甘油二酯激酶γ低表达抑制大鼠神经干细胞的增殖和迁移

发布时间：2021-03-18 23:15

　　目的:1.构建大鼠DGKγ-shRNA慢病毒表达载体;2.探究甘油二酯激酶γ（DGKγ）对神经干细胞（NSCs）增殖、迁移的影响。方法:1.同源重组法构建大鼠DGKγ-shRNA慢病毒表达载体,包装产生慢病毒并感染原代培养的大鼠NSCs,RT-qPCR和Western blotting法检测大鼠NSCs内DGKγmRNA和蛋白的表达。2.CCK-8法和神经球计数检测感染DGKγ-shRNA、PKC激动剂PMA和DGK抑制剂R59949处理后NSCs的增殖情况,并显微测量各组NSCs的迁移距离。结果:1.大鼠DGKγ-shRNA慢病毒表达载体构建及鉴定:慢病毒感染NSCs 48h后镜下观察,DGKγ-shRNA组和Scramble组NSCs均有效感染慢病毒,发出绿色荧光。RT-qPCR和Western blotting结果显示,DGKγ-shRNA组DGKγmRNA和蛋白表达显著低于Scramble组（均P<0.001）。2.DGKγ-shRNA对NSCs的增殖影响:CCK-8法检测结果显示,shRNA干扰导致的NSCs内DGKγ低表达,细胞增殖能力显著降低（P<0.05）;... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：42 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 大鼠NSCs原代培养及纯化
        1.2.2 NSCs的鉴定
        1.2.3 shRNA的设计与合成
        1.2.4 构建载体质粒
        1.2.5 慢病毒制备
        1.2.6 NSCs的分组处理
        1.2.7 RT-qPCR
        1.2.8 Western blotting
        1.2.9 NSCs增殖检测
        1.2.10 NSCs迁移检测
        1.2.11 统计学分析
2 结果
    2.1 NSCs原代培养及鉴定
    2.2 DGKγ-shRNA慢病毒表达载体构建
    2.3 DGKγ-shRNA慢病毒在NSCs的表达
    2.4 DGKγ低表达抑制了NSCs的增殖
    2.5 DGKγ低表达抑制了NSCs的迁移
3 讨论
4 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3089090