天麻素对小鼠癫痫持续状态后海马组织自噬的作用及机制
发布时间：2021-07-23 06:32
背景:癫痫是由各种原因导致的脑部神经元高度同步化异常放电的慢性脑部疾病,具有较高的患病率、致残率、死亡率。反复发作的癫痫可加重脑神经元的损伤,据报道自噬可能参与了癫痫后脑损伤的病理生理机制。适度的自噬对机体维持内环境的稳态起着不可或缺的作用,但是过度激活的自噬反而会造成机体细胞的死亡。有研究显示自噬可能是癫痫后海马神经元死亡的原因且与癫痫后脑损伤密不可分。目前临床以抗癫痫药治疗为主,但缺乏很有效的脑保护剂。因此把自噬作为靶点来寻求有效的治疗药物是今后研究中不可忽视的新方向。天麻素（GAS）,是天麻中最重要的生物活性成分,临床用于治疗头痛、头晕等疾病。有研究显示在双侧颈总动脉结扎诱导的血管性痴呆（VD）模型中,天麻素通过抑制自噬减轻海马神经元损伤。这提示我们天麻素可能通过抑制自噬减轻癫痫后脑损伤,但具体作用及机制仍需进一步研究。本研究旨在观察自噬在癫痫持续状态（SE）中的表达特点及天麻素对癫痫持续状态后脑损伤的作用,从而为探索癫痫脑损伤的发病机制及临床治疗提供新的思路和实验依据。方法:（1）本实验通过建立匹鲁卡品诱导的癫痫持续状态（SE）模型,选择56只雄性C57BL/6黑色小鼠,将小鼠...
【文章来源】：延安大学陕西省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
哺乳动物细胞内三种类型的细胞自噬Fig.1-1Threetypesofautophagyinmammaliancells
第一章引言-8-伤出血性、海人酸等癫痫模型中也被证实存在海马区神经元自噬活性增加[72]，其具体的致病机制可能为癫痫发作后诱发氧化应激，机体在氧化应激情况下，激发自噬，从而造成细胞死亡[73]。最新研究显示用高迁移率群蛋白(highmobilitygroupbox-1，HMGB1)抗体处理后可减轻癫痫大鼠海马损伤和细胞凋亡，同时伴有LC3、Beclin-1、ATG5、ATG7水平降低，而p62水平升高，说明了HMGB1可诱导癫痫小鼠自噬增加[74]。另一项研究表明尼洛替尼可能通过抑制自噬，如诱发了癫痫潜伏期的增加，降低Beclin-1的表达等，对戊四唑诱发的癫痫具有良好的神经保护和抗癫痫作用[75]。综上所述，癫痫后氧化应激被清除及通过调控自噬上游分子来抑制自噬均可能具有阻止脑损伤作用，所以自噬本身以及在自噬上游的调控，都是在今后研究新药物或者寻求新治疗靶点中不可忽视的新方向。3.天麻素天麻素（gastrosin，GAS）是一种简单的酚苷类化合物，它被认为是从天麻中提取的主要和最重要的生物活性成分[76]。自古以来，天麻素作为镇静、抗惊厥、镇痛、眩晕、癫痫、破伤风等病症的治疗药物被广泛应用于临床[77]。近年研究发现[78]天麻素对阿尔茨海默并帕金森并情感性精神障碍、脑缺血再灌注、认知障碍等中枢神经系统疾病的临床前模型治疗有效。同时，对于心血管疾病的治疗也有一定的作用，然而天麻素对癫痫脑损伤的作用尚未有研究报道，需对其作用进一步研究，为癫痫的治疗增添思路。3.1天麻素的结构及物化性质天麻素的分子式为C13H18O7，分子量为286kda，其化学结构为4-羟甲基苯甲醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，结构式如图1-2，其易溶于甲醇、乙醇和水，难溶于氯仿和乙醚。图1-2天麻素的分子结构Fig.1-2Themolecularstructureofgastrodin
天麻素对小鼠癫痫持续状态后海马组织自噬的作用及机制-23-第三章实验结果3.1癫痫持续状态小鼠模型的建立3.1.1行为学观察正常对照组未出现癫痫发作，模型组小鼠均在第一次给予匹鲁卡品后不同时间段出现咀嚼，动须；随后出现竖毛，节律性点头及洗脸样动作；之后表现为伸颈，单侧或双侧前肢阵挛、伸直和尾巴僵直；进一步出现后肢直立；最后出现全身强直-阵挛性发作伴站立、跌倒，反复发作。达到IV级-V级且反复发作均持续2小时，达到癫痫持续状态(statusepilepticus，SE)，表示造模成功。图3-1癫痫持续状态小鼠示意图Fig.3-1statusepilepticusmice3.2癫痫持续状态小鼠海马组织中Beclin-1及LC3的表达变化3.2.1癫痫持续状态小鼠海马组织中Beclin-1mRNA的表达变化小鼠SE后6h、12h、24h、48h、72h、96h取脑中海马组织，提取RNA后应用TBGreen嵌合荧光法的qRT-PCR进行检测Beclin-1mRNA的表达。结果显示，与对照组相比，小鼠海马组织的Beclin-1mRNA的表达在小鼠SE后72h达到最高，96h开始下降，但仍高于对照组（图3-2/Fig.3-2，P<0.05）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中药及其有效成分在抗癫痫中的作用与机制[J]. 袁旭,李政,王晓天,李向阳,华慧,李小翠,汤仁仙,刘晓梅. 中国中药杂志. 2019(01)
[2]天麻素对癫痫模型大鼠的抗氧化作用[J]. 钟莲梅,白永,艾青龙,陆地,吴艳芳,边立功,郭家智,邹智荣. 昆明医科大学学报. 2016(06)
[3]天麻素调控癫痫大鼠大脑皮质凋亡因子的作用研究[J]. 边立功,毕秀梅,艾青龙,郭家智,董书勤,许金美,钟莲梅,陆地. 神经解剖学杂志. 2016(01)
[4]天麻素药代动力学和组织分布特征研究[J]. 刘娜,张振兴,马金刚,张尊建,田媛. 药物分析杂志. 2015(08)
[5]细胞自噬、mTOR信号通路在癫痫研究中的进展[J]. 金首跃,武强. 临床神经病学杂志. 2015(03)
[6]自噬参与神经细胞中过表达tau和异常磷酸化tau蛋白的降解[J]. 冯利杰,张瑾,丁倩,朱娜,王鹏,沈玉君,沈玉先. 中国药理学通报. 2015(03)
[7]天麻素抑制脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞的自噬[J]. 解亚男,杨萍,文飞,孙林,陈媛丽,陆地. 解剖学报. 2014(06)
[8]天麻素对海马内Aβ1-40注射阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆的改善作用[J]. 柳星,汪萌芽. 中国临床药理学与治疗学. 2012(04)
[9]Wortmannin通过抑制癫痫大鼠海马自噬活性发挥神经保护作用[J]. 曹丽丽,董艳,徐婧婧,林幽町,迟令懿,迟兆富. 中国病理生理杂志. 2010(08)
[10]天麻素对戊四氮致癎大鼠海马代谢型谷氨酸受体1和蛋白激酶Cα表达的影响[J]. 穆朝娟,张涛,党雁. 中国临床神经科学. 2009(06)
博士论文
[1]Nrf2激动剂通过促进自噬对泛素化蛋白聚合物的清除保护氧化应激诱导的胰岛β细胞损伤的作用及机制[D]. 李文娟.山东大学 2014
硕士论文
[1]天麻素通过抑制自噬减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤的作用研究[D]. 何花.昆明医科大学 2015
本文编号：3298800
【文章来源】：延安大学陕西省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
哺乳动物细胞内三种类型的细胞自噬Fig.1-1Threetypesofautophagyinmammaliancells
第一章引言-8-伤出血性、海人酸等癫痫模型中也被证实存在海马区神经元自噬活性增加[72]，其具体的致病机制可能为癫痫发作后诱发氧化应激，机体在氧化应激情况下，激发自噬，从而造成细胞死亡[73]。最新研究显示用高迁移率群蛋白(highmobilitygroupbox-1，HMGB1)抗体处理后可减轻癫痫大鼠海马损伤和细胞凋亡，同时伴有LC3、Beclin-1、ATG5、ATG7水平降低，而p62水平升高，说明了HMGB1可诱导癫痫小鼠自噬增加[74]。另一项研究表明尼洛替尼可能通过抑制自噬，如诱发了癫痫潜伏期的增加，降低Beclin-1的表达等，对戊四唑诱发的癫痫具有良好的神经保护和抗癫痫作用[75]。综上所述，癫痫后氧化应激被清除及通过调控自噬上游分子来抑制自噬均可能具有阻止脑损伤作用，所以自噬本身以及在自噬上游的调控，都是在今后研究新药物或者寻求新治疗靶点中不可忽视的新方向。3.天麻素天麻素（gastrosin，GAS）是一种简单的酚苷类化合物，它被认为是从天麻中提取的主要和最重要的生物活性成分[76]。自古以来，天麻素作为镇静、抗惊厥、镇痛、眩晕、癫痫、破伤风等病症的治疗药物被广泛应用于临床[77]。近年研究发现[78]天麻素对阿尔茨海默并帕金森并情感性精神障碍、脑缺血再灌注、认知障碍等中枢神经系统疾病的临床前模型治疗有效。同时，对于心血管疾病的治疗也有一定的作用，然而天麻素对癫痫脑损伤的作用尚未有研究报道，需对其作用进一步研究，为癫痫的治疗增添思路。3.1天麻素的结构及物化性质天麻素的分子式为C13H18O7，分子量为286kda，其化学结构为4-羟甲基苯甲醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，结构式如图1-2，其易溶于甲醇、乙醇和水，难溶于氯仿和乙醚。图1-2天麻素的分子结构Fig.1-2Themolecularstructureofgastrodin
天麻素对小鼠癫痫持续状态后海马组织自噬的作用及机制-23-第三章实验结果3.1癫痫持续状态小鼠模型的建立3.1.1行为学观察正常对照组未出现癫痫发作，模型组小鼠均在第一次给予匹鲁卡品后不同时间段出现咀嚼，动须；随后出现竖毛，节律性点头及洗脸样动作；之后表现为伸颈，单侧或双侧前肢阵挛、伸直和尾巴僵直；进一步出现后肢直立；最后出现全身强直-阵挛性发作伴站立、跌倒，反复发作。达到IV级-V级且反复发作均持续2小时，达到癫痫持续状态(statusepilepticus，SE)，表示造模成功。图3-1癫痫持续状态小鼠示意图Fig.3-1statusepilepticusmice3.2癫痫持续状态小鼠海马组织中Beclin-1及LC3的表达变化3.2.1癫痫持续状态小鼠海马组织中Beclin-1mRNA的表达变化小鼠SE后6h、12h、24h、48h、72h、96h取脑中海马组织，提取RNA后应用TBGreen嵌合荧光法的qRT-PCR进行检测Beclin-1mRNA的表达。结果显示，与对照组相比，小鼠海马组织的Beclin-1mRNA的表达在小鼠SE后72h达到最高，96h开始下降，但仍高于对照组（图3-2/Fig.3-2，P<0.05）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中药及其有效成分在抗癫痫中的作用与机制[J]. 袁旭,李政,王晓天,李向阳,华慧,李小翠,汤仁仙,刘晓梅. 中国中药杂志. 2019(01)
[2]天麻素对癫痫模型大鼠的抗氧化作用[J]. 钟莲梅,白永,艾青龙,陆地,吴艳芳,边立功,郭家智,邹智荣. 昆明医科大学学报. 2016(06)
[3]天麻素调控癫痫大鼠大脑皮质凋亡因子的作用研究[J]. 边立功,毕秀梅,艾青龙,郭家智,董书勤,许金美,钟莲梅,陆地. 神经解剖学杂志. 2016(01)
[4]天麻素药代动力学和组织分布特征研究[J]. 刘娜,张振兴,马金刚,张尊建,田媛. 药物分析杂志. 2015(08)
[5]细胞自噬、mTOR信号通路在癫痫研究中的进展[J]. 金首跃,武强. 临床神经病学杂志. 2015(03)
[6]自噬参与神经细胞中过表达tau和异常磷酸化tau蛋白的降解[J]. 冯利杰,张瑾,丁倩,朱娜,王鹏,沈玉君,沈玉先. 中国药理学通报. 2015(03)
[7]天麻素抑制脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞的自噬[J]. 解亚男,杨萍,文飞,孙林,陈媛丽,陆地. 解剖学报. 2014(06)
[8]天麻素对海马内Aβ1-40注射阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆的改善作用[J]. 柳星,汪萌芽. 中国临床药理学与治疗学. 2012(04)
[9]Wortmannin通过抑制癫痫大鼠海马自噬活性发挥神经保护作用[J]. 曹丽丽,董艳,徐婧婧,林幽町,迟令懿,迟兆富. 中国病理生理杂志. 2010(08)
[10]天麻素对戊四氮致癎大鼠海马代谢型谷氨酸受体1和蛋白激酶Cα表达的影响[J]. 穆朝娟,张涛,党雁. 中国临床神经科学. 2009(06)
博士论文
[1]Nrf2激动剂通过促进自噬对泛素化蛋白聚合物的清除保护氧化应激诱导的胰岛β细胞损伤的作用及机制[D]. 李文娟.山东大学 2014
硕士论文
[1]天麻素通过抑制自噬减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤的作用研究[D]. 何花.昆明医科大学 2015
本文编号：3298800
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