有51个OTU为干预组独有，68个OTU仅在对照组中分布，158个OTU仅在ALI组中分布，提示三组间物种分布存在差异性。进一步行Alpha多样性分析研究组内样本的物种丰富性和均一性，利用MetaStat方法进行差异物种分析探究组间群落结构差异性。
【参考文献】：
期刊论文
[1]枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊联合常规保肝治疗急性肝损伤的疗效及卫生经济学评价[J]. 陈耀明,施杨利,周柳柳. 中国医药导刊. 2019(01)
[2]枯草杆菌肠球菌二联活菌胶囊对肝硬化失代偿期患者的临床疗效[J]. 占国清,谭华炳,李儒贵,张薇薇,郭鹏,李芳. 中国微生态学杂志. 2017(10)
[3]枯草杆菌屎肠球菌二联活菌制剂对急性肝衰竭大鼠肠道微生态失调的调节作用[J]. 桂艺方,李彦伟,韩鹏飞,马淑霞. 微量元素与健康研究. 2013(02)
[4]给药硝酸钕后大鼠完整肝组织及肝组织提取物的NMR代谢组学研究[J]. 廖沛球,魏来,刘威,吴亦洁,李晓晶,倪嘉缵,裴奉奎. 高等学校化学学报. 2009(06)
[5]硫代乙酰胺建立大鼠急性肝损伤模型探讨[J]. 魏新智,付勇强,王珲,王英,孙科峰,尤春来. 临床医学工程. 2009(05)
[6]急性肝损伤血清游离氨基酸浓度变化的实验研究[J]. 陈九莉,徐柯,罗喜牛,朱德煦. 江苏医药. 1988(06)
本文编号：3063667
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
动物实验设计
山西医科大学（博）硕士学位论文72结果2.1肝功能变化ALI组较对照组ALT、TBIL显著升高，ALB显著下降（P＜0.05），差异有统计学意义。干预组较ALI组ALT、TBIL有下降趋势，ALB有升高趋势（P＞0.05），无显著差异。（表2-1）。表2-1各组大鼠肝功能变化（注：*表示与对照组比较P＜0.05）2.2肠道屏障功能变化以D-乳酸反映肠屏障功能，对照组、ALI组、干预组的D-乳酸水平分别为72.51±14.13ng/ml、137.23±25.33ng/ml、89.38±6.72ng/ml。其中，ALI组较对照组D-乳酸显著升高（P＜0.05），差异有统计学意义。经LCBE治疗后显著降低（P＜0.05），差异有统计学意义。（图2-1）图2-1各组大鼠D-乳酸变化直方图（注：*表示两组对比P＜0.05）2.3肝脏HE染色病理变化对照组大鼠肝小叶结构完整，肝窦结构清晰，可见汇管区，肝板及肝血窦围绕中央静脉向周围放射状排列。与对照组相比，ALI组肝板结构破坏，部分区域肝细胞可组别ALT(U/L)白蛋白（g/l）总胆红素（umol/l）对照组49.82±10.2335.23±1.865.91±3.38ALI组136.22±20.45*30.25±1.55*14.47±3.22*干预组124.1±15.7133.41±0.9510.94±4.37
山西医科大学（博）硕士学位论文8见气球样变、点状及嗜酸性坏死，肝血窦扩张，炎细胞浸润。而干预组肝小叶汇管区少量炎细胞浸润，中央静脉轻度扩张淤血，周围有少量肝细胞点状坏死。（图2-2）对照组ALI组干预组图2-2各组大鼠肝脏HE染色（×100）2.4大鼠肠道菌群16SrDNA扩增子测序结果基于IonS5TMXL测序平台，利用单端测序的方法，研究三组大鼠模型肠道菌群的变化。通过对Reads剪切过滤、质控、OTUs（OperationalTaxonomicUnits）聚类及与Silva132数据库进行物种注释，依据97%相似度水平共划分为1285个OTUs、23种菌门以及225种菌属。绘制各组OTU数目分布的韦恩（Venn）图，可以比较直观的表现样本的OTU数目组成的相似性及重叠情况。如图2-3所示，有694个OTU在三组样本中都有分布，另外有119个OTU在干预组和对照组样本中都有分布，有84个OTU在干预组和ALI组样本中都有分布，有111个OTU在对照组和ALI组样本中都有分布，即三组样本具有较高的相似性。另外，有51个OTU为干预组独有，68个OTU仅在对照组中分布，158个OTU仅在ALI组中分布，提示三组间物种分布存在差异性。进一步行Alpha多样性分析研究组内样本的物种丰富性和均一性，利用MetaStat方法进行差异物种分析探究组间群落结构差异性。
【参考文献】：
期刊论文
[1]枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊联合常规保肝治疗急性肝损伤的疗效及卫生经济学评价[J]. 陈耀明,施杨利,周柳柳. 中国医药导刊. 2019(01)
[2]枯草杆菌肠球菌二联活菌胶囊对肝硬化失代偿期患者的临床疗效[J]. 占国清,谭华炳,李儒贵,张薇薇,郭鹏,李芳. 中国微生态学杂志. 2017(10)
[3]枯草杆菌屎肠球菌二联活菌制剂对急性肝衰竭大鼠肠道微生态失调的调节作用[J]. 桂艺方,李彦伟,韩鹏飞,马淑霞. 微量元素与健康研究. 2013(02)
[4]给药硝酸钕后大鼠完整肝组织及肝组织提取物的NMR代谢组学研究[J]. 廖沛球,魏来,刘威,吴亦洁,李晓晶,倪嘉缵,裴奉奎. 高等学校化学学报. 2009(06)
[5]硫代乙酰胺建立大鼠急性肝损伤模型探讨[J]. 魏新智,付勇强,王珲,王英,孙科峰,尤春来. 临床医学工程. 2009(05)
[6]急性肝损伤血清游离氨基酸浓度变化的实验研究[J]. 陈九莉,徐柯,罗喜牛,朱德煦. 江苏医药. 1988(06)
本文编号：3063667
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