体外活化B细胞分化特异性浆细胞方法的研究及HBs Ag特异性全人源单抗的制备
发布时间：2021-04-04 02:32
第一部分体外诱导外周血记忆B淋巴细胞分化抗原特异性浆细胞方法的建立背景:新型感染性疾病因其传染性强易导致暴发流行,抗体作为免疫防治的策略之一,可以用于应急预防以及重症患者的治疗。全人源单克隆抗体（单抗）具有特异性高、毒副作用低、可大量生产等优点。新型感染性疾病爆发流行,快速筛选相应的中和抗体可以用于预防和治疗。中和抗体的制备通常采用患者恢复期外周血单个核淋巴细胞（Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）,但是患者恢复期PBMCs中特异性浆细胞含量极低,难以捕获。体外诱导PBMCs中记忆B淋巴细胞（后简称B细胞）分化抗原特异性浆细胞的方法可获得大量浆细胞用以抗体基因的提取,为全人源单抗的制备提供研究基础。目的:本研究旨在建立体外诱导外周血记忆B细胞增殖并分化抗原特异性浆细胞的方法,以期自PBMCs中获得大量抗原特异性浆细胞用以分离抗体基因,为制备高亲和力的、具有中和作用的全人源单抗药物研究提供研究基础。方法:本研究收录接种乙肝疫苗超过3年以上的健康志愿者,使用密度梯度离心法分离PBMCs,分别使用TLR7/8激动剂R848或TLR9激动剂CpG ...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：96 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同剂量的TLR7/8激动剂R848诱导记忆B细胞活化
重庆医科大学硕士研究生学位论文28B.C.图2R848诱导记忆B细胞分化为浆细胞的最早时间为了确定R848与IL-2结合在体外激活B细胞的最早时间，我们分别在第4、5和6日检测浆细胞。（A）ELISA检测不同刺激日数细胞上清中IgG分泌量（***P<0.001）。（B）ELISPOT分析不同刺激日数、不同细胞密度中ASCs的数量（不同日数下，左侧为未刺激组，右侧为刺激组，数字代表浆细胞数）。（C）细胞密度为10×103个细胞时，ELISPOT分析浆细胞分泌抗体斑点结果。Figure2TheearliesttimetoinducememoryBcellstodifferentiateintoplasmacells.TodeterminetheearliesttimethatR848incombinationwithIL-2toactivateBcellsinvitro,weculturedthePBMCsfromhealthydonorsfor4,5and6dayswithR848combinationwithIL-2.(A)ELISAdetectedIgGsecretionindifferentstimulationdays.ErrorbarsindicateSEM,representativeof3experiments,bypairedt-test(***P<0.001).(B)ELISPOTdetectedmemoryBcellexpansionanddifferentiationintoASCsondays4,5and6.Takedifferentcellnumbersforstatisticsafterdetection.(C)ELISPOTs.Thecelldensitywas10x103,ELISPOTanalyzedtheresultsofplasmacellsecretionantibodyspots.
IL-10对R848诱导的B细胞活化的影响
【参考文献】：
期刊论文
[1]Improvement in affinity and thermostability of a fully human antibody against interleukin-17A by yeast-display technology and CDR grafting[J]. Wei Sun,Zhaona Yang,Heng Lin,Ming Liu,Chenxi Zhao,Xueying Hou,Zhuowei Hu,Bing Cuin. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2019(05)
本文编号：3117565
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：96 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同剂量的TLR7/8激动剂R848诱导记忆B细胞活化
重庆医科大学硕士研究生学位论文28B.C.图2R848诱导记忆B细胞分化为浆细胞的最早时间为了确定R848与IL-2结合在体外激活B细胞的最早时间，我们分别在第4、5和6日检测浆细胞。（A）ELISA检测不同刺激日数细胞上清中IgG分泌量（***P<0.001）。（B）ELISPOT分析不同刺激日数、不同细胞密度中ASCs的数量（不同日数下，左侧为未刺激组，右侧为刺激组，数字代表浆细胞数）。（C）细胞密度为10×103个细胞时，ELISPOT分析浆细胞分泌抗体斑点结果。Figure2TheearliesttimetoinducememoryBcellstodifferentiateintoplasmacells.TodeterminetheearliesttimethatR848incombinationwithIL-2toactivateBcellsinvitro,weculturedthePBMCsfromhealthydonorsfor4,5and6dayswithR848combinationwithIL-2.(A)ELISAdetectedIgGsecretionindifferentstimulationdays.ErrorbarsindicateSEM,representativeof3experiments,bypairedt-test(***P<0.001).(B)ELISPOTdetectedmemoryBcellexpansionanddifferentiationintoASCsondays4,5and6.Takedifferentcellnumbersforstatisticsafterdetection.(C)ELISPOTs.Thecelldensitywas10x103,ELISPOTanalyzedtheresultsofplasmacellsecretionantibodyspots.
IL-10对R848诱导的B细胞活化的影响
【参考文献】：
期刊论文
[1]Improvement in affinity and thermostability of a fully human antibody against interleukin-17A by yeast-display technology and CDR grafting[J]. Wei Sun,Zhaona Yang,Heng Lin,Ming Liu,Chenxi Zhao,Xueying Hou,Zhuowei Hu,Bing Cuin. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2019(05)
本文编号：3117565
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