白藜芦醇对人髓母细胞瘤细胞中GRP78、ATP5B和VEGF的表达影响及其潜在生物学意义分析

发布时间：2017-04-16 16:19

  本文关键词：白藜芦醇对人髓母细胞瘤细胞中GRP78、ATP5B和VEGF的表达影响及其潜在生物学意义分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景：髓母细胞瘤是儿童最常见的恶性脑肿瘤,好发于10岁以下的儿童,绝大多数生长于第四脑室的小脑蚓部,依赖血管生成为组织提供氧气和营养,肿瘤血管分布不均、杂乱无章、缺乏基底膜、通透性高,从而促进了肿瘤浸润性生长,为肿瘤的播散转移提供了途径。目前以神经外科显微手术为主,放疗、化疗为辅的综合治疗手段日臻成熟,但要做到对颅内高度浸润的肿瘤进行根治性治疗仍然十分困难。同时大剂量的放、化疗均对患者有毒副作用,如小脑发育异常、骨髓抑制、肝功能异常和血象改变,且其毒性具有延迟性和积累性,因此探寻一种疗效可靠且无毒副作用的抗血管生成药物用来治疗髓母细胞瘤具有重要的临床意义。白藜芦醇是一种广泛存在于葡萄、花生、虎杖等70多种植物中的非黄酮类多酚化合物。它具有多种生物学活性,对机体无明显毒副作用,其脂溶性强,分子量小,极易通过血脑屏障,是一种颇具前景的肿瘤预防和治疗药物。有研究表明白藜芦醇能够通过多种途径抑制肿瘤血管生成,进而抑制肿瘤的发生发展。血管内皮生长因子(VEGF)是一种公认的血管生成过程中的关键因子,其在肺癌、乳腺癌、胶质瘤、髓母细胞瘤等多种肿瘤中过表达且与肿瘤恶性程度密切相关。葡萄糖调节蛋白78(GRP78)也称为免疫球蛋白重链结合蛋白,是一种定位于细胞内质网中的分子伴侣,表达于肺癌、胃癌、前列腺癌等多种肿瘤中,参与肿瘤转移和肿瘤血管生成。ATP5B基因主要编码ATP合成酶p亚基,是一种广泛分布于线粒体上的跨膜蛋白复合物,可异位分布于肿瘤细胞表面,参与血管生成的调节过程。目前,白藜芦醇对人髓母细胞瘤细胞中GRP78和ATP5B的调节作用尚未见报道。目的：本研究旨在探讨白藜芦醇对不同敏感性髓母细胞瘤中GRP78、ATP5B和VEGF表达的影响及生物学意义。1)探讨人髓母细胞瘤细胞系UW228-3和DAOY在白藜芦醇处理前后的反应性差异；2)检测上述两个细胞系细胞中GRP78、ATP5B和VEGF在白藜芦醇处理前后的表达改变；3)探讨白藜芦醇的抗血管生成的分子机制,分析白藜芦醇抗髓母细胞瘤敏感性差异的分子基础,以期为揭示抗血管生成药物作用靶点和髓母细胞瘤的个体化治疗提供坚实的理论基础。方法：将人髓母细胞瘤UW228-3和DAOY细胞分别培养于含10%胎牛血清的低糖DMEM和1640培养液中；用100μM白藜芦醇处理48h后收集细胞及细胞爬片,通过HE染色,MTT检测和流式细胞仪技术观察并检测细胞系UW228-3和DAOY在白藜芦醇处理前后的改变；应用双向凝胶电泳技术比较白藜芦醇处理前后髓母细胞瘤细胞系UW228-3和DAOY中的蛋白质表达情况,利用质谱技术对差异蛋白进行鉴定分析,筛选潜在的抗肿瘤血管生成药物作用靶点；通过IHC检测GRP78和ATP5B在人髓母细胞瘤组织阵列的表达情况并进行相关性分析；利用RT-PCR、ICC和Western-blotting等方法检测白藜芦醇处理前后细胞系UW228-3和DAOY细胞中GRP78、ATP5B和VEGF的表达情况。结果：1)HE染色、MTT和流式细胞仪检测结果显示,100gM白藜芦醇处理48小时后,髓母细胞瘤细胞系UW228-3的细胞数目明显减少且细胞形态发生显著变化,而白藜芦醇处理48小时前后细胞系DAOY的细胞数量与形态均未出现明显变化；2)双向凝胶电泳技术和质谱鉴定研究结果发现,白藜芦醇处理48h后细胞系DAOY中潜在的抗肿瘤血管生成药物作用靶点GRP78呈2.1倍上调,ATP5B呈3.0倍上调；3)IHC结果发现,GRP78和ATP5B在瘤旁相对正常组织中的阳性表达率较高,且与人髓母细胞瘤组织相比存在统计学差异；4)RT-PCR、ICC和Western-blotting的结果表明,白藜芦醇处理48h后细胞系UW228-3和DAOY中GRP78和ATP5B的表达均上调,且变化趋势相似,而血管生成因子VEGF的表达下调,且在敏感性细胞UW228-3中下调更为显著。结论：1)白藜芦醇在人髓母细胞瘤两种细胞系中存在抗肿瘤效应差异,相对细胞系DAOY而言,UW228-3对一定浓度的白藜芦醇反应更为敏感；2)白藜芦醇处理前后人髓母细胞瘤细胞中的蛋白表达图谱存在差异；3)白藜芦醇可以促进髓母细胞瘤细胞中GRP78和ATP5B的表达,下调、EGF的表达；4)对白藜芦醇敏感／欠敏感的细胞系中GRP78和ATP5B的表达变化趋势相似,而VEGF则在敏感性细胞中下调更为显著,可能为白藜芦醇抗血管生成的重要靶点之一。白藜芦醇处理后GRP78和ATP5B表达上调的细胞生物学意义有待进一步分析。
【关键词】：髓母细胞瘤 白藜芦醇 GRP78 ATP5B VEGF
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285
【目录】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 材料和方法14-26
• 结果26-38
• 讨论38-42
• 结论42-43
• 参考文献43-47
• 综述47-59
• 参考文献54-59
• 致谢59

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 徐庆福;李立超;朱潇鹏;Jesse Chung-Sean Pang;符星;刘景平;吕胜青;;PAPST1 siRNA抑制髓母细胞瘤细胞系DAOY增殖活性的研究[J];第三军医大学学报;2014年09期

2 杨晓非;;Wortmannin对人髓母细胞瘤细胞系Daoy增殖和凋亡的影响[J];现代肿瘤医学;2012年11期

3 ;[J];;年期

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 周永红;让癌细胞无路可逃[N];医药经济报;2002年

中国硕士学位论文全文数据库 前6条

1 王稼辉;白藜芦醇对人胶质瘤及髓母细胞瘤细胞蛋白质组调节作用的初探[D];大连医科大学;2015年

2 韩旭;白藜芦醇对人髓母细胞瘤细胞中GRP78、ATP5B和VEGF的表达影响及其潜在生物学意义分析[D];大连医科大学;2015年

3 李严;BNIP3在人髓母细胞瘤细胞中的表达研究[D];安徽医科大学;2010年

4 范少华;白藜芦醇诱导髓母细胞瘤细胞NF-κB活化的生物学意义分析[D];大连医科大学;2006年

5 王月圆;PARP-1缺失小鼠髓母细胞瘤细胞系的建立和功能分析[D];中国协和医科大学;2009年

6 刘楠;Wnt信号通路状态与白藜芦醇抗髓母细胞瘤细胞作用关系的研究[D];大连医科大学;2007年

  本文关键词：白藜芦醇对人髓母细胞瘤细胞中GRP78、ATP5B和VEGF的表达影响及其潜在生物学意义分析，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：311203