ADAR1参与干扰素抑制HBV作用的研究

发布时间：2021-07-22 13:33

　　目的:探讨肝癌细胞中ADAR1是否参与干扰素抑制HBV作用。方法:1.通过不同浓度Ⅰ、Ⅱ型干扰素（IFN-α:0、200、500、1000、2000U/ml、IFN-β:0、200、1000U/ml、IFN-γ:0、200、1000U/ml）以及IFN-α不同处理时间（0、2、4、8、16h）作用HepG2肝癌细胞后Western blot和RT-qPCR检测ADAR1的表达情况。2.IFN-α作用于瞬时转染HBV复制质粒的Huh7肝癌细胞,通过Southern blot检测HBV复制中间体水平,ELISA法检测HBsAg水平。3.在Huh7细胞中干扰ADAR1的表达后瞬时转染HBV复制质粒,IFN-α作用后Western blot检测ADAR1的表达情况,Southern blot检测HBV复制中间体水平。4.通过转录组测序技术分析Huh7.5.1细胞中ADAR1敲除前后相关基因的表达并验证。结果:1.mRNA水平,IFN-α和IFN-β可以诱导ADAR1的表达,且IFN-α对ADAR1的表达具有浓度依赖性,而IFN-γ未对ADAR1 mRNA水平产生影响。2.蛋白水平,IFN-α和... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

2IFN-β对ADAR1蛋白水平表达的影响（a:P<0.05b:P<0.01）

重庆医科大学硕士研究生学位论文202.2.3IFN-γ对ADAR1蛋白水平表达的影响我们通过浓度梯度0、200、1000U/ml的IFN-γ处理HepG2细胞，第二日提取细胞总蛋白，Westernblot检测ADAR1蛋白水平。结果显示IFN-γ未诱导产生ADAR1P150蛋白并且对ADAR1P110蛋白水平影响较小，未具有统计学意义。图2.2.3IFN-γ对ADAR1蛋白水平表达的影响Fig2.2.3EffectsofIFN-γonADAR1expression3讨论干扰素自1957年发现以来[30]，已逐步被证实具有调节免疫[30]、抗病毒[12,31]、影响肿瘤生长进程[12,32]等多种生物学功能。作为分泌型蛋白，IFN的表达与其刺激剂以及细胞种类等相关[30]，不同类型的干扰素通过与其配体结合激活不同的信号传导途径从而诱导产生相应的ISGs体系[10,30]。以IFN-α和IFN-β为主的Ⅰ型IFN主要通过诱导受体IFNAR1、IFNAR2二聚化[10,30]，促使IFNAR1结合链上的TYK2与IFNAR2结合链上的JAK1相互靠近发生自磷酸化和转磷酸化而被激活[11,12]，信号以STAT1依赖[12,33-35]或非依赖[36-38]的方式传导，脱离受体招募IRF9[10]，结合形成ISGF3[10]或其他复合物[36-38]，转位入核后与ISGs的上游序列中ISRE结合以调控ISGs的转录与表达[38]。IFN-γ则以反向平行二聚体的形式发挥其生物活性[30,31]，其受体为两条IFNGR1结合链和两条IFNGR2信号传导链折叠形成的复合物[31]，两者结合促使IFNGR胞内羧基末端的JAK1/JAK2交叉磷酸化[31-33]，招募

ADAR1参与IFN-α抑制HBV复制Fig2.2ADAR1intheanti-HBVmechanismsofIFN-α

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]ADAR1调控HBV复制的研究[D]. 袁琳.重庆医科大学 2018
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本文编号：3297249