Pds5b上调Ptch2抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭的研究

发布时间：2021-07-09 03:14

　　背景:胰腺癌是一种恶性程度很高的肿瘤,该病早期症状隐匿,不易察觉,易发生转移,生存率低。近年来,Pds5b被认为与肿瘤的发生发展有关,但在胰腺癌中的报道不多。此外,大量的研究认为癌症的进展与Hedgehog信号通路相关,Ptch2是Hedgehog信号通路里的关键分子,但Ptch2目前在胰腺癌中的作用尚不明确。我们的前期研究发现miR-223可通过下调Pds5b进而促进胰腺癌细胞增殖的作用,但Pds5b在胰腺癌中的功能仍不明确。因此,本文拟进一步探讨Pds5b在胰腺癌中的作用,以及可否通过调控Ptch2抑制人胰腺癌细胞的生长和转移,进而为临床胰腺癌分子靶向治疗提供理论和实验依据。目的:探讨Pds5b可否通过调控Ptch2抑制人胰腺癌细胞的生长和转移。方法:以人胰腺癌细胞株Panc-1和PaTu-8988为研究对象,转染Pds5b质粒和小干扰片段,通过蛋白免疫印记验证Pds5b过表达和敲除的效果,利用细胞增殖实验、流式细胞术、创伤愈合实验、Transwell实验观察转染后胰腺癌细胞恶性生物学行为的变化。利用免疫组化检测人胰腺癌组织中Pds5b表达及与临床预后的关系。蛋白免疫印记和qRT-... 

【文章来源】：蚌埠医学院安徽省

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Westernblot检测Pds5b表达水平（A：Westernblot检测转染Pds5b干扰片段后胰腺癌

fragment. B: Western blot detected the expression of Pds5b protein after transfected Pds5b plasmid. C, D: Quantitative analysis for A and B; ***P<0.001, compared with control; **P<0.01, compared with control) 2. Pds5b 抑制人胰腺癌细胞的增殖 为了明确 Pds5b 对胰腺癌细胞生长的影响，MTT 检测胰腺癌细胞增殖的变化。结果表明：在 PANC-1 和 Patu-8988 细胞导入 Pds5b 质粒后，与对照组相比，细胞增长显著降低（图 2A）；而敲除 Pds5b 后细胞增长明显升高（图 2B）。

24细胞转染Pds5b质粒后，与对照组相比，细胞凋亡率明显增加（见图3A）；图3.Pds5b诱导胰腺癌细胞的凋亡（A.B：流式细胞术检测过表达Pds5b诱导人胰腺癌细胞凋亡C：对A.B图的定量分析；*表示与对照组相比，P<0.05；**表示与对照组相比，P<0.01；***表示与对照组相比，P<0.001）Figure3.Pds5breducedPCcellsapoptosis.(A.B:FlowcytometryshowsPds5breducedPCcellsapoptosisafteroverexpressionC:QuantitativeresultsareshownforAandB.*P<0.05,comparedwithcontrol,**P<0.01,comparedwithcontrol***P<0.001,comparedwithcontrol)（二）Pds5b抑制胰腺癌细胞的迁移与侵袭利用划痕实验检测细胞迁移能力的变化。实验结果表明：PANC-1和Patu-8988细胞导入Pds5b质粒后，与对照组相比，细胞创伤愈合速度明显降低；当导入Pds5b干扰片段后，细胞迁移能力明显升高（见图4A和图4B）。为了进一步明确Pds5b的功能，Transwell显示，PANC-1和Patu-8988细胞导入Pds5b质粒后，细胞迁移及侵袭能力降低；当导入Pds5b干扰片段后，细胞迁移及侵袭能力明显增强（见图4C和4D）。


本文编号：3272901