LL-37抑制NTHi-DNA诱导的IFN-β表达且减轻小鼠肺部感染炎性损伤的初步研究
发布时间：2021-08-14 02:31
目的:证实LL-37/CRAMP是否影响NTHi-DNA诱导的IFN-β表达,并了解其对NTHi感染所致COPD模型小鼠肺部炎性损伤效应。背景:慢性阻塞性肺疾病（COPD）是中国继高血压和糖尿病之后的第三大常见慢性病。不可分型流感嗜血杆菌（NTHi）感染是导致COPD急性加重（AECOPD）的主要原因之一。对NTHi和宿主相互作用的免疫应答进行深入的研究,可为预防及治疗NTHi感染诱发的COPD急性加重提供新的理论基础。我们前期研究发现NTHi-DNA通过促进IFN-β分泌而加剧炎症反应,不利于COPD的疾病转归,但是否存在某种分子可以调控NTHi-DNA介导的免疫应答反应,从而影响COPD疾病感染的转归,目前尚不清楚。在对临床样本检测中发现,一种抗菌肽,LL-37的表达水平与COPD疾病进程密切相关。LL-37是人体内唯一的cathelicidin家族抗菌肽,在机体免疫应答反应中起着不可或缺的作用,Cathelicidin-related antimicrobial peptide（CRAMP）则是其在小鼠中的唯一同系物。我们在体外实验的初步研究中也观察到,当RAW264.7细胞受到...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
NTHi-DNA诱导RAW264.7细胞中LL-37/CRAMP的表达增加Figure1-1NTHi-DNAcanpromoteLL-37/CRAMPexpressioninRAW264.7cellsFigure1-1.A.RAW264.7cellsweretransfectedwithNTHi-DNA(1.5μg/ml)orinfectedbyNTHi
重庆医科大学硕士研究生学位论文18图1-2LL-37/CRAMP促进RAW264.7细胞对NTHi的杀伤效应Figure1-2LL-37/CRAMPcanpromotethekillingeffectofRAW264.7cellsonNTHiFigure1-2.RAW264.7cellswerepre-incubatedwithmediaaloneorLL-37/CRAMP(15μg/ml)overnight,andsubsequentlyinfectedwithNTHiataMOIof100.Bacterialplatecountwasusedtodetectthephagocyticcapacityandintracellularbacterialkillingofmacrophages.p<0.05(*)wasconsideredstatisticallysignificant.3讨论NTHi感染是诱发COPD急性加重的主要原因之一，现有治疗方法，如吸入支气管扩张剂和糖皮质激素等，往往难以控制病情发展[3,17]。NTHi入侵宿主后，细菌内化进入胞内，细胞受体cGAS识别NTHi-DNA而活化STING信号通路，介导细胞IFN-β的表达[8]。我们进一步研究发现，NTHi-DNA诱导的IFN-β会加重模拟COPD疾病模型小鼠的肺部炎症反应，不利于COPD小鼠对抗细菌感染的转归[9]。为此，我们好奇宿主是否存在一种调控分子或机制，能够平衡NTHi-DNA介导的过度炎症反应呢？通过检测临床样本，前人发现抗菌肽LL-37/CRAMP的表达水平随COPD病程进展变化，并且与NTHi感染密切相关[10]。最初，LL-37/CRAMP是作为具有抗菌作用的小分子多肽被发现的，可保护宿主免受结核分枝杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌等大多数微生物的侵袭[15]。LL-37/CRAMP具有α-螺旋结构的阳离子抗菌肽，可以通过电荷吸引作用与细菌某些带负电的细胞壁成分结合，然后抗菌肽迅速插入细菌膜中，引起细菌溶解和死亡[18]。由此可知，宿主抵御病原微生物侵袭时LL-37/CRAMP可以发挥重要的调节效应，但其对不同微生物感染的作用可能是复杂和截然不同的。因此，对病原微生物感染时LL-37/CRAMP的作用
2.1 外源性 LL-37/CRAMP 抑制 NTHi-DNA 介导的 IFN-β 表达 为了研究抗菌肽在 NTHi-DNA 介导的免疫反应中的是否影响 IFN-β 表达，用NTHi 或 NTHi-DNA 刺激 RAW264.7 细胞，随后外源给予 LL-37/CRAMP，通过real-time PCR 和 ELISA 检测了 IFN-β 的表达水平，其中 poly(dA:dT)组作为阳性对照， CRAMP 组和 Lipo2000 组是试剂对照组。实验结果显示，与 NC 组、CRAMP组和 Lipo2000 组相比， NTHi 或 NTHi-DNA 的刺激可诱导大量 IFN-β 分泌(图 2-1 A,B)。外源性 LL-37/CRAMP 给予则可使 NTHi 或 NTHi-DNA 诱导的 IFN-β 表达显著下调(图 2-1 A,B)。
本文编号：3341589
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
NTHi-DNA诱导RAW264.7细胞中LL-37/CRAMP的表达增加Figure1-1NTHi-DNAcanpromoteLL-37/CRAMPexpressioninRAW264.7cellsFigure1-1.A.RAW264.7cellsweretransfectedwithNTHi-DNA(1.5μg/ml)orinfectedbyNTHi
重庆医科大学硕士研究生学位论文18图1-2LL-37/CRAMP促进RAW264.7细胞对NTHi的杀伤效应Figure1-2LL-37/CRAMPcanpromotethekillingeffectofRAW264.7cellsonNTHiFigure1-2.RAW264.7cellswerepre-incubatedwithmediaaloneorLL-37/CRAMP(15μg/ml)overnight,andsubsequentlyinfectedwithNTHiataMOIof100.Bacterialplatecountwasusedtodetectthephagocyticcapacityandintracellularbacterialkillingofmacrophages.p<0.05(*)wasconsideredstatisticallysignificant.3讨论NTHi感染是诱发COPD急性加重的主要原因之一，现有治疗方法，如吸入支气管扩张剂和糖皮质激素等，往往难以控制病情发展[3,17]。NTHi入侵宿主后，细菌内化进入胞内，细胞受体cGAS识别NTHi-DNA而活化STING信号通路，介导细胞IFN-β的表达[8]。我们进一步研究发现，NTHi-DNA诱导的IFN-β会加重模拟COPD疾病模型小鼠的肺部炎症反应，不利于COPD小鼠对抗细菌感染的转归[9]。为此，我们好奇宿主是否存在一种调控分子或机制，能够平衡NTHi-DNA介导的过度炎症反应呢？通过检测临床样本，前人发现抗菌肽LL-37/CRAMP的表达水平随COPD病程进展变化，并且与NTHi感染密切相关[10]。最初，LL-37/CRAMP是作为具有抗菌作用的小分子多肽被发现的，可保护宿主免受结核分枝杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌等大多数微生物的侵袭[15]。LL-37/CRAMP具有α-螺旋结构的阳离子抗菌肽，可以通过电荷吸引作用与细菌某些带负电的细胞壁成分结合，然后抗菌肽迅速插入细菌膜中，引起细菌溶解和死亡[18]。由此可知，宿主抵御病原微生物侵袭时LL-37/CRAMP可以发挥重要的调节效应，但其对不同微生物感染的作用可能是复杂和截然不同的。因此，对病原微生物感染时LL-37/CRAMP的作用
2.1 外源性 LL-37/CRAMP 抑制 NTHi-DNA 介导的 IFN-β 表达 为了研究抗菌肽在 NTHi-DNA 介导的免疫反应中的是否影响 IFN-β 表达，用NTHi 或 NTHi-DNA 刺激 RAW264.7 细胞，随后外源给予 LL-37/CRAMP，通过real-time PCR 和 ELISA 检测了 IFN-β 的表达水平，其中 poly(dA:dT)组作为阳性对照， CRAMP 组和 Lipo2000 组是试剂对照组。实验结果显示，与 NC 组、CRAMP组和 Lipo2000 组相比， NTHi 或 NTHi-DNA 的刺激可诱导大量 IFN-β 分泌(图 2-1 A,B)。外源性 LL-37/CRAMP 给予则可使 NTHi 或 NTHi-DNA 诱导的 IFN-β 表达显著下调(图 2-1 A,B)。
本文编号：3341589
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