MiR-29b/c在AML中的表达及参与地西他滨耐药研究

发布时间：2021-07-11 13:20

　　目的:1.本研究拟探索miR-29b/c在急性髓细胞白血病（AML）中表达状况及临床意义;2.探讨miR-29b/c在DNMT抑制剂地西他滨（DAC）耐药中的作用。方法:1.收集102例AML患者和25例健康对照的骨髓标本,提取骨髓单个核细胞;提取骨髓单个核细胞进行RNA和DNA提取,并将RNA逆转录为cDNA;DNA进行亚硫酸盐修饰。2.应用实时荧光定量PCR技术（RT-PCR）检测102例AML患者和25例健康对照的骨髓单个核细胞中miR-29b/c的表达水平,并使用SPSS20.0软件对临床数据进行统计分析。3.应用亚硫酸氢盐测序PCR方法（BSP）检测K562细胞株、K562加药株和K562耐药株（K562/DAC）和中miR-29b/c的甲基化水平。采用RT-PCR检测K562加药株、K562耐药株（K562/DAC）和K562细胞株中miR-29b/c的表达情况,分析甲基化和表达的相关性。4.构建miR-29b和miR-29c过表达质粒并通过HiperFect转染miR-29b/c低表达细胞株（K562）和DAC耐药细胞株（K562/DAC）,通过流式细胞仪和抗生素筛选获得... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一章 引言
    1.1 急性髓系白血病（AML）
    1.2 microRNA与甲基化
    1.3 地西他滨在急性髓系白血病治疗中的应用
    1.4 地西他滨耐药情况
    1.5 MiR-29b/c与地西他滨耐药
第二章 研究目的、技术、方案设计、意义
    2.1 研究目的
    2.2 研究方法及技术
        2.2.1 亚硫酸氢盐测序（Bisulfite sequencing PCR, BSP）
        2.2.2 实时荧光定量PCR（PT-PCR）
        2.2.3 细胞培养技术
        2.2.4 脂质体细胞转染技术
    2.3 研究方案设计
        2.3.1 AML临床标本中miR-29b/c表达的检测
        2.3.2 MiR-29b/c在DAC耐药中的作用
    2.4 研究的意义
第三章 材料和方法
    3.1 材料
        3.1.1 研究对象
        3.1.2 实验试剂
        3.1.3 实验仪器
        3.1.4 引物
    3.2 方法
        3.2.1 分离骨髓单个核细胞（BMMNCs）、提取总RNA与基因组DNA
        3.2.2 基因组DNA亚硫酸盐修饰
        3.2.3 RNA逆转录（reverse transcription, RT）
        3.2.4 RT-PCR检测miR-29b/c的表达水平（miScript SYBR Green PCR Kit， Qiagen）
        3.2.5 BSP检测miR-29b/c的甲基化密度
        3.2.6 PCR产物的纯化回收
        3.2.7 重组载体构建
        3.2.8 重组质粒转化
        3.2.9 重组质粒提取
        3.2.10 质粒测序
        3.2.11 阳性模板建立
        3.2.12 细胞遗传学检查
        3.2.13 基因突变检测
        3.2.14 细胞复苏
        3.2.15 细胞培养
        3.2.16 细胞传代
        3.2.17 细胞冻存
        3.2.18 细胞转染
        3.2.19 细胞计数
        3.2.20 细胞生长实验（CCK-8）
        3.2.21 半数抑制率（IC50）检测
        3.2.22 凋亡实验
        3.2.23 统计学处理
第四章 结果
    第一部分 MiR-29b/c在AML中的临床意义
        4.1.1 对照组和AML患者实验组的miR-29b/c表达水平
        4.1.2 AML中miR-29b/c表达的ROC曲线
        4.1.3 MiR-29b/c表达水平与患者的临床参数相关性
        4.1.4 MiR-29b/c表达与预后的相关性分析
    第二部分 MiR-29b/c在DAC耐药中的作用
        4.2.1 在DAC作用下miR-29b/c在K562细胞株中的表达和甲基化水平
        4.2.2 MiR-29b/c在K562/DAC的表达和甲基化水平
        4.2.3 MiR-29b/c在各个细胞株中的表达情况
        4.2.4 构建miR-29b/c稳定过表达（低表达）的白血病细胞株（耐药株）
        4.2.5 MiR-29b/c增加白血病细胞和DAC耐药株对DAC敏感性
        4.2.6 MiR-29b/c增加白血病细胞和耐药细胞对DAC的敏感性
        4.2.7 MiR-29b/c表达改变后转染株细胞凋亡变化
第五章 讨论
第六章 结论和展望
    6.1 结论
    6.2 展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的学术论文及其他科研成果
    一.发表论文
    二.获奖情况
    三.参与课题工作情况



本文编号：3278172