AP4-siRNA转染对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响并肺癌病例临床分析

发布时间：2017-04-24 15:13

  本文关键词：AP4-siRNA转染对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响并肺癌病例临床分析，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:人类转录激活因子蛋白-4(AP4)在细胞凋亡、DNA修复等过程中起着至关重要的作用。国内外许多研究表明,AP4基因参与多种肿瘤的发生与发展,如肝癌、结直肠癌、胃癌、肺癌、乳腺癌等。但在肺癌中的研究甚少。本次研究,我们利用倒置显微镜观察到转染AP4 siRNA前后人肺腺癌细胞A549的形态学改变,检测了转染AP4 siRNA后肺腺癌A549细胞中AP4的蛋白和mRNA的表达量,探讨了RNA干扰AP4基因表达对人肺腺癌细胞凋亡的情况及凋亡相关蛋白表达情况。进一步为肺癌的临床治疗提供了理论依据。分析了3名肺癌患者的病例,了解早期肺癌常无明显症状而难以发现,及时发现早期肺癌的一个重要途径就是肺癌普查(影像学检查)。方法:培养人肺腺癌细胞A549,将其分成:空白对照组(B),阳性对照组(M),siRNA转染组,阴性对照组(N)等4个实验组,合成针对AP4基因的siRNA,用脂质体LipofeetamineTM2000瞬时转染人肺腺癌细胞A549,观察其细胞形态学改变,再分别采用Real-time PCR和Western blot检测AP4基因mRNA和蛋白的表达;流式细胞仪检测转染后A549细胞凋亡率,进一步探讨了凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-9蛋白的表达水平。选择3名老年肺癌患者病例,进行分析,将患者的影像学资料和术后病理报告相对比,探讨影像学检查对及早发现和及时诊治肺癌所具有的重要临床意义。结果:将AP4 siRNA成功转入A549细胞后(转染效率最高达95%),观察到转染前细胞贴壁生长良好,细胞多呈梭形,胞质饱满。转染后,细胞贴壁不佳,细胞皱缩。(1)用Real-time PCR分别检测转染AP4 siRNA24和48小时候后的A549细胞中的AP4mRNA的表达量,结果示B、M、N组AP4mRNA的表达量无明显变化,而siRNA组(430、569)AP4mRNA的表达量均明显下降(P0.05)。(2)运用Western blot检测转染AP4 siRNA24和48小时候后的A549细胞中的AP4蛋白的表达量,结果示B、M、N组AP4蛋白的表达量无明显变化,而siRNA组(284、430、569)AP4蛋白的表达量均明显下降(P0.05)。(3)运用Real-time PCR及Western blot实验,检测AP4 siRNA(284、430、569)3组干扰片段沉默的肺腺癌A549细胞AP4的表达情况,据上述结果示AP4-siRNA(569)片段沉默效率最高。(4)运用流式细胞仪检测AP4 siRNA(569)干扰片段沉默的肺腺癌A549细胞后其凋亡的情况,结果显示,B组总凋亡率5.573%±0.297%,M组总凋亡率8.896%±0.517%,N组总凋亡率6.443%±0.205%,siRNA-AP4(569)转染组总凋亡率为27.927%±0.581%,siRNA-AP4(569)转染组与B组、M组、N组相比较,结果有统计学差异(P0.05)。(5)检测相关凋亡基因Bcl-2、Caspase-9的蛋白表达水平,结果显示,转染AP4siRNA(569)组细胞的Bcl-2蛋白水平高于B、N、M组,Caspase-9的蛋白水平也高于B、N、M组,其结果被认为有统计学意义(P0.05)。尤以Caspase-9的蛋白水平升高更明显。结论:采用RNA干扰沉默人肺腺癌细胞AP4基因表达,可诱导其凋亡,可能与凋亡相关基因的表达有关。因此,AP4基因可能促进了肺癌的发生发展,其可能成为一个新的靶点在肺癌的基因治疗中。肺癌普查(影像学检查)可以及早的发现和诊断早期肺癌,能够有效的提高肺癌患者的生存率,降低其死亡率。
【关键词】：肺腺癌 A549细胞 AP4基因 细胞凋亡
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 第一部分 基础研究11-33
• （一）前言11-13
• （二）材料和方法13-20
• （三）结果20-25
• （四）讨论25-28
• （五）结论28-29
• （六）参考文献29-33
• 第二部分 肺癌临床病例分析33-35
• （一）病例摘要33-34
• （二）讨论34-35
• 综述 AP4基因与肿瘤的研究进展35-43
• 参考文献40-43
• 附录43-44
• 致谢44-45

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 向娟娟,聂新民,唐敬群,王延金,李征,甘凯,黄河,熊炜,李小玲,李桂源;磁性氧化铁纳米颗粒用于体外基因的转染及其外加磁场对于转染效率的影响[J];中华肿瘤杂志;2004年02期

2 魏丽丽;强荣兵;张楠楠;刘月月;侯颖春;;磷酸钙法转染瘤细胞效率的优化[J];陕西师范大学学报(自然科学版);2011年03期

3 张文峰;邵红伟;区裕升;黄树林;;核转染技术转染人外周血淋巴细胞效率的初步研究[J];肿瘤药学;2012年01期

4 郭佳,姚相杰,郑从义,方呈祥,屈三甫,李信墙,李卫云;丙肝病毒全基因组克隆转染细胞体系的初步研究[J];中国病毒学;2004年04期

5 付强;李友瑞;徐亚娟;张艺平;沈韵;吴昌敬;;小分子干扰核糖核酸转染小鼠成骨细胞的效率研究[J];广东牙病防治;2009年09期

6 张红梅,文姝,许晓楠,杨桦,安利佳;蛇毒类凝血酶基因转染人外周血淋巴细胞的研究[J];中国老年学杂志;2003年06期

7 曲建慧;成军;张黎影;徐东平;钟彦伟;刘妍;王琳;戴久增;张玲霞;;抑制性消减杂交技术筛选干扰素α转染HepG2细胞中上调的表达基因[J];中国新药与临床杂志;2006年01期

8 徐松柏;赵刚;许侃;候宜;于洪泉;崔阳;;血管内皮生长因子基因在兔骨髓间充质干细胞中的转染和表达[J];吉林大学学报(医学版);2007年03期

9 高聪;李威;梁兵;袁芳;谢富华;林哲聪;;三种非病毒载体对神经母瘤细胞进行转染的效果比较[J];山东医药;2012年11期

10 薛冠华;张纪蔚;张皓;张柏根;;内皮型一氧化氮合酶基因在犬内皮细胞的转染和表达[J];上海交通大学学报(医学版);2006年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 王瓞;宣海星;景乃禾;林其谁;;影响SA阳离子脂质体-DNA复合物转染效率的因素[A];第七届全国生物膜学术讨论会论文摘要汇编[C];1999年

2 赵珍珍;金先庆;罗庆;刘伟;;Mdr1转染鼠单个核细胞体外安全性研究[A];中国抗癌协会第七届全国小儿肿瘤学术会议论文汇编[C];2007年

3 庹晓晔;柴家科;冯瑞;盛志勇;;hBD3转染COS-7细胞中hBD3的诱导增强表达[A];第八届全国烧伤外科学年会论文汇编[C];2007年

4 吴媛;孙红柳;陈莉;杨琳;安威;;转染肝刺激因子基因增强肝癌细胞抗凋亡作用研究[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年

5 陈星;糜若然;伊铁忠;瞿全新;熊冬生;许元富;杨纯正;邵晓枫;范冬梅;;VEGF-C转染在宫颈癌中的表达及侵袭转移分子机制研究[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年

6 解慧琪;杨志明;邓力;李秀群;宋超;罗静聪;;不同方法转染绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-N1转染效率的比较研究[A];2005'中国修复重建外科论坛论文汇编[C];2005年

7 赵珍珍;金先庆;宿玉玺;桂琳玲;郭振华;赵利华;;Ad-EGFP-MDR1体内生物安全的实验研究[A];中国西南地区第九届小儿科学术会议论文汇编[C];2008年

8 刘珊林;;Racl转染7721人肝癌细胞与活性氧的关系[A];第五届全国自由基生物学与自由基医学学术讨论会论文摘要汇编[C];2000年

9 杨平;吴志宏;王爱丽;;重组人内皮型一氧化氮合酶基因在增生性瘢痕成纤维细胞中的表达及意义[A];第六届全国烧伤救治专题研讨会论文汇编[C];2009年

10 刘建香;苏旭;;pEgr-p16辐射诱导表达特性及抗肿瘤作用的实验研究[A];中国毒理学会放射毒理专业委员会第七次、中国毒理学会免疫毒理专业委员会第五次、中国环境诱变剂学会致突专业委员会第二次、中国环境诱变剂学会致畸专业委员会第二次、中国环境诱变剂学会致癌专业委员会第二次全国学术会议论文汇编[C];2008年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 瞿玮;多肽类靶向基因载体的制备及其转染性能研究[D];武汉大学;2012年

2 万亚峰;肝细胞癌AFPmRNA转染CD40配体活化的B细胞诱导抗肿瘤免疫的实验研究[D];华中科技大学;2010年

3 石敏;重组腺相关病毒载体介导的抗肿瘤及免疫调节作用研究[D];第一军医大学;2007年

4 吴砂;CC族趋化因子21的克隆、表达及其诱导抗瘤效应研究[D];华中科技大学;2007年

5 温剑平;PSGL-1表达细胞株的建立及其形态和生物学特性的研究[D];吉林大学;2004年

6 龚道军;CD97-siRNA转染对胃癌细胞株MKN45生物学特性的影响及其分子机制的初步研究[D];浙江大学;2009年

7 丁浩;XPD通过P53抑制乙型肝炎病毒复制、HBx表达和肝癌增殖[D];南昌大学;2012年

8 李永刚;SLC联合IL-2转染DC对膀胱癌的研究[D];兰州大学;2008年

9 王洪斌;PinX1抑制胃癌细胞增殖、增强其对5-FU敏感性及机制研究[D];第三军医大学;2009年

10 葛良鹏;提高腺病毒对猪皮肤组织转染效率的研究[D];第三军医大学;2008年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王爽;结核杆菌两个毒力因子CFP-10和ESAT-6协同对宿主细胞的影响及其机制研究[D];石河子大学;2015年

2 冯培;分枝状PEI在不同细胞系转染效率和细胞毒性间的关系[D];新乡医学院;2015年

3 李明;Toll样受体4在脑胶质瘤细胞中的表达及其作用研究[D];河北医科大学;2015年

4 李庆军;磷脂爬行酶1抑制HBV复制的分子机制研究[D];河南中医学院;2015年

5 国建;miR-103a-1对hERG编码的I_(kr)特性的作用研究[D];宁波大学;2015年

6 魏海田;转运siRNA的双靶向长循环多功能信封式纳米基因载体的研究[D];青岛大学;2015年

7 蔡伟良;腺病毒介导rhBMP-2转染兔BMSCs联合同种异体DBM构建复合材料的生物安全性研究[D];桂林医学院;2015年

8 游舒颖;AP4-siRNA转染对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响并肺癌病例临床分析[D];大连医科大学;2015年

9 张妍;重组胰岛素样生长因子转染人视网膜色素上皮细胞后促增殖能力的研究[D];吉林大学;2006年

10 武娟;转染4.1N基因对肺癌A549细胞生物学行为的影响[D];郑州大学;2012年

  本文关键词：AP4-siRNA转染对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响并肺癌病例临床分析，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：324453