自噬/Nrf2信号通路在锰致睾丸间质细胞氧化损伤中的相互调控机制研究

发布时间：2021-03-11 00:47

　　目的:以小鼠睾丸间质细胞系TM3细胞为模型,研究自噬/Nrf2信号通路在锰致睾丸间质细胞氧化损伤中的相互调控作用机制,为锰中毒职业人群的防治提供理论与实验依据。方法:1.TM3细胞分别暴露于MnCl₂ 0μM（空白对照组,C）、100μM（低剂量组,L）、200μM（中剂量组,M）、300μM（高剂量组,H）24 h。观察细胞形态,MTT比色法测定细胞活力,DCFH-DA探针检测细胞内ROS（Reactive Oxygen Species）水平,TBA法检测细胞内丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量,WST-8法检测总超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）活性,总谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GPx）检测试剂盒测定总GPx活性,流式细胞仪检测Annexin V/PI双染后细胞凋亡率,透射电子显微镜观察细胞内自噬,Western blot检测自噬相关蛋白p-Beclin1、p62、LC3Ⅱ/Ⅰ、Nrf2信号通路相关蛋白Nrf2、HO-1、NQO-1及凋亡相关蛋白Active caspas... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同浓度锰对TM3细胞活力的影响

遵义医科大学硕士学位论文李娇263.2不同浓度锰暴露对TM3细胞形态的影响使用倒置相差显微镜观察不同浓度锰暴露24h后的形态。C组细胞贴壁良好，单层生长，胞体丰满，伸出突起，细胞呈梭形、多边形，随锰浓度增加，细胞突起回缩、变短甚至消失，漂浮细胞逐渐增多，说明锰浓度增加对细胞产生了毒性作用。见图2。MnCl2浓度(μM)C(0)L(100)M(200)H(300)图2倒置相差显微镜观察不同处理组的细胞形态学(标尺=100μm；→：漂浮细胞)Fig.2ThemorphologicalchangesofTM3cellsunderdifferentconcentrationsofMnCl2(Scaleplate=100μm；→：Floatingcells)3.3不同浓度MnCl2处理对TM3细胞内ROS、MDA含量的影响不同浓度MnCl2处理对TM3细胞内ROS、MDA含量的影响如图3所示。由结果可知锰暴露后细胞内ROS、MDA含量均明显升高。与C组比较，M、H组ROS、MDA含量均明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；与L组比较，H组ROS、MDA含量均明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。提示染锰后细胞内自由基含量增加，氧化作用增强。

遵义医科大学硕士学位论文李娇27图3不同处理组对TM3细胞ROS、MDA的影响Fig.3EffectsofdifferenttreatmentgroupsonROSandMDAinTM3cells.(a:P＜0.05ascomparedtogroupC;b:P＜0.05ascomparedtogroupL.TheresultsareexpressedbytheMean±S.D.ofatleastthreeindependentexperiments.)3.4不同浓度MnCl2处理对TM3细胞内总SOD和总GPx活力影响3.4.1不同浓度锰处理细胞后，细胞中总SOD和总GPx活力如图4，两者活力均明显下降。与C组比较，M、H组SOD和总GPx活力降低，差异有统计学意义(P＜0.05)；与L组比较，H组SOD和总GPx活力仍降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。说明锰暴露后细胞抗氧化酶活力降低，提示细胞抗氧化能力下降。


本文编号：3075568