基于AGEs/RAGE/NF-κB通路探讨培本固疏方治疗原发性骨质疏松症的作用机制
发布时间：2021-07-22 19:54
目的:通过观察骨质疏松症模型大鼠的骨密度、骨生物力学指标、骨代谢指标、氧化应激指标的表达,基于AGEs/RAGE/NF-κB通路探讨培本固疏方抗骨质疏松的作用机制。方法:将42只SD雌性大鼠按体重随机分为假手术组、模型对照组、培本固疏方低、中、高剂量组和西药组,每组7只。采用去双侧卵巢法建立骨质疏松模型,假手术组仅切除卵巢旁脂肪组织约1。造模4周后施行干预,大鼠等效剂量按成人每日服用剂量的6.3倍进行换算。培本固疏方低剂量组:含培本固疏方生药5.30g/Kg/d灌胃,培本固疏方中剂量组:含培本固疏方生药10.61g/Kg/d灌胃,培本固疏方高剂量组:含培本固疏方生药21.21g/Kg/d灌胃,西药组:阿仑膦酸钠水溶液1L/Kg/d灌胃。假手术组和模型对照组:给予等容量0.9%生理盐水0.5mL/100g灌胃。各组药剂均隔水温热后灌胃,灌胃持续8周后,计算子宫指数,测定股骨骨密度及股骨生物力学弹性载荷、极限载荷、弹性模量等指标;采用ELISA法测定血清骨代谢指标TRACP5b、sRANKL、OPG及氧化应激指标MDA、AGEs的含量;采用Western Blot法检测NF-κB、NFAT...
【文章来源】：南京中医药大学江苏省
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１：?ＡＧＥｓ／ＲＡＧＥ激活ＮＦ－ｋＢ信号转导通路??
?南京中医药大学硕士学位论文???－产秘』＇??：書ｖ??？?．？?ｓ＾＝４，＂??图２－１阴道涂片染色结果（ｘ３０）??１．２．２分组及干预??大鼠称重后按体重由轻到重进行编号，将体重相邻６只分为１个区组，各区组内参照??随机数字表进行随机分组，分成假手术组（Ｃ组）、模型对照组（Ｄ组）、培本固疏方低??剂量组（Ｅ组）、培本固疏方中剂量组（Ｆ组）、培本固疏方高剂量组（Ｇ组）和西药组??（Ｈ组），每组７只。各组大鼠自由饮食、自然光照，每周称重１次。各组均于造模４周??后施行干预。??大鼠用药等效剂量按成人每日服用剂量的６．?３倍进行换算。培本固疏方低剂量组：含培??本固疏方生药５．３０ｇ／Ｋｇ／ｄ灌胃，培本固疏方中剂量组：含培本固疏方生药１０．６１ｇ／Ｋｇ／ｄ灌胃，??培本固疏方高剂量组：含培本固疏方生药２１．２１ｇ／Ｋｇ／ｄ灌胃，西药组：阿仑膦酸钠水溶液??ｌｍＬ／Ｋｇ／ｄ灌胃。假手术组和模型对照组：给予等容量０．９％生理盐水０．５ｍＬ／１００?ｇ灌胃。各??组药剂均隔水温热后灌胃，持续灌胃８周：７１］。??１．２?Ｊ标本采集及测定方法??大鼠末次干预后，禁食２４ｈ，次日取材。取材前将大鼠称重，麻醉方法同造模，腹主??动脉抽血，处死。??１．２．３．１骨密度检测??仔细快速分离肌肉等软组织，取出完整左侧股骨，浸泡于含有生理盐水的标本袋中，??４°Ｃ保存。将新鲜股骨标本统一方位放于有机玻璃盒支架上固定，股骨全长的１／２处作为股??骨中段的测量点，股骨全长的中上１／４处作为股骨近端的测量点，用ＭＥＤＩＸ－９０双能Ｘ线??骨密度仪扫描，得出骨密度值（ＢＭＤ），连续测量２次，计算变异系数的均方根表示股骨
?第二部分实验研究???０?１４０?／??／？Ｔ！Ｗ＊??０１２０?／??ｗｉｗｅｃ；?／??０?１００?／??０．０８０?／??Ｚ?／??一?０．０６０?／??｜?／??０．０４０?／??０．０２０?／??０．０００?一’ｆ??????－０?２００?０?００〇／〇?２００?０?４０Ｃ?０?６００?０?８００?１?０００?１?２００?１?４００??——ｉ—?ｉ???ｎ?－?ｍ?—??－０．０２０?／??位移（ｍｍ）??图２－２载荷－位移曲线图??１．２．３．３血清代谢指标??血液标本采集后于４°Ｃ冰箱静置４－６小时，以３０００转／分钟速度离心１０分钟，取其上??清液。用酶联免疫法参照说明书逐步进行，检测血清骨代谢指标ｓＲＡＮＫＬ、ＯＰＧ、ＴＲＡＣＰ５ｂ??的含量以及氧化应激指标ＡＧＥｓ、ＭＤＡ的含量。??１．２．３．４子宫指数??仔细剔除子宫周围脂肪组织后称重，计算子宫指数。子宫指数＝子宫湿重／大鼠体重Ｘ??１００％。??１．２．３．５骨组织ＮＦ－ｋＢ蛋白及ＮＦＡＴｃ－１蛋白的表达（ＷＢ）??（１）冰箱中取出左侧股骨标本，剪下股骨近端１／５左右，剔除表面组织及骨髓等，在??预冷的ＰＢＳ中漂洗数次。称重后剪碎放进研钵中磨成粉末，放入组织匀浆器中按每２０ｍｇ??加入２００ｕｌ±２０ｕｌ裂解液，勾衆后在冰上震荡裂解３０ｍｉｎ，充分裂解至溶液清澈无粘稠。４°Ｃ??卜１２０００转／ｍｉｎ离心ｌＯｍｉｎ，取上清。??（２）用ＢＣＡ法测定蛋白浓度，而后用ＰＢＳ缓冲液调整浓度，沸水煮ｌＯｍｉｎ后放于冰??上冷却，１２０００转／ｍｉｎ离心２ｍｉｎ后取上清置于－２０°Ｃ冰箱保存。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]芪藤汤辨证加减治疗老年骨质疏松症临床研究[J]. 蔡学峰,沈晓峰. 河南中医. 2020(01)
[2]热敏灸配合针灸、电针治疗原发性骨质疏松症的临床效果及对骨转换状态的影响观察[J]. 舒伟,刘建兵. 中国医学创新. 2019(36)
[3]传统功法治疗原发性骨质疏松症临床研究进展[J]. 刘静,吴文忠,徐道明,朱璐,刘兰英,郭海英,许华宁,李邗峻,田阡陌,石雯,曹雅娜. 中国骨质疏松杂志. 2019(12)
[4]热敏灸联合针灸电针治疗原发性骨质疏松症[J]. 邓江华,刘建兵,祁本杰,万明智. 长春中医药大学学报. 2019(06)
[5]健身气功五禽戏治疗老年性骨质疏松症Meta分析[J]. 徐长力,吕浩源,张涛,肖强兵. 亚太传统医药. 2019(10)
[6]中药影响骨代谢分子机制研究进展[J]. 张妍,王健英,邢蕴蕴,刘锟,潘颖宜,袁颖. 中草药. 2019(20)
[7]针灸联合多种方法治疗骨质疏松的网状Meta分析[J]. 岑卓灏,陈洁娜,黄嘉华,石础硕,周驰,温俊茂,凌敏. 中国组织工程研究. 2020(02)
[8]简化立八段锦预防改善老年人原发性骨质疏松疗效观察[J]. 匡晓雯. 中国社区医师. 2019(28)
[9]骨形成促进剂用于骨质疏松症治疗[J]. 郑文彬,李梅. 中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志. 2019(05)
[10]太极拳锻炼防治骨质疏松症效果的Meta 分析[J]. 梁龙,韩涛,朱立国,冯敏山,展嘉文,王尚全. 中国骨质疏松杂志. 2019(09)
博士论文
[1]骨质疏松发病与Bcl-2、CXCL12基因表达的关系[D]. 庞同涛.山东大学 2018
[2]NF-κB信号通路介导下自噬参与高脂饮食大鼠颌骨代谢机制的研究[D]. 周建华.山东大学 2018
[3]基于Wnt及NF-κB信号通路探讨补肾健脾活血汤对糖尿病骨质疏松大鼠作用机制的研究[D]. 许建国.山东中医药大学 2015
[4]自噬在成骨细胞氧化应激中的作用及其与骨质疏松的关系研究[D]. 杨越华.上海交通大学 2015
硕士论文
[1]加味鹿茸四神汤治疗原发性骨质疏松症（肝肾亏虚型）的临床研究[D]. 刘文众.长春中医药大学 2019
[2]补肾健脾方对卵巢切除大鼠骨质疏松症的治疗作用及机理初探[D]. 袁丽丽.中国中医科学院 2019
[3]运动介导肌肉因子IGF-1、FGF-2对小鼠骨的影响[D]. 方幸.华东师范大学 2018
[4]易筋经运动对老年人骨密度与性激素的影响[D]. 魏玉琴.上海体育学院 2016
本文编号：3297794
【文章来源】：南京中医药大学江苏省
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１：?ＡＧＥｓ／ＲＡＧＥ激活ＮＦ－ｋＢ信号转导通路??
?南京中医药大学硕士学位论文???－产秘』＇??：書ｖ??？?．？?ｓ＾＝４，＂??图２－１阴道涂片染色结果（ｘ３０）??１．２．２分组及干预??大鼠称重后按体重由轻到重进行编号，将体重相邻６只分为１个区组，各区组内参照??随机数字表进行随机分组，分成假手术组（Ｃ组）、模型对照组（Ｄ组）、培本固疏方低??剂量组（Ｅ组）、培本固疏方中剂量组（Ｆ组）、培本固疏方高剂量组（Ｇ组）和西药组??（Ｈ组），每组７只。各组大鼠自由饮食、自然光照，每周称重１次。各组均于造模４周??后施行干预。??大鼠用药等效剂量按成人每日服用剂量的６．?３倍进行换算。培本固疏方低剂量组：含培??本固疏方生药５．３０ｇ／Ｋｇ／ｄ灌胃，培本固疏方中剂量组：含培本固疏方生药１０．６１ｇ／Ｋｇ／ｄ灌胃，??培本固疏方高剂量组：含培本固疏方生药２１．２１ｇ／Ｋｇ／ｄ灌胃，西药组：阿仑膦酸钠水溶液??ｌｍＬ／Ｋｇ／ｄ灌胃。假手术组和模型对照组：给予等容量０．９％生理盐水０．５ｍＬ／１００?ｇ灌胃。各??组药剂均隔水温热后灌胃，持续灌胃８周：７１］。??１．２?Ｊ标本采集及测定方法??大鼠末次干预后，禁食２４ｈ，次日取材。取材前将大鼠称重，麻醉方法同造模，腹主??动脉抽血，处死。??１．２．３．１骨密度检测??仔细快速分离肌肉等软组织，取出完整左侧股骨，浸泡于含有生理盐水的标本袋中，??４°Ｃ保存。将新鲜股骨标本统一方位放于有机玻璃盒支架上固定，股骨全长的１／２处作为股??骨中段的测量点，股骨全长的中上１／４处作为股骨近端的测量点，用ＭＥＤＩＸ－９０双能Ｘ线??骨密度仪扫描，得出骨密度值（ＢＭＤ），连续测量２次，计算变异系数的均方根表示股骨
?第二部分实验研究???０?１４０?／??／？Ｔ！Ｗ＊??０１２０?／??ｗｉｗｅｃ；?／??０?１００?／??０．０８０?／??Ｚ?／??一?０．０６０?／??｜?／??０．０４０?／??０．０２０?／??０．０００?一’ｆ??????－０?２００?０?００〇／〇?２００?０?４０Ｃ?０?６００?０?８００?１?０００?１?２００?１?４００??——ｉ—?ｉ???ｎ?－?ｍ?—??－０．０２０?／??位移（ｍｍ）??图２－２载荷－位移曲线图??１．２．３．３血清代谢指标??血液标本采集后于４°Ｃ冰箱静置４－６小时，以３０００转／分钟速度离心１０分钟，取其上??清液。用酶联免疫法参照说明书逐步进行，检测血清骨代谢指标ｓＲＡＮＫＬ、ＯＰＧ、ＴＲＡＣＰ５ｂ??的含量以及氧化应激指标ＡＧＥｓ、ＭＤＡ的含量。??１．２．３．４子宫指数??仔细剔除子宫周围脂肪组织后称重，计算子宫指数。子宫指数＝子宫湿重／大鼠体重Ｘ??１００％。??１．２．３．５骨组织ＮＦ－ｋＢ蛋白及ＮＦＡＴｃ－１蛋白的表达（ＷＢ）??（１）冰箱中取出左侧股骨标本，剪下股骨近端１／５左右，剔除表面组织及骨髓等，在??预冷的ＰＢＳ中漂洗数次。称重后剪碎放进研钵中磨成粉末，放入组织匀浆器中按每２０ｍｇ??加入２００ｕｌ±２０ｕｌ裂解液，勾衆后在冰上震荡裂解３０ｍｉｎ，充分裂解至溶液清澈无粘稠。４°Ｃ??卜１２０００转／ｍｉｎ离心ｌＯｍｉｎ，取上清。??（２）用ＢＣＡ法测定蛋白浓度，而后用ＰＢＳ缓冲液调整浓度，沸水煮ｌＯｍｉｎ后放于冰??上冷却，１２０００转／ｍｉｎ离心２ｍｉｎ后取上清置于－２０°Ｃ冰箱保存。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]芪藤汤辨证加减治疗老年骨质疏松症临床研究[J]. 蔡学峰,沈晓峰. 河南中医. 2020(01)
[2]热敏灸配合针灸、电针治疗原发性骨质疏松症的临床效果及对骨转换状态的影响观察[J]. 舒伟,刘建兵. 中国医学创新. 2019(36)
[3]传统功法治疗原发性骨质疏松症临床研究进展[J]. 刘静,吴文忠,徐道明,朱璐,刘兰英,郭海英,许华宁,李邗峻,田阡陌,石雯,曹雅娜. 中国骨质疏松杂志. 2019(12)
[4]热敏灸联合针灸电针治疗原发性骨质疏松症[J]. 邓江华,刘建兵,祁本杰,万明智. 长春中医药大学学报. 2019(06)
[5]健身气功五禽戏治疗老年性骨质疏松症Meta分析[J]. 徐长力,吕浩源,张涛,肖强兵. 亚太传统医药. 2019(10)
[6]中药影响骨代谢分子机制研究进展[J]. 张妍,王健英,邢蕴蕴,刘锟,潘颖宜,袁颖. 中草药. 2019(20)
[7]针灸联合多种方法治疗骨质疏松的网状Meta分析[J]. 岑卓灏,陈洁娜,黄嘉华,石础硕,周驰,温俊茂,凌敏. 中国组织工程研究. 2020(02)
[8]简化立八段锦预防改善老年人原发性骨质疏松疗效观察[J]. 匡晓雯. 中国社区医师. 2019(28)
[9]骨形成促进剂用于骨质疏松症治疗[J]. 郑文彬,李梅. 中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志. 2019(05)
[10]太极拳锻炼防治骨质疏松症效果的Meta 分析[J]. 梁龙,韩涛,朱立国,冯敏山,展嘉文,王尚全. 中国骨质疏松杂志. 2019(09)
博士论文
[1]骨质疏松发病与Bcl-2、CXCL12基因表达的关系[D]. 庞同涛.山东大学 2018
[2]NF-κB信号通路介导下自噬参与高脂饮食大鼠颌骨代谢机制的研究[D]. 周建华.山东大学 2018
[3]基于Wnt及NF-κB信号通路探讨补肾健脾活血汤对糖尿病骨质疏松大鼠作用机制的研究[D]. 许建国.山东中医药大学 2015
[4]自噬在成骨细胞氧化应激中的作用及其与骨质疏松的关系研究[D]. 杨越华.上海交通大学 2015
硕士论文
[1]加味鹿茸四神汤治疗原发性骨质疏松症（肝肾亏虚型）的临床研究[D]. 刘文众.长春中医药大学 2019
[2]补肾健脾方对卵巢切除大鼠骨质疏松症的治疗作用及机理初探[D]. 袁丽丽.中国中医科学院 2019
[3]运动介导肌肉因子IGF-1、FGF-2对小鼠骨的影响[D]. 方幸.华东师范大学 2018
[4]易筋经运动对老年人骨密度与性激素的影响[D]. 魏玉琴.上海体育学院 2016
本文编号：3297794
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