UCH-L3与LC3在急性髓系白血病中的表达及作用研究

发布时间：2017-04-24 10:00

  本文关键词：UCH-L3与LC3在急性髓系白血病中的表达及作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:急性髓系白血病(AML)是一种常见的血液恶性肿瘤,研究表明自噬与AML的发生发展密切相关,但具体机制尚未明了。越来越多的报道证明,自噬和泛素蛋白酶体系统(UPS)之间存在着活跃的联系。我们前期的蛋白质组学研究发现,使用雷帕霉素处理AML细胞后,AML细胞发生自噬性死亡,而去泛素化酶家族成员泛素羧基末端水解酶L3(Ubiquitin C-terminal Hydrolase L3,UCHL3)在自噬性死亡过程中表达上调,为了探讨UCH-L3与自噬在AML发生发展过程中的作用和相互关系,本研究在前期工作基础上,使用UCH-L3抑制剂TCID处理急性髓系白血病细胞HL-60,观察自噬的标志性基因LC3在基因和蛋白水平上的表达变化,并进一步通过临床AML患者的外周血样本分析研究UCH-L3和LC3基因的表达情况,进而为探讨自噬与UPS在白血病中的作用机制奠定基础,最终为白血病的诊断及治疗提供新的靶点和策略。方法:1.UCH-L3抑制剂TCID 100nmol/L处理HL-60细胞,Real Time PCR法检测UCH-L3抑制剂TCID处理HL-60细胞前后UCH-L3和LC3的m RNA表达变化。2.Western Blot方法检测UCH-L3抑制剂TCID处理HL-60细胞前后UCH-L3和LC3蛋白水平的变化。3.Real Time PCR方法检测健康组、AML初发组、AML缓解组及AML难治组外周血单个核细胞UCH-L3和LC3 m RNA的表达情况。4.追踪同一患者治疗前后UCH-L3及LC3 m RNA的表达变化。结果:1.利用Real Time PCR及Western Blot方法,检测经UCH-L3抑制剂TCID处理HL-60细胞后UCH-L3和LC3在基因和蛋白水平上表达均下调,差异有统计学意义(p0.05)。2.AML初发患者UCH-L3 m RNA的表达明显低于健康人,而缓解、难治患者与健康人差别无统计学意义,但初发、难治患者UCH-L3 m RNA表达明显低于缓解的,差异有统计学意义(p0.05)。3.AML初发患者自噬基因LC3 m RNA表达明显高于健康人,而缓解、难治患者与健康人差别无统计学意义,但缓解、难治患者LC3 m RNA表达明显低于初发的,差异有统计学意义(p0.05)。4.同一患者治疗前后比较,UCH-L3m RNA的表达量治疗后较治疗前上调,同时LC3 m RNA的表达量治疗后较治疗前下调,差异有统计学意义(p0.05)。结论:1.抑制UCH-L3活性后,自噬水平下调,说明在急性髓系白血病中UCH-L3和自噬有相互作用。2.UCH-L3和LC3在初发、缓解、难治患者及健康人中表达存在明显差异,说明两者在AML的发生发展过程中发挥重要作用。3.UCH-L3缓解后较初发时上调,同时LC3缓解后较初发时下调,推测AML发病过程中UCH-L3和LC3的相互关系可能与泛素-蛋白酶系统和自噬的相互作用有关。
【关键词】：自噬 LC3 UCH-L3 TCID HL-60 细胞
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.71
【目录】：

• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-13
• 材料和方法13-24
• 1. 实验材料13-16
• 1.1 细胞培养13
• 1.2 标本来源13
• 1.3 主要试剂13-14
• 1.4 主要器材14-15
• 1.5 主要试剂配制15-16
• 2. 实验方法16-23
• 2.1 细胞培养16
• 2.2 Real Time PCR法检测TCID处理HL-60细胞前后LC3和UCH-L3的mRNA表达水平16-19
• 2.3 Western Blot方法检测TCID处理HL-60细胞前后LC3和UCH-L3的蛋白表达水平19-23
• 2.4 外周血单个核细胞提取23
• 2.5 Real Time PCR法检测外周血单个核细胞LC3和UCH-L3的mRNA表达水平23
• 3. 统计学分析23-24
• 实验结果24-30
• 1. UCH-L3抑制剂TCID处理HL-60细胞前后LC3和UCH-L3 mRNA的表达变化24-25
• 2. UCH-L3抑制剂TCID处理HL-60细胞前后LC3和UCH-L3蛋白的表达变化25-26
• 3. UCH-L3及LC3在临床样本中的表达情况26-30
• 讨论30-32
• 结论32-33
• 参考文献33-35
• 综述35-46
• 参考文献41-46
• 致谢46-47

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本文编号：323948