日蟾蜍它灵抑制肺癌细胞中COX-2表达机制的研究

发布时间：2017-04-27 03:10

  本文关键词：日蟾蜍它灵抑制肺癌细胞中COX-2表达机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:日蟾蜍它灵(CS-6),为中药蟾酥中主要的蟾蜍甾烯内酯类成分。由于其较为理想的代谢稳定性和较少的副作用,在癌症的治疗方面表现出极强的潜力。然而,目前对CS-6的抗肿瘤活性的作用机制仍然知之甚少。本实验探讨CS-6对肺癌A549细胞的毒性作用以及抑制细胞生长作用的分子机制。方法:在本实验中,采用MTT法检测不同浓度日蟾蜍它灵(CS-6)处理人肺癌细胞A549、H1299和H322后的细胞活力;同时也检测CS-6对人正常肺组织细胞HLF细胞活力的影响。通过细胞迁移实验,细胞集落形成实验和细胞凋亡检测,研究CS-6对非小细胞肺癌抑制作用的生物学功能。在分子机制研究中,运用激光共聚焦免疫荧光技术,DNA-蛋白质相互结合Pulldown分析方法以及染色质免疫共沉淀方法,研究CS-6作用于A549细胞,对其转录因子NF-κB p50/p65的核定位和转移及其与转录共活化子p300的相互作用,以及它们结合到COX-2启动子区域变化的影响。为了寻找CS-6的作用靶点,本实验采用分子对接方法,在体外模拟CS-6与IKKβ的相互作用。利用异种荷瘤小鼠实验,研究CS-6体内抑制肿瘤生长的活性及分子机制。采用Western blot方法检测经CS-6处理后,细胞蛋白质水平的变化。结果:日蟾蜍它灵(CS-6)能够显著抑制非小细胞肺癌中COX-2的表达,其机制为CS-6作用于IKKβ与ATP结合位点,抑制其磷酸化,从而抑制NF-κB结合到COX-2的启动子区以及p300的募集,影响转录和翻译过程。此外,CS-6还能通过激活细胞色素C和caspase依赖的细胞凋亡途径诱导肿瘤细胞的凋亡。在体内实验中,CS-6能够显著抑制异种移植裸小鼠肿瘤组织中COX-2和磷酸化NF-κB p65的表达水平,以及降低荷瘤小鼠肿瘤的大小和重量。结论:本研究发现日蟾蜍它灵(CS-6)能够显著抑制非小细胞肺癌细胞中COX-2的表达,其作用机制为抑制IKK?/NF-κB信号通路。本研究表明,日蟾蜍它灵(CS-6)具有潜在的应用价值,并可能被设计开发为治疗由COX-2介导的疾病的新药物,如肺癌。
【关键词】：日蟾蜍它灵 非小细胞肺癌 COX-2 NF-κB IKKβ
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285
【目录】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-13
• 材料和方法13-25
• 1.材料13-16
• 1.1 细胞13
• 1.2 药品及试剂13-14
• 1.3 实验仪器14-15
• 1.4 所需溶液15-16
• 2. 实验方法16-24
• 2.1 细胞培养16-17
• 2.2 MTT法测定细胞活力17
• 2.3 体外迁移实验17-18
• 2.4 克隆形成实验18
• 2.5 细胞凋亡检测18-19
• 2.6 Western blot分析19
• 2.7 激光共聚焦免疫荧光19-20
• 2.8 DNA-蛋白质相互结合Pulldown分析方法20-21
• 2.9 mRNA提取21
• 2.10 染色质共沉淀21-22
• 2.11 动物实验22-24
• 3. 统计学分析24-25
• 结果25-36
• 1. CS-6 抑制NSCLC细胞增殖并改变细胞形态25-26
• 2. CS-6 抑制NSCLC克隆形成和迁移26
• 3. CS-6 通过调节细胞色素C/ Caspase信号通路诱导凋亡26-28
• 4. CS-6 抑制NSCLC细胞中COX-2 的表达28-32
• 5. CS-6 抑制NF-κB和p300的易位及其与COX-2 启动子结合32-34
• 6. CS-6 靶向作用于ATP结合位点抑制IKKβ 的活性34-36
• 7. CS-6 在裸鼠中抑制肺癌异种移植物的生长36
• 讨论36-39
• 结论39-40
• 参考文献40-45
• 综述45-59
• 综述参考文献52-59
• 攻读学位期间发表论文情况59-60
• 致谢60-61

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