高脂环境结合PDTC对大鼠肝脏细胞氨基酸转运蛋白表达的影响

发布时间：2021-05-05 22:37

　　研究背景和目的研究发现2型糖尿病与胰岛素抵抗患者在空腹时血浆中支链氨基酸（branched-chain amino acid,BCAA）浓度增加,但其机制并不完全清楚。肝脏是BCAA转运及代谢的重点场所之一,血浆氨基酸进出肝细胞必然要靠氨基酸转运蛋白的协调,因此肝脏氨基酸转运蛋白很可能存在改变。另外,肥胖会导致机体出现慢性炎症反应并激活核因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）。我们既往的研究显示高脂膳食肥胖型胰岛素抵抗大鼠中血浆BCAA水平增加,而通过NF-κB信号通路抑制剂吡咯烷二硫代甲酸盐（pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）干预会降低增加的BCAA水平。进一步了解高脂环境下肝细胞氨基酸转运蛋白及氨基酸代谢情况,对研究空腹血浆支链氨基酸含量升高原由具有重要意义。本研究拟探究高脂环境下结合使用炎症抑制剂PDTC是否对肝细胞氨基酸转运蛋白的表达和细胞内氨基酸代谢有影响。材料与方法取大鼠肝细胞株BRL-3A进行细胞培养,分化后细胞血清饥饿4h后置于MEM培养基,具体分组如下:1.常规MEM（含5mmol/L葡萄糖,0.1mM软脂酸）,进一... 

【文章来源】：广州体育学院广东省

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
1 引言
2 文献综述
    2.1 2型糖尿病与肥胖的联系
    2.2 2型糖尿病与支链氨基酸的联系
    2.3 支链氨基酸的氧化代谢
    2.4 支链氨基酸相关转运蛋白系统
        2.4.1 谷氨酰胺
        2.4.2 氨基酸转运蛋白SLC38家族
    2.5 2型糖尿病与NF-κB信号通路
3 研究材料与方法
    3.1 研究对象
    3.2 主要实验仪器与耗材
        3.2.1 主要仪器与设备
        3.2.2 主要试剂和耗材
    3.3 实验技术路线
    3.4 肝细胞株BRL-3A的培养
        3.4.1 试剂配置
        3.4.2 肝细胞分化
    3.5 研究方案
    3.6 荧光定量PCR(Polymerase Chain Reaction)
        3.6.1 细胞总RNA提取
        3.6.2 RNA浓度及纯度测试
        3.6.3 逆转录反应
        3.6.4 引物扩增
        3.6.5 荧光定量PCR
        3.6.6 PCR的结果数据处理
    3.7 蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)
        3.7.1 试剂配制
        3.7.2 细胞蛋白的提取及定量
        3.7.3 WB上样样品准备
        3.7.4 SDS-PAGE电泳
        3.7.5 湿式电转膜
        3.7.6 免疫反应
        3.7.7 统计学数据处理
4 实验结果
    4.1 PDTC对高脂环境下肝细胞炎症信号影响
    4.2 PDTC对高脂环境肝细胞BCAA相关转运蛋白基因和蛋白表达结果
    4.3 PDTC对高脂环境肝细胞BCAA分解代谢相关酶的基因表达
5 讨论
    5.1 高脂环境下氨基酸转运蛋白对血浆BCAA的影响
    5.2 高脂环境下氨基酸代谢酶对血浆BCAA的影响
    5.3 PDTC对高脂环境下氨基酸转运蛋白及氨基酸代谢影响
6 结论
7 致谢
8 参考文献
9 个人简历 在读期间发表的学术论文与研究成果



本文编号：3170714